血清中CD44V6与甲状腺癌的关系

[摘要] 目的 探讨白细胞分化抗44变异型(CD44V6)与甲状腺癌的关系。方法 采用酶联免疫吸附法测定50例甲状腺良性结节患者和50例甲状腺癌患者血清中的CD44V6水平,分析其与甲状腺癌之间的关系。结果 甲状腺癌组患者血清中CD44V6水平高于甲状腺良性肿瘤组(P

[关键词] 白细胞分化抗44变异型(CD44V6);甲状腺癌

[中图分类号] R736.1 [文献标识码] A[文章编号] 1673-9701(2010)10-27-02

Serum CD44V6 Expression in Thyroid Carcinoma and Its Significance

SHI XinWU Naiwang

Shanxi Medical University,Taiyuan 030001,China

[Abstract] Objective To explore the relationship between leukocyte differentiation anti-44 variant(CD44V6) and thyroid cancer. Methods The serum CD44V6 level was detected by enzyme-linked immunosorbent assay in 50 cases of benign thyroid nodules(thyroid benign tumor group)and 50 cases of thyroid cancer(thyroid cancer group)and the correlation of the CD44V6 level with thyroid cancer was analyzed. Results Serum CD44V6 was higher in the thyroid cancer group than that of the thyroid benign tumor group(P

[Key words] CD44V6;Thyroid cancer

目前,国内外对甲状腺癌的研究多集中在对标本的检验,对于血清中肿瘤分子标记物的检测还较少。白细胞分化抗44变异型(CD44V6)作为有价值的肿瘤分子标记物,进入了研究视线,它是一族与免疫相关的膜整合糖蛋白多形性家族,参与细胞基质的黏附、淋巴细胞的激活和靶向及肿瘤的生长和转移[1]。在本研究中,对甲状腺肿瘤患者血清中CD44V6的水平进行检测,旨在探讨其与甲状腺癌的关系。

1资料与方法

1.1一般资料

选择山西省肿瘤医院头颈外科2008年5月～2009年5月住院患者100例,男20例,女80例。年龄19～60岁,平均45岁。病理类型:甲状腺良性肿瘤50例,甲状腺癌恶性肿瘤50例(其中甲状腺状癌40例,滤泡状腺癌6例,髓样癌4例)。患者入院后颈部B超检查证实有甲状腺结节,并常规检查除外高血压、冠心病、脑血管意外、糖尿病、肺结核和其他系统肿瘤,近6个月内有手术史者不在本研究入选之内。

1.2方法

受试者过夜禁食12h后,清晨空腹状态下,经无菌静脉采血程序,抽取肘静脉血3mL,所有患者均术前抽血。室温静置30min后,2000r/min离心15min,分离血清,取1.5mL置于-70℃冰箱保存以备测定CD44V6,所有血清统一编号保存,各项指标均统一标准,一批完成测定。

采用酶联免疫法(ELISA)测定CD44V6含量。CD44V6试剂盒购自美国RB公司。按试剂盒说明书进行操作,使用酶标仪检测。具体步骤如下:实验前把冻存的血样从-20℃的低温冰箱取出,彻底融化备用,所有试剂都平衡至室温(20～25)℃再开始试验。血清样品稀释100倍(5μL血清500μL样品稀释液),标准品不稀释。浓缩洗涤液(20×)用双蒸水稀释1×(至500mL)。在反应板中分别加入5μL标准品和5μL已稀释血清,轻轻混匀10s。每孔加入200μL Anti-CD44V6 Biotin,轻轻混匀30s,37℃温育30min。反复洗涤反应板5次,甩尽板内液体,用洗涤液洗涤反应板,并去除水滴(用厚叠吸水纸拍干)。在反应孔加入200μL HRP,轻轻混匀10s,37℃温育30min。反复洗涤反应板5次,甩尽板内液体,用洗涤液洗涤反应板,并去除水滴(用厚叠吸水纸拍干)。每孔加入100μL TMB显色液,轻轻混匀10s,37℃温育30min。每孔加入100μL终止液,轻轻混匀30s,15min内在酶标仪450nm处读OD值。以OD值为纵坐标,以标准品浓度为横坐标,绘制标准曲线。每个标准品和标本的OD450值减去零孔的OD450值为实际值。通过标本OD450值在标准曲线上查出其浓度。CD44V6(ng/mL)=主标准曲线上查出的浓度×100%。

1.3统计学分析

选用SPSS13.0统计软件,计量资料以(χ±s)表示,采用t检验,组间比较计数资料以率表示,采用χ2检验,P

2结果

甲状腺癌组血清中CD44V6和对照组良性结节患者比较,甲状腺癌组高于甲状腺良性肿瘤组,差异有统计学意义(P

3讨论

CD44V6与甲状腺癌:CD44是一族与免疫相关的膜整合糖蛋白多形性家族,参与细胞基质的黏附、淋巴细胞的激活和靶向、肿瘤的生长和转移。CD44V6蛋白属表面黏附分子,主要参与细胞-细胞、细胞-基质间的特异性粘连过程。CD44V6是最早发现与肿瘤转移有关的CD44的变异体,它与肿瘤侵袭、转移有关。

CD44V6与甲状腺肿瘤:肿瘤细胞在细胞外基质(ECM)中活跃的迁移是肿瘤浸润转移的必要条件[2]。CD44V6参与甲状腺肿瘤的浸润和转移的机制有:CD44通过胞外区肽链与相应配体的结合和黏附,这种黏附作用因为CD44v转录过程中异常剪接表达CD44V6而发生改变;CD44V6介导与异型细胞配体结合使肿瘤细胞的黏附性增强而易侵入基底膜和ECM;CD44s介导的同型细胞间的黏附受损,肿瘤细胞去黏附能力增高。CD44还通过其胞内肽链和胞内侧连接蛋白结合,与细胞骨架发生相互作用,影响癌细胞的骨架构象和分布,从而影响了癌细胞的极性和增加了细胞的运动能力。另外CD44V6也可能通过与配体的相互作用影响细胞内信号转导,改变癌细胞的生物学特性。国内研究显示[3]甲状腺癌中CD44V6阳性率为64%(32/50),在淋巴结转移组及无转移组分别为76.9%(20/26)和50.0%(12/24),二者比较有显著差异性(P

本研究结果显示,甲状腺癌组患者血清CD44V6水平显著高于甲状腺良性肿瘤组患者血清中CD44V6水平(P

甲状腺癌的发生与其他恶性肿瘤一样存在着机体免疫紊乱,本课题在综合分析了国内外文献的基础上,将密切关联肿瘤的标志物CD44V6应用于甲状腺癌的研究。本组资料证实,在甲状腺肿瘤患者的血清中,高水平的CD44V6含量与甲状腺癌有关。在甲状腺癌患者的血清中,高水平的CD44V6含量与甲状腺癌是否伴淋巴结转移有关。选择CD44V6进行血清检测,目标明确,方法简单,术前即可获得结果,为诊断和治疗甲状腺癌提供了一种可靠的血清学指标。

[参考文献]

[1] 张健. 分子肿瘤标记物在甲状腺癌诊断中的意义[J]. 中国实用内科杂志,2007,27(17):9.

[2] Cichy J, Pure E. The liberation of CD44[J]. J Cell Biol, 2003, 161(5):839-843.

[3] 赏金标,刘爱华,孙文勇,等. CD44V6在甲状腺状腺癌中的表达及意义[J]. 耳鼻咽喉-头颈外科,2000,7(4):223-225.

[4] Guther U,Hofmann M,Rudy W,et al. A new variant of glycoprotein CD 44 confer metastatic potential to rat carcionma cell[J]. Cell,1991, 65:13-24.

[5] Ermak G,Jrnnings T,Robinson L,et al. Resticted patterns of CD44 variantexonexpressioninhuman papillary thyroid carcionma[J]. Cancer Res,1996,56(5):1083.

(收稿日期:2010-01-05)