HO-1在胃腺癌中的表达

[摘要] 目的 检测HO-1在胃腺癌中的表达，分析HO-1在胃腺癌发生发展中的作用。方法 采用免疫组织化学方法检测在病理科存档的68例胃腺癌（分高、中、低分化组）石蜡标本，与20例慢性萎缩性胃炎、20例慢性非萎缩性胃炎标本对照，比较HO-1/ CO分布表达情况。采用SPSS13.0统计软件进行χ2检验和Fisher精确概率法检验统计学方法分析。结果 HO-1在胃腺癌、慢性萎缩性胃炎、慢性非萎缩性胃炎中阳性率分别是88%（60/68）、60%（12/20）、10%（2/20）。胃腺癌中HO-1的表达明显高于慢性萎缩性胃炎（P＜0.05）；慢性萎缩性胃炎中HO-1的表达明显高于慢性非萎缩性胃炎组（P＜0.05）；重度慢性萎缩性胃炎中HO-1的表达明显高于轻度慢性萎缩性胃炎组（P＜0.05）；胃腺癌低分化组阳性数明显大于中分化组，中分化组阳性数明显高于高分化组，两两比较有显著差异（P＜0.05）。结论 HO-1在胃腺癌病理组织的高表达，表明HO-1 在胃腺癌发生发展中起重要作用，为胃腺癌早期预防、早期诊断、预后判断及治疗方案选择提供重要依据。

[关键词] 血红素氧合酶-1；胃腺癌；慢性萎缩性胃炎；免疫组化

[中图分类号] R735.2 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2011）32-93-03

Expression of Heme Oxygenase-1 in Stomach Adenocarcinoma

ZHAO Lingjun WANG Lihua LIU Lina WANG Weizhan DUO Rong MA Guoying

Hebei Medical University Affiliated Harrison International Peace Hospital，Shijiazhuang 053000，China

[Abstract] Objective Detection of HO-1 expression in gastric adenocarcinoma， analysis of HO-1 in gastric adenocarcinoma development role. Methods Immunohistochemistry was used to detect the pathology archive of 68 cases of gastric cancer（at high，medium，poorly differentiated group） paraffin，and 20 cases of chronic atrophic gastritis，20 cases of chronic non-atrophic gastritis specimens，HO -1/CO expression of distribution，using statistical software SPSS13.0 withχ2 test and Fisher exact test to analyze the results statistically. Results The positive rate of HO-1 in gastric adenocarcinoma，chronic atrophic gastritis and chronic non -atrophic gastritis were 88.0%（60/68），60%（12/20），10% （2/20） respectively. HO-1 in gastric adenocarcinoma were significantly higher than that of chronic atrophic gastritis（P＜0.05），chronic atrophic gastritis in the HO-1 expression were significantly higher than that of chronic non-atrophic gastritis group（P＜0.05）.Severe chronic atrophic gastritis in the HO-1 expression were significantly higher than those with mild chronic atrophic gastritis groups（P＜0.05）. The positive rate of poor differentiated gastric adenocarcinoma were significantly higher than that of medium differentiated group， and the positive rate of medium differentiated group were significantly higher than that of well differentiated group，pairwise comparisons were significantly different（P＜0.05）. Conclusion The high expression of HO-1 in gastric adenocarcinoma of pathology， suggests that HO-1 plays an important role in the genesis and development of gastric adenocarcinoma，which provides an important basis for early prevention of gastric adenocarcinoma，early diagnosis，prognosis and selection of treatment.

[Key words] Heme oxygenase-1；Gastric adenocarcinoma；Chronic atrophic gastritis；Immunohistochemistry

诱导型血红素氧合酶（Heme oxygenase-1，HO-1）也被称为应激蛋白，与多种应激相关性疾病发生密切相关，具有抗氧化、抗炎、抗细胞增殖及抗细胞凋亡作用，且被膳食中多种抗氧化剂诱导，引起人们广泛重视。且在一些癌基因及其产物诱导的转化细胞核以及许多肿瘤细胞中表达增高[1]。胃黏膜即是与多种应激因素相关性疾病发生密切相关的器官，易受热刺激、应激及感染诸因素的各种刺激而致癌[2，3]。 目前HO-1在肿瘤中研究诸多，但国内外有关HO-1在胃腺癌中表达的研究很少。本研究用免疫组织化学技术，对胃腺癌组织、慢性萎缩性胃炎及慢性非萎缩性胃炎组织中HO-1 表达水平进行测定，探讨HO-1在胃腺癌发生、发展中的作用，为进一步对胃腺癌早期预防及预后判断提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料

研究对象均是河北医科大学哈励逊国际和平医院2008年1月～2009年12月收治的患者。以病理科存档的68例胃腺癌患者石蜡标本为研究组，所有病例均未接受化疗、放疗或免疫治疗。患者一级亲属的家庭成员中均无家族性胃腺癌病史，具备完整的临床病理资料，包括患者年龄、性别、肿瘤的病理组织学分级；平均年龄（60.35±8.75）岁，其中男48例，女20例。按WHO胃腺癌病理分级标准分级，高、中、低分化组分别是26例、28例、14例。对照组：20例慢性萎缩性胃炎标本，其中男12例，女8例，年龄55～81岁，平均（66.55±7.63）岁；20例慢性非萎缩性胃炎标本，其中男11例，女9例，年龄56～78岁，平均年龄（65.42±4.51）岁。

1.2 实验方法

所有标本均经4%福尔马林固定，石蜡包埋，4μm厚连续切片，每份标本都同时常规HE染色，用于确定病理类型及确定诊断。采用免疫组化SP法，检测HO-1蛋白的表达，已知阳性切片做阳性对照，以PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。

1.3 HO-1阳性细胞计数

HO -1阳性细胞表达为棕黄色颗粒，高倍镜下主要存在于细胞核中，细胞浆上也有少量表达。光镜下随机选取10个连续不重复的高倍（10×20）视野，综合染色强度和阳性细胞百分数进行半定量评分：基本不着色，染色与背景相似者为0分；着色浅，略高于背景者为1分；中度着色，明显高于背景者为2分；强染，着深棕色者为3分。按阳性细胞数量分：阳性细胞百分数≤10％为0分；＜10%～20%为1分；20%～50％为2分；＞50％为3分。2项相加后分为4级，0～1分判为阴性（-），2分为弱阳性（+），3～4分为阳性（++），4分以上为强阳性（+++）。

1.4 统计学方法

采用SPSS13.0统计软件包进行统计分析，数据用均数±标准差（χ±s）表示，肿瘤与对照组织之间的计量资料采用t检验，构成比差别采用χ2检验，等级资料的相关性检验采用Spearman等级相关性分析，检验水准a=0.05，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HO-1在各组疾病中的表达（表1）

胃腺癌组HO-1表达的阳性率为88%（60/68），对照组中慢性萎缩性胃炎为60%（12/20），慢性非萎缩性胃炎仅10%（2/20），可见在胃腺癌组的阳性率明显高于对照组，经χ2检验，各组HO-1指标表达差异有统计学意义（P＜0.05）。在慢性萎缩性胃炎中重度者HO-1表达呈现弥漫性弱阳性，而轻度者呈现单个细胞弱阳性表现，见图b、图c。

注：光镜下观察不同胃黏膜组织HO-1表达情况：（a）HO-1在慢性非萎缩性胃炎组的表达， 胃黏膜细胞核无着色，染色阴性（-）；（b）轻度慢性萎缩性胃炎组织中呈现散在性，单个细胞HO-1阳性；（c）重度慢性萎缩性胃炎组织呈现HO-1弥漫性弱阳性；（d）胃腺癌高分化组织呈现棕黄色染色阳性（+）；（e）胃腺癌中分化组织癌细胞胞核呈现棕黄色染色阳性（++）；（f）胃腺癌低分化组织癌细胞胞核现棕黄色染色阳性（+++）免疫组化 ×200

2.2 HO-1表达的影响因素

由表2可发现，HO-1在胃腺癌组的阳性表达与患者年龄、性别无关，与组织的分化程度有关，低分化组HO-1表达显著高于中分化组（χ2=7.1，P=0.030）；中等分化组HO-1表达显著高于高分化组（χ2=8.54，P=0.018），提示分化程度愈低HO-1阳性表达率愈高。

3 讨论

胃腺癌系源自胃黏膜上皮细胞的恶性肿瘤，占胃恶性肿瘤的95%，胃腺癌在我国发病率很高，多数患者确诊后均已进入晚期状态，失去治疗机会。胃腺癌已经成为一种严重威胁人类身体健康的疾病[4]。近来的研究发现其发生发展与许多基因和蛋白质表达有关，HO-1在胃腺癌患者中的表达就日益受到关注。HO-1即热休克蛋白32（HSP32），是细胞内的一种重要的抗氧化酶。HO-1连同其酶解产物胆红素、铁离子及CO一起组成了机体重要的保护系统，参与抗氧化反应、抗炎、抗细胞增殖、抗细胞凋亡，与细胞内信号传递有关[5，6]。HO-1广泛分布于哺乳动物多种组织细胞中。在细胞处于生理状态即有少量表达，但是健康胃肠道极少表达HO-l[7]，当胃肠道黏膜病变或损伤时， HO-1会诱导产生，有利于病变、损伤组织的修复。

众多研究表明，慢性萎缩性胃炎视为癌前病变，为自身免疫性疾病，常有免疫指标的异常，据国内病例观察报道，慢性萎缩性胃炎的癌变率约为1.50%～2.55%[8]。本研究发现HO-1表达于细胞的胞核内多见，少量见于胞浆区（图a~f）。慢性萎缩性胃炎，胃黏膜轻度萎缩者，呈现散在性，单个细胞HO-1阳性；而胃黏膜重度萎缩者，呈现HO-1弥漫性弱阳性（图b、c），提示病情重者HO-1表达强，病情轻者表达弱，此发生机制国内外尚未见报道，有待进一步研究。此项结果进一步证实重度慢性萎缩性胃炎系癌前期病变。表明与胃黏膜进一步恶化有关，提示HO-1可作为判断癌前病变及恶变的客观指标，成为区分良恶性胃黏膜病变的一个显著标志物。

本研究发现慢性非萎缩性胃炎轻度慢性萎缩性胃炎重度慢性萎缩性胃炎胃癌 （表1）进展过程中，HO-1递增性增高，尤其HO-1在胃癌中与在慢性非萎缩性胃炎及慢性萎缩性胃炎中表达有显著差异。HO-1的表达与胃癌分化程度密切相关，分化程度越低恶性程度越高，HO-1表达越高（表2），对上述HO-1阳性表达率的比较发现胃腺癌发生发展过程中HO-1表达增强，提示HO-1参与胃腺癌发生。HO-1高表达增强了肿瘤细胞的抗杀伤能力，使细胞抑制效应和死亡减弱。

综上所述，通过同步测定HO-1在慢性萎缩性胃炎及慢性非萎缩性胃炎组织中，HO-1能够早期发现和诊断胃腺癌。HO-1表达水平可作为肿瘤和癌前期病变的标志物。HO-1在临床肿瘤的早期诊断、分级等方面更具参考作用，HO-1在胃腺癌中作为一种可靠的细胞增殖指标，以HO-1作为靶目标，通过调控HO-1的表达而阻断肿瘤复制，从而达到治疗肿瘤的目的，值得我们临床进一步研究。

[参考文献]

[1] 胡鹤本，朱人敏. 热休克蛋白90a与胃癌的关系[J]. 医学研究生报，2004，17（8）：547-551.

[2] Van Rijn J，Vanden Berg J，Souren JE，et al. Hepatoma cells adapted to proliferate under normally lethal hyperthermic stress conditions show rapid decay of thermoresistance and heat sHOck protein synthesis when returnd to 37 degrees C [J]. Hyperthermia，1995，11（5）：697-708.

[3] 张学庸. 胃癌的基础研究与临床[M]. 北京：科学出版社，1996：32.

[4] 刘彤华. 肿瘤病理诊断与鉴别诊断学[M]. 福建：福建科学技术出版社，2006：89-120.

[5] Ollinger R，Yamashita K，Bilban M，et al. Bilirubin and biliverdin treatment of atherosclerotic diseases[J]. Cell Cycle，2007，6（1）：39.

[6] Schaer CA，ScHOedon G，ImHOf A，et al. Constitutive endocytosis of CD163 mediates hemoglobin-heme uptake and determines the noninflammatory and protective transcriptional response of macrophages to hemoglobin[J]. Circ Res， 2006，99（9）：943.

[7] Miller SM，Reed D，Sarr MG，et al. Haem oxygenase in enteric nervous system of human stomach and jejunum and co-localization with nitric oxide synthase[J]. Neurogastroenterol Motil，2001，13：121-131.

[8] 汪鸿志. 慢性胃炎[M]. 北京：人民卫生出版社，1985：259.

（收稿日期：2011-09-05）