EB病毒、微卫星DNA不稳定性与淋巴瘤相关性研究进展

【关键词】 EB病毒；MSI；淋巴瘤；相关性

文章编号：1003-1383（2013）04-0593-04 中图分类号：R733；R373.9 文献标识码：A

doi：10.3969/j.issn.1003-1383.2013.04.054

淋巴瘤（Hodgkin’s Lymphoma，HL）是机体免疫系统的免疫细胞发生的恶性肿瘤，儿童、青年、中老年人均可发生。目前淋巴瘤是我国发病率增长速度最快的血液系统恶性肿瘤[1]，且淋巴瘤类型繁多，发病机制复杂。由于PCR技术 、原位杂交技术、免疫组织化学染色等科研技术的广泛运用，研究发现EB病毒（Epsteinbarr virus，EBV）感染和微卫星DNA不稳定性（Microsatellite Instability，MSI）与某些类型淋巴瘤（伯基特淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、NK/T 细胞淋巴瘤等）的发病与发展有关。现就 EBV 感染相关抗原、EBV相关性淋巴瘤、EBV与MSI的相关性及其在淋巴瘤发病机制中的研究进展作一综述。

EB病毒与微卫星的生物学特性 1.EB病毒 EBV是一种嗜人B淋巴细胞双链γ DNA 疱疹病毒，人类普遍易感。EB病毒包括11个基因，编码6种核抗原（EBNA1、EBNA2、EBNA3A、EBNA3B、EBNA3C和EBNALP，3 种潜伏膜蛋白（LMP1、LMP2A和LMP2B），2种多聚核苷

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基金项目：广西卫生厅科研项目（合同编号：Z2013769）；百色市科学研究与技术开发计划项目[百科计字（2013）1号）]。

作者简介：罗春英（1977-），女（苗族），贵州省铜仁市人，讲师，医学硕士，研究方向：肿瘤分子病理。酸RNA（EBER1和EBER2）。EBV通过gp350结合B细胞受体CD21，感染B淋巴细胞后，EB病毒DNA结成环状结构并自我复制[2]，EBV在受染细胞中合成EBV早期抗原、EBV壳抗原和EBV膜抗 原，然后组装成完整的病毒颗粒而释放，导致受染细胞的溶解死亡，此为EBV的增殖性感染。还有一种状况叫潜伏性感染，即病毒在受染细胞中不增殖而表达多种基因产物，产生抗原。有研究报道90%以上的人曾感染过EBV，且大多数为潜伏感染[3]。EBV感染宿主后产生的抗原中，研究最多、与疾病发生关系最密切的是潜伏膜蛋白（EBV Latent menbrane protein，LMP）和EBV基因编码的核糖核酸（EBV encoded RNAs，EBERs）[4]。与EB病毒感染有关的肿瘤有伯基特淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、某些类型的T细胞淋巴瘤、鼻咽癌和胃癌等。

2.微卫星 微卫星（Microsatellite，MSI）是广泛存在于人类基因组中简单串联重复DNA序列，重复单位为1～6 bp，重复次数不超过60次，片段长度通常小于350 bp，它们一般处于可积累中性突变的非编码DNA区域，在人群中呈高度多态性，并且稳定遗传，可用于个体鉴定。微卫星不稳定性（Microsatellite Instability，MSI）是指错配修复（Mismatch repair，MMR）基因有缺陷后，同一微卫星位点在同一个体的正常组织与异常组织之间，因微卫星位点重复序列的插入或缺失而导致整个基因组处于不稳定状态。目前普遍认为微卫星改变是基因重排及变异的来源，微卫星可能通过与特异性蛋白质结合或改变基因的结构和位置而发挥其基因调控作用。基因内或基因附近的微卫星DNA的不稳定，可能诱发这些基因的表达及功能的改变，如通过TGFβ22ⅡR、IGFⅡR、BAX等基因异常参与细胞生长、凋亡过程，从而引发疾病。有研究表明[5]，编码区微卫星不稳定性能使基因发生移码突变，从而产生截短蛋白，导致靶基因的失活。

EBV潜伏感染相关抗原及其致癌机制 1.潜伏膜蛋白1（LMP1） EBV 主要通过LMP1诱导B 细胞转化。LMP1是EBV潜伏感染中编码的分子量为 63 kD的跨膜蛋白，由氨基端、跨膜区、羧基端三部分组成。氨基端可将LMP1定位到受染细胞膜上，较长的羧基端激活区可激活诸多信号通路。LMP1通过激活 NFκB 信号通路而影响P53基因，从而干扰正常细胞周期，使宿主细胞增殖、凋亡失衡；LMP1还可通过激活磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）而启动PI3K激酶磷脂酰肌醇通路，从而促进有丝分裂的发生[6，7，8]。LMP1目前已经被证实为EBV致癌的关键基因，LMP1在胃癌、甲状腺癌、肺癌等恶性肿瘤中都有阳性表达。

2.潜伏膜蛋白2（LMP2） LMP2 基因编码两种蛋白：LMP2A和LMP2B。LMP2A含有受体酪氨酸激活区（ITAM），该激活区磷酸化后可募集并激活酪氨酸蛋白激酶家族PTKs，从而调控淋巴细胞的增殖与分化。

3.EB病毒编码的核糖核酸（EBERs） EBERs是由EBV自身编码、组装而成的核糖核酸。EBERs对宿主的主要影响是抑制蛋白激酶的激活，下调转录起始因子α 的磷酸化，从而起始转录，有利于EBV在宿主细胞内持续感染。其次EBERs还可通过上调抗凋亡蛋白Bcl2 的表达，达到抗凋亡效果[9]。

4.EB病毒核抗原1（EBNA1） EBNA1与EBV基因组的复制和稳定性有关，可维持EB病毒DNA在宿主细胞中的环化，利于EB病毒的潜伏性感染。有研究报道在EBV感染阳性的B细胞淋巴瘤中，survivin的表达明显增强，推测EBV编码的EBNA1抗原通过上调survivin基因的表达而起到抗凋亡的作用[10]。关于EBV引发鼻咽癌的发病机制，有研究报道EB病毒通过EBNA1抑制IKKα/β磷酸化而抑制感染细胞的NFκB信号通路，使受染细胞出现生长、分化异常，从而促进肿瘤发生[11]。

5.EB病毒核抗原2（EBNA2） EBNA2是EB病毒编码的酸性磷蛋白。EB病毒促进B淋巴细胞的增殖，主要是通过EBNA2促进受染细胞和EB病毒的转录过程，同时上调潜伏膜蛋白的表达。Murornoto等[12]研究发现淋巴瘤的发生与EBNA2 协同 LMP1 上调 STAT3转录有关。

6.EBV核抗原3（EBNA3） EBNA3家族由EBNA3A、EBNA3B、EBNA3C三个成员组成。EBNA3A和EBNA3C主要通过影响受染细胞的细胞周期而促进受染细胞的正增殖。B淋巴细胞转化与EBNA3与 EBNA2、LMP1 间的协同作用关系密切。

7.EBV核抗原4（EBNA4/EBNALP） EBNA4 由EBNA mRNA先导链编码，其蛋白表达受控于BamHIW重复序列[13]。EBNA4可与EBNA2协同，上调 LMP1、LMP2的表达，促进病毒的致癌作用。

EBV相关淋巴瘤的类型 1.NK/T细胞淋巴瘤 NK/T细胞淋巴瘤欧美国家少见，亚洲国家多见。EBV既可感染B淋巴细胞也可感染NK/T淋巴细胞。有研究表明EBV感染与NK/T细胞淋巴瘤的发生、发展关系密切[14]。Ramakrishnan等[15]的研究发现EBV BamHIA 编码区BART9可通过上调节LMP1的表达而促进NK/T细胞淋巴瘤的增殖。

2.霍奇金淋巴瘤 有研究显示霍奇金淋巴瘤EBV感染阳性率为52.5%[16]。肿瘤性RS细胞高表达LMP1，提示 LMP1 对霍奇金淋巴瘤的发生起到重要作用。

3.伯基特淋巴瘤 伯基特淋巴瘤是B淋巴细胞来源的具有高度侵袭性的恶性肿瘤，约90%以上肿瘤细胞中可检测到EBV。地方型伯基特淋巴瘤的发生、发展与EBV关系密切。大多数EBV 阳性的伯基特淋巴瘤高表达EBNA1、EBERs 和LMP1。研究发现EBNA1抑制了伯基特淋巴瘤细胞的凋亡，从而促进其生长、增殖[17]。伯基特淋巴瘤的肿瘤细胞常被检测到8号和14号染色体易位，导致8号染色体长臂上的原癌基因cmyc与14号染色体上的IgH基因融合而过度表达，从而促进细胞的增殖导致伯基特淋巴瘤的发生[18]。

EBV与MSI的相关性及其在淋巴瘤中的作用 1.EBV与MSI的相关性 除了错配修复基因功能失活，易导致微卫星DNA重复序列的不稳定性外，广泛、重度的DNA损伤超过了DNA的修复功能也可能出现MSI，即过饱和机制。是否有其它基因及环境因素参与微卫星不稳定性改变，有待进一步研究。研究已证明EBV感染是鼻咽癌的一个重要病因，Mutirangura等[19]发现EBV感染阳性的鼻咽癌3p14的等位基因丢失频率较高，提示EBV感染可能与鼻咽癌的遗传学改变有关。也有研究报道EBV感染导致鼻咽癌可能的作用机制是病毒DNA整合到FRA3B区域，导致染色体缺失并可能灭活候选的抑癌基因而引起[20]。但有人对549例胃癌同时检测了EBV和MSI，结果无一例同时表现EBV和MSI阳性，没有证据显示EBV感染与MSI有关[21]。也有人对宫颈癌进行了HPV感染和MSI研究， 结果提示HPV16可能不是通过MSI诱发宫颈癌的发生[22]。

2.MSI在淋巴瘤发病中的作用 目前国内外有关MSI在淋巴瘤中的研究报道大多是针对B细胞性淋巴瘤。对MSI在T细胞性淋巴瘤中的情况研究报道较少，而我国该型淋巴瘤发生比例较西方国家高。国外研究认为特定类型淋巴瘤的发生与错配修复系统某一基因的功能缺失是有关联的[23，24]。也有报道认为错配修复基因MLH1的缺失不仅易导致霍奇金淋巴瘤的发生，同时可能与肿瘤易于产生耐药与肿瘤预后不良等因素有关[25]。国内研究报道，T细胞淋巴瘤中存在MSI和p53基因突变，微卫星改变阳性的肿瘤， p53突变倾向于高发[26]；而霍奇金淋巴瘤组织中伴p53基因突变的RS细胞未表现出错配修复基因hMSH2、hMLH1蛋白表达减低或缺失[27]。魏中华等[28]对58例B细胞淋巴瘤6号染色体上七个微卫星位点进行检测，发现低频的MSI。

综上所述，淋巴瘤是我国发病率增长速度较快的血液系统恶性肿瘤，某些类型淋巴瘤的发生与EB病毒感染有关；部分淋巴瘤类型的发生还与基因组微卫星DNA的不稳定性有关。除了错配修复基因异常可引起MSI外，可能还存在因病毒感染及病毒基因的整合、插入及其它环境因素造成宿主微卫星DNA不稳定性改变，从而引发疾病。目前这方面的报道不多，仅有的报道结论也不一致，有待进一步研究探讨。

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