磷源对肉鸡胫骨发育不佳的影响

【摘要】1．3试验设计与饲养管理试验1～21d采用2因子试验设计，按磷源的不同分为2个处理(磷源DCP和MDCP)，每个处理60只鸡;试验22～42d采用2×2因子设计，将每种磷源按福美双的添加水平不同再...

本文作者：涂广运 白世平 张克英 彭 西 丁雪梅 曾秋凤 单位：四川农业大学动物营养所 教育部抗病营养重点实验室

磷酸一二钙(mono-dicalciumphosphate，MD-CP)是磷酸二氢钙(monocalciumphosphate，MCP)与磷酸氢钙(dicalciumphosphate，DCP)的共结晶结合物，呈颗粒状，是一种水溶性磷酸盐与枸溶性磷酸盐相结合的新型饲料添加剂［1］。肉鸡胫骨软骨发育不良(tibiadyschondroplasia，TD)是造成肉鸡腿病的主要因素，肉鸡腿病每年给美国肉鸡产业造成8000万到1．2亿美元的损失［2］，因此，研究MDCP对肉鸡TD的影响对其生产应用具有很大的现实意义。MDCP能够代替DCP作为蛋鸡的磷源［3］，以生产性能为考察指标，其在蛋鸡上的相对生物学效价也较DCP要高［4］，但MDCP对肉鸡TD的影响尚未见任何报道。饲粮电解质平衡可能通过改变血液酸碱平衡从而影响肉鸡TD的发生［5］，MDCP较DCP酸性要强，二者对肉鸡TD发生的影响可能不同。自然条件下，肉鸡TD发生率较低，不同磷源对肉鸡TD的影响差别较小。福美双能够显著升高肉鸡TD发病率［6－7］，用福美双建立肉鸡TD模型，从而有利于比较不同磷源对缓解肉鸡TD发生的作用。本试验通过比较不同磷源对福美双诱导的肉鸡TD及骨骼钙、磷代谢的影响，为MDCP在肉鸡上的生产应用提供试验依据。

1材料与方法

1．1试验材料DCP(钙含量为19．31%，磷含量为17．96%)购自四川龙莽集团，MDCP(钙含量为16．10%，磷含量为20．87%)购自川恒化工有限公司，福美双购自成都贝斯特试剂有限公司，分析纯。

1．2试验动物及基础饲粮选取1日龄科宝(Cobb)肉雏鸡120只，购自成都温江正大鸡场。基础饲粮参照中华人民共和国农业行业标准(NY/T33—2004)中白羽肉鸡营养需要配制，粉状料，其组成及营养水平见表1。

1．3试验设计与饲养管理试验1～21d采用2因子试验设计，按磷源的不同分为2个处理(磷源DCP和MDCP)，每个处理60只鸡;试验22～42d采用2×2因子设计，将每种磷源按福美双的添加水平不同再分为2个处理(福美双水平为0和100mg/kg)，每个处理3个重复，每个重复10只鸡。肉鸡TD诱导参考Rath等［6］，具体做法为福美双组在基础饲粮中添加100mg/kg福美双，于22～28d饲喂，然后换喂对应不含福美双饲粮。在试验第28、35和42天，从各处理选取1个重复，共10只鸡，颈静脉采血10mL，3600r/min离心10min，然后分离血清，－20℃冰箱保存待测;CO2处死后，分离两侧胫骨，－20℃冰箱保存待测。试鸡采用笼养，自由采食和饮水。

1．4测定指标

1．4．1生长性能在试验第21和28天，试鸡以重复为单位进行称重，并结算采食量，计算平均日采食量和料重比。

1．4．2血清指标每个处理从采样的10只鸡中随机选取6只鸡的血清进行测定。血清钙、磷含量测定采用比色法，试剂盒购自南京建成生物工程研究所。血清甲状旁腺素(PTH)和降钙素(CT)含量测定采用放射性免疫法，试剂盒分别购自原子高科有限公司和天津九鼎生物医学工程有限公司。

1．4．3TD评分和胫骨指标每个处理选取10只鸡，分离右侧胫骨，纵切，照相，进行TD评分，参考Edwards等［8］方法进行(TD评分包括0、1、2、3，0代表正常，分数越高，发病越严重)。每个处理从采样的10只鸡中随机选取8只鸡，分离左侧胫骨，去除肌肉和筋膜，脱脂，105℃烘干后，粉碎，过40目筛，进行灰分、钙、磷含量的测定，测定方法参考张丽英［9］的方法，其中胫骨钙和磷含量分别采用EDTA滴定法和钼黄比色法测定。

1．5统计分析采用SPSS16．0统计软件GLM程序进行多因素方差分析，Duncan氏法进行多重比较，试验效应包括磷源、福美双添加水平及二者的互作，以P＜0．05为差异显著性检验标准，结果以平均值±标准差表示，并且对肉鸡胫骨灰分含量随试验天数的变化进行多项式曲线拟合。

2结果

2．1磷源对福美双诱导条件下肉鸡生长性能和TD评分的影响

2．1．1生长性能由表2可知，福美双显著降低了肉鸡第28天平均体重(P＜0．05)，显著降低了22～28d平均日采食量(P＜0．05)，显著提高了22～28d料重比(P＜0．05)。

2．1．2TD评分由图1可知，与对照组(未添加福美双)相比，福美双组肉鸡第28天出现跛行，胫骨剖检发现生长板明显加宽，且出现断裂层，第35和42天时，胫骨干骺端出现明显软骨楔，显示TD模型诱导成功。由表3可知，MDCP组肉鸡第35天TD得分相对DCP组有降低的趋势(P=0．09)，福美双显著提高了肉鸡第28、35、42天TD得分(P＜0．05)，福美双和磷源之间对肉鸡各阶段TD得分交互效应差异不显著(P＞0．05)。

2．2磷源对福美双诱导条件下肉鸡胫骨灰分、钙、磷含量的影响

2．2．1肉鸡胫骨灰分、钙、磷含量由表4可知，福美双诱导条件下，MDCP组肉鸡第35天胫骨灰分、钙、磷含量显著高于DCP组(P＜0．05);福美双显著降低了肉鸡第28和35天胫骨灰分、钙、磷含量(P＜0．05)，有降低肉鸡第42天胫骨钙含量的趋势(P=0．06);磷源和福美双对肉鸡第35天胫骨灰分、钙、磷含量具有显著的互作效应(P＜0．05)。

2．2．2肉鸡胫骨灰分含量随试验天数变化由图2可知，不添加福美双时，DCP组和MD-CP组肉鸡胫骨灰分含量随试验天数增加，呈轻微下降趋势;福美双诱导条件下，DCP组和MDCP组肉鸡胫骨灰分含量随试验天数增加显著下降，第35天时最低，而后上升，并且DCP组肉鸡下降的速度更快。

2．3磷源对福美双诱导条件下肉鸡血清PTH、CT、钙和磷含量的影响

2．3．1血清PTH和CT含量由表5可知，福美双诱导条件下，MDCP组肉鸡第35天血清CT含量显著低于DCP组(P＜0．05)，而DCP组肉鸡第42天血清CT含量相对MDCP组有降低的趋势(P=0．06)，MDCP组肉鸡第35天血清PTH含量低于DCP组(P=0．12);福美双显著升高了肉鸡第28天血清PTH含量和第42天血清CT含量(P＜0．05)，福美双和磷源对肉鸡第35天血清CT含量交互效应有显著的趋势(P=0．06)。

2．3．2血清钙、磷含量由表6可知，福美双显著升高了肉鸡第28和35天血清钙含量(P＜0．05)，有降低肉鸡第28天(P=0．08)和第35天(P=0．06)血清磷含量的趋势;福美双和磷源对各阶段血清钙、磷含量交互效应不显著(P＞0．05)。

3讨论

3．1磷源对肉鸡生长性能和TD评分的影响Rath等［6］研究报道，福美双能够显著降低肉鸡的生长性能，提高TD评分，本研究结果与前人一致。MDCP组肉鸡第35天TD评分相对DCP组有降低的趋势。由表4可知，福美双诱导下，MDCP组肉鸡第35天胫骨灰分、钙、磷含量显著高于DCP组，显示肉鸡TD评分情况与其胫骨质量相关。Edwards等［8］报道，TD发生与胫骨灰分无显著相关性，本试验结果与其不一致，可能是由于诱导方法不同，Edwards等［8］采用高磷低钙饲粮诱导，而本研究采用福美双诱导。相对DCP，MDCP对肉鸡TD的发生过程起到一个缓解的作用，并不能降低其最终TD评分。MDCP相对生物学效价较DCP要高，说明MDCP的磷的利用率较高，但肉鸡最终TD评分只与饲粮钙、磷含量有关，而与钙、磷利用率无明显相关。

3．2磷源对肉鸡胫骨灰分、钙、磷含量的影响肉鸡采食福美双饲粮后，第28和35天胫骨灰分、钙、磷含量显著降低。Rath等［10］在研究维生素D3及其代谢物抗福美双诱导TD效果时发现，部分处理鸡只采食福美双后，胫骨灰分含量显著降低，本试验结果与其一致。不添加福美双时，DCP组肉鸡第35天除胫骨磷含量显著高于MD-CP组外，其余胫骨指标二者均差异不显著;添加福美双时，MDCP组肉鸡第35天胫骨灰分、钙、磷含量显著高于DCP组。福美双诱导下，肉鸡对2种磷源更敏感，胫骨指标和TD评分从而表现出差异。不添加福美双时，2种磷源组肉鸡第35天血清PTH含量无差异;添加福美双时，DCP组第35天肉鸡血清PTH含量高于MDCP组。福美双诱导条件下，不同磷源可能通过影响肉鸡激素的分泌，从而影响其TD评分和胫骨指标。骨骼作为机体矿物元素的储备库，能起到维持机体元素稳态的作用，血清PTH大量分泌，造成骨骼动员，破骨细胞活性增强，胫骨钙、磷大量释放到血液中，从而导致胫骨灰分、钙、磷含量降低。DeGroote等［11］在肉公鸡上以趾骨灰分为考察指标，发现MCP和DCP的相对生物学效价分别为100和93。Waibei等［12］在火鸡上，以胫骨灰分为考察指标，发现MCP相对生物学效价高于DCP。MDCP作为MCP和DCP的共结晶结合物，相对生物学效价也应要高，本试验第35天胫骨灰分含量结果与上述试验一致。不添加福美双时，2种磷源对肉鸡胫骨灰分含量的影响规律一致;添加福美双时，DCP组肉鸡第35天胫骨灰分含量下降幅度更大，进一步说明了不同磷源对肉鸡TD评分的影响与其影响胫骨指标有关。

3．3磷源对肉鸡血清PTH、CT、钙和磷含量的影响原发性甲状旁腺功能亢进症(primaryhyper-parathyroidism，PHPT)是一种人的内分泌代谢疾病，患者表现为骨关节疼痛、骨质疏松等，且血液PTH、碱性磷酸酶和钙含量升高，血液磷含量降低［13－14］。肉鸡采食福美双饲粮后，第28天血清PTH和钙含量显著升高，血清磷含量降低，产生了甲状旁腺功能亢进症，可能与其诱发肉鸡TD有关。福美双诱导条件下，MDCP组肉鸡第35天TD评分高于DCP组，而DCP组肉鸡第35天血清PTH含量高于MDCP组。磷源对肉鸡TD评分的影响，可能与其血清PTH含量不同有关，PTH越高，TD得分越高，具体原因可能是2种磷源对福美双诱导甲状旁腺功能亢进减缓程度不同。福美双诱导条件下，MDCP组肉鸡第35天血清CT含量显著低于DCP组，而福美双显著升高了第42天肉鸡血清CT含量。由表3可知，MDCP组肉鸡第35天TD评分低于DCP组，添加福美双，肉鸡第42天时TD评分也达到最大，当胫骨近端形成大块的软骨楔时，对钙的利用和储存能力减弱，导致钙离子大量释放到血液中，从而需要分泌血清CT来维持血钙正常水平，所以它们的血清CT含量较高。血清PTH主要作用是升高血钙和降低血磷，血清CT能拮抗血清PTH的作用，降低血清钙含量。2种磷源对肉鸡第28、35和42天血清钙、磷含量影响差异均不显著，显示肉鸡后期自身对血清钙、磷稳态调节能力增强。福美双升高肉鸡第35和42天血清钙含量，而对血清磷含量有降低的趋势，与其显著升高血清PTH含量有关。福美双能显著提高肉鸡的血清钙含量［15］，本研究血清钙含量结果与其一致，而血清磷结果与其不一致，原因可能是前者在前期(1～21d)诱导，而本试验在后期(22～42d)诱导，肉鸡对血液钙、磷稳态的调节能力更强。

4结论

①MDCP相对DCP可能对福美双诱发肉鸡TD有一定减缓作用，且与肉鸡骨骼钙、磷代谢密切相关。②2种磷源对肉鸡最终TD评分无显著性影响。