金银花多糖的提取工艺及含量测定研究

【摘 要】目的：优化金银花多糖的提取工艺并对多糖的含量测定进行研究。方法：采用苯酚-硫酸法测定多糖含量，水提醇沉法制备粗多糖，Sevag去蛋白法对多糖进行精制，以金银花总多糖提取率为指标，优选最佳提取工艺，并采用正交试验法对优选的最佳工艺参数进行优化。结果：影响金银花多糖提取率的各因素关系为：提取温度>溶剂倍量>提取时间>提取次数；最佳提取工艺为：提取温度90℃，提取时间为1.5h，提取次数为2次，溶剂倍量为15倍量，多糖提取率为9.61%。结论：优选的工艺操作简便，多糖提取率高。

【关键词】金银花多糖；提取工艺；含量测定

【中图分类号】R282.4 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2012）12-0011-02

金银花为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或带初开的花[1-2]。已有报道称多糖是金银花中有效成分之一，并有抗癌、抗肿瘤、提高人体免疫力等多种作用[3]，目前国内对金银花多糖方面的研究仍较少。金银花的多糖提取工艺及含量测定研究有利于新的药效部位的开发，为金银花多糖的开发应用提供理论依据。

1 材料与仪器

AB135-S型电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；UV-1100型双光束紫外-可见分光光度仪（上海天美科学仪器有限公司）；R1002型旋转蒸发仪（上海申顺生物科技有限公司）；TDL-5-A型台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；金银花药材购自济南建联中药有限公司，经鉴定为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾；D-无水葡萄糖（中国药品生物制品检定所，批号110833-200503）；苯酚、硫酸等试剂均为分析纯，水为去离子水。

2 方法与结果

2.1 金银花多糖含量测定

2.1.1 含量测定方法

D-无水葡糖糖作为标准品配制标准品溶液，采用苯酚-硫酸法[4]测定金银花提取物中总多糖的含量。

金银花总多糖提取率=提取物中总多糖含量/样品中总多糖含量×100%

2.1.2 标准曲线的绘制

精密称定105℃干燥至恒重的无水葡萄糖10.25 mg置100mL容量瓶中，加纯净水稀释至刻度，备用。分别精密量取葡萄糖标准溶液0.0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mL置10mL具塞试管中，加入1.6 mL5%苯酚溶液，再加入7mL浓硫酸于溶液表面，摇匀，沸水浴加热15 min，冷却20min后再加蒸馏水定容至相同体积，放置30 min，于最大吸收波长下测定吸光度A，以吸光度A为纵坐标，葡萄糖标准液浓度C为横坐标绘制标准曲线，得到回归方程A=48.1375C+0.1172，R=0.9995。

2.1.3 多糖的含量测定

精密称取制得的多糖适量，置于100mL容量瓶中，精密量取5mL于50mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀。精密量取供试液0.6mL于10mL具塞试管中，按2.1.2方法测定吸光度，并计算多糖含量。

2.2 金银花多糖的制备

采用本试验优选的最佳提取工艺提取金银花多糖。即向金银花药材中加入15倍量的水90℃提取2次，每次1.5h。提取液过滤，滤液浓缩至体积适量后，加入95%乙醇使含醇量达75%，静置过夜，沉淀用无水乙醇冲洗、干燥即得多糖粗品。对制得的粗多糖采用Sevag法去蛋白：将粗多糖溶于10倍量蒸馏水中，加入Sevag试剂（氯仿-正丁醇，25：5）萃取，重复操作至两相界面无变性蛋白产生为止。将萃取后的多糖溶液浓缩至适当体积，醇沉、洗涤、干燥得精制多糖。

2.3 金银花多糖提取工艺参数正交优选

在单因素考察的基础上，以多糖提取率为指标，对提取温度（A）、提取次数（B）、溶剂倍量（C）及提取时间（D）4因素进行考察，选用L9（34）正交表进行试验，正交试验设计见表1，正交试验结果见表2，方差分析见表3。

由上表可知各因素影响主次顺序为：A>C>D>B，即提取温度>溶剂倍量>提取时间>提取次数。方差分析结果表明，A即提取温度为主要影响因素（P

2.4 验证试验

按照确定的最佳工艺进行3次试验，结果金银花多糖的提取率分别为：9.42%、9.53%和9.58%，证明确定的最佳工艺合理、可行。

3讨论

目前，金银花已广泛用于针剂、口服液、胶囊等药品及保健食品、饮料，具有很高的开发利用价值，但是有关金银花多糖方面的报道极少。通过本试验的研究，对于金银花的深加工及综合利用具有重要意义。

参考文献：

[1] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典一部[S].北京：化学工业出版社，2010.

[2] 殷洪梅，吕新勇，萧伟.金银花多糖的制备工艺优化及免疫活性研究[J].中国中药杂志，2010，35（4）：453-455.

[3] 芦绪芳.金银花的研究现状[J].时珍国医国药，2006，17（5）：843-844.

[4] 张青，张天民.苯酚-硫酸比色法测定多糖含量[J].山东食品科技，2004，（7）：17.