鹦鹉热衣原体重组主要外膜蛋白免疫肉鸡效果观察

【摘 要】鹦鹉热又名鸟疫，是受到鹦鹉热衣原体病毒引起，以某些鸟类为寄宿体进行传播的急性传染病。包括人类在内的多种生物在接触病鸟的过程中均极有可能受病毒感染而引发疾病。全世界范围内，包括鹦鹉在内的许多鸟类，如鸽类、火鸡及鸭类等禽类都可以使人类通过接触病死体或粪便等而被传染该型疾病，但发病症状根据临床观察可知其他动物被感染的病症重度均要比被鹦鹉携带的病毒所引起的程度要轻。鹦鹉热衣原体的首次成功分离在鹦鹉体内实现，随后，又陆续从一百余种鸟类体内进行了成功分离。

【关键词】鹦鹉热衣原体；重组主要外膜蛋白；免疫应答；肉鸡

鹦鹉热衣原体（Chlamydia psittaci，Cps）的特性是一种具有宿主多样化形态的原生性微生物，鹦鹉热衣原体可以自行生成一类自有的红细胞凝集素，这一物质属于一种复合型卵磷脂白，其作用可以能凝集多种生物尤其是禽类的血红细胞，一旦血红细胞与这一物质发生化合作用结合，便会产生稳固性。这一特殊形态具有自行抗体和钙，对其他形式的凝集会产生抑制作用。有研究表明，来源差异使得Cps MOMP基因的同源性比较高，一项属于Cps重要的保护性抗原的形态即是Cps重组主要外膜蛋白（r-MOMP），正因如此，积极地利用r-MOMP，对预防以多宿主为传播介质的Cps病毒有较好效应（图1），在当今已成为了研究的重点范畴，但是，关于肉鸡的全面免疫应答与r-MOMP诱导之间的关系反应方面，尚没有相关的报道。在本实验中，我们利用r-MOMP对5d肉鸡进行经颈部的皮下免疫，在实验观察过程中，将使用两种方式观察肉鸡在体液免疫与细胞免疫情况下使用r-MOMP所发挥的作用，研究法分别为研究普通间接式抑制血液凝集法以及MTT法来。同时采用鹦鹉热衣原体自身强毒对免疫肉鸡进行攻毒，以探索重组主要外膜蛋白在形成油佐剂疫苗对鹦鹉热衣原体的具体表现，以此分析疫苗对防治肉鸡鹦鹉热衣原体的效果。

1.材料与方法

试验用目标生物选择北京某肉鸡工厂双A肉食鸡为实验体，借助鹦鹉热衣原体测试诊断剂确定1d抗体，选择其中一百只抗体表现呈阴性的肉鸡，在饲养至5d后对肉鸡予以分组，对照组与实验组数量各分配50只。

由北京某科学院微生物流行病研究所提供试验用重组主要外膜蛋白（r-MOMP ），r-MOMP浓度25mg/ml。

抑制血凝试剂选用湖北畜牧兽医研究的自研产品。鹦鹉热衣原体株的攻毒材料选用由中国农大动物实验研究所进行分离并通过北京某科学院微生物流行病研究所的鉴定。

肉鸡免疫与抗体检测以r-MOMP呈现水相，同时按一定比例与乳化剂、白油等进行乳化，形成疫苗的单纯油包水状态。试验组肉鸡在接种颈部皮下r-MOMP疫苗时采取50μg/只的方式，对照组在接种方式上选用油佐剂进行，注入剂量必须与试验组一致。在免疫及免疫结束的15d、25d和32d期间，通过对肉鸡采取翅静脉采血来对体内的血清抗予以体测定，每次测定肉鸡数量为十只。

攻毒试验的保护过程中，要做到在免疫后的30d，对受病的鸡胚卵黄囊膜进行研磨，首先使用1800r/min离心运行20min，对所获取的中层悬液予以12倍的浓度稀释。然后对两组肉鸡的腹腔按照0.5ml/只的规定进行注射，这时要密切观察肉鸡临床表现。观察后10d，对肉鸡采用颈静脉放血法致死，解剖观察内脏器官，对出现的病理现象进行分析观察。对病理变化的记分方式采用以下原则，肺脏双侧纤维渗出记4分，单侧2分。气囊双侧纤维素渗出记2分，单侧1分。保护达成的标准是以肉鸡呼吸状态无喘、无蛤蟆叫式等呼吸症状为主要参考（图2）。

2.结果

2.1免疫效力

我们选用4个批次的疫苗，分别以45μg对10d肉鸡进行免疫，在免疫后30d，分别测定肉鸡当前的血清抗体数值，并进行攻毒。通过试验观察我们发现，45μg计量对肉鸡的保护率可达95%。对照组攻毒后期表现出典型呼吸并发重喘的症状，肺脏病态表现为出现渗出性炎症，观察肺脏涂片，发现了有典型衣原体荧光形成；对免疫组进行观察，肺脏感染与荧光染色呈现阴性。

2.2免疫持续期

根据观察重组主要外膜蛋白的免疫攻毒保护率可以确定免疫持续期。通过试验得出分析，在肉鸡免疫后35，45和65d，免疫肉鸡的呈现的自身安全状态在免疫率方面表现稳定，分别达到93%，96%和88%，因此，我们以保护率最低级为80%的标准测定，免疫攻毒后疫苗显现的免疫持续期可达65d。

3.讨论

主要外膜蛋白分子在鹦鹉热衣原体中的表显现质量为38ku，主要外膜蛋白分子的自身属性是一种具有多功能形态的蛋白结构，其在外膜蛋白中存在量占衣原体总体的57%，在对肉鸡感染效能方面起基础作用，该抗原在衣原体疫苗中的重要性质比较受到关注。经研究证明，鹦鹉热衣原体通过在不同宿主的寄存形式，导致r-MOMP基因同源性具有很高相似度，这一情况是疫苗研究领域的关键性节点。通过在小鼠体内研究，可证实鹦鹉热衣原体重组主要外膜蛋白可对Cps特殊差异性在答形反馈上对体液免疫与细胞免疫形成诱导。同时，r-MOMP自身作用于肉鸡中的较好的免疫性也在本实验中观察到了较高的体腔液体免疫形成状态。

4.结语

通过大量研究，我们发现是鹦鹉热衣原体自存的一项极具效能的保护性抗原正是r-MOMP，通过观察来源不同的Cps中存有的r-MOMP基因，可发现有同源性特征，因此，在使用解决Cps感染时启用r-MOMP进行预防，在目前看来已成为研制高效能基因项目的疫苗的最佳途径，这一疫苗的产生在预防衣原体感染方面具有显著效果。在进行免疫印记与免疫荧光的观察性实验中我们发现并证明了关于r-MOMP氨基端可以实现在体液中表现免疫应答的参与形式。借助研究员的观察，在小鼠效果试验中证实了r-MOMP对免疫小鼠方面，在应答表现上可以获得较为明显的体液免疫与细胞免疫反馈。通过本实验的一些结果，我们也证明了对肉鸡进行免疫后，肉鸡抗体抗生素单位值可达4.5～5.8（lg2），这一比较良好的状态可以有效地保证肉鸡的出栏量，同时为我国的免疫肉鸡鹦鹉热衣原体的相关研究做出了一定参考。 [科]

【参考文献】

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