川芎嗪长循环脂质体包封率的测定

[摘要] 目的 建立川芎嗪长循环脂质体的包封率测定方法。 方法 采用葡聚糖凝胶-G50微型柱分离脂质体和游离药物，以高效液相色谱法分别测定含量，并计算包封率。 结果 葡聚糖凝胶-G50可使川芎嗪长循环脂质体和游离药物完全分离；HPLC条件下，川芎嗪与辅料和溶剂峰分离良好，川芎嗪浓度在1.09～43.60 μg/mL范围内线性关系良好（r = 0.9994，n = 6）。 结论 所建立的方法简单可行、重复性好、准确、稳定，为评价和控制川芎嗪长循环脂质体的质量提供了依据。

[关键词] 川芎嗪；长循环脂质体；包封率；葡聚糖凝胶；高效液相色谱法

[中图分类号] TQ461 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）05（b）-0114-03

川芎嗪是从中药川芎中提取的一种主要有效成分，具有扩张血管、抑制血小板聚集、防止血栓形成、改善微循环等多种药理活性[1]，临床主要用于治疗动脉粥样硬化、冠心病、脑血管病、肺动脉高压等疾病[2]。长循环脂质体是一种具有多功能的靶向药物载体，其在体内可阻止巨噬细胞对脂质体的识别和摄取，而极大延长脂质体在血液中的循环时间[3]。把川芎嗪制成长循环脂质体制剂，可显著改善川芎嗪口服吸收差、生物利用度低、半衰期短、代谢快等问题，有效提高了川芎嗪的疗效。本实验旨在建立简单可行、稳定可靠的分析方法，以准确测定川芎嗪在制剂中的含量和包封率，为评价和控制川芎嗪长循环脂质体的质量提供依据。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪：Waters515泵、2487紫外检测器（美国Waters公司）；N3000色谱工作站（浙江大学）；精密分析天平AUW120D（日本岛津公司）；JB-3型定时恒温磁力搅拌器（上海雷磁新泾仪器有限公司）；微孔滤膜（德国ME MBRANA公司）。

TMP（含量>98.5%，江苏南京泽朗医药科技有限公司）；大豆卵磷脂（上海泰伟药业）；胆固醇（上海伯奥生物科技有限公司）；PEG3000-DSPE（德国lipoid公司）；葡聚糖凝胶-G50（上海蓝季科技发展有限公司）；磷酸氢二钠、磷酸二氢钠（天津市福晨化学试剂厂）；甲醇为色谱纯，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 样品的制备

2.1.1 川芎嗪长循环脂质体[4] 采用乙醇注入法制备，精密称取处方量的川芎嗪、卵磷脂、胆固醇和PEG3000-DSPE，加入适量的无水乙醇使之溶解。将上述乙醇溶液匀速注入到水浴60℃的PBS 6.5溶液中，恒温快速搅拌至无醇味，静置，过0.45 μm的微孔滤膜，即得。

2.1.2 空白脂质体 按处方精密称取卵磷脂、胆固醇、PEG 3000-DSPE等辅料，同法制备不含药物的空白脂质体，备用。

2.2 分析方法的建立[5]

2.2.1 色谱条件 色谱柱：迪马platisil ODS柱（5 μm，250 mm×4.6 mm），Phenomenex保护柱；流动相：甲醇-0.5%冰乙酸（40∶60）；流速：1 mL/min；柱温：室温；检测波长：298 nm；进样量：10 μL。

2.2.2 专属性试验 取空白脂质体和川芎嗪长循环脂质体各0.5 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇破乳并定容至刻度，摇匀，分别作为阴性溶液和样品溶液。将阴性溶液、样品溶液和43.60 μg/mL的川芎嗪对照品溶液分别进行HPLC分析。色谱图见图1，川芎嗪的保留时间约为13.2 min，峰形良好，空白辅料对川芎嗪的测定无干扰。

2.2.4 精密度试验 取10.90 μg/mL川芎嗪对照品溶液，连续进样6次，测定峰面积，计算得到RSD为1.41%，说明该法精密度良好。

2.3 分离方法的建立[6]

3 讨论

3.1 测定方法的选择

脂质体包封率的测定方法有很多，在前期试验中曾采用超速离心法，在转速20 000 r/min以上长时间离心，但脂质体仍难以完全沉淀分离，而且在高转速条件下部分脂质体可能被破坏而导致药物渗漏；透析法虽能有效分离，但操作耗时过长[8]。相比之下，凝胶柱色谱法简单可靠，能使包封药物和游离药物得到较好的分离。

3.2 葡聚糖凝胶柱分离条件

3.3 流动相的选用

本文建立了准确、稳定的液相色谱分析方法，在选择流动相条件时，若单纯以甲醇-水作流动相，会导致峰形拖尾严重，可能是由于川芎嗪碱性氮原子易与柱上未完全封闭的-OH产生氢键结合[10]，使其难以洗脱，造成拖尾。因此参考文献[11-12]在流动相中加入了少量冰乙酸，以调整峰形，达到了良好的效果。

[参考文献]

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[12] 夏祖猛，王利胜，赖宝林，等.芎冰微乳在新西兰兔体内的药动学研究[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（11）：119-121.

（收稿日期：2013-01-09 本文编辑：卫 轲）