不同试剂盒检测系统血清乳酸脱氢酶结果的偏倚评估

摘要：目的 通过对不同检测试剂盒检测血清乳酸脱氢酶测定进行方法比对和偏倚评估，为不同实验室检验结果的互认和实验室认可提供实验数据。方法 参考NCCLS 的EP9-A2文件，以OLYMPUS AU5421全自动生化分析仪、国内某一品牌试剂（试剂1）、贝克曼原装配套试剂（试剂2）、贝克曼原装复合校准品和伯乐定值质控品组成的检测系统，并用患者新鲜血清（正常、异常、高度异常）检测乳酸脱氢酶（LDH）进行比较分析，计算实验方法（ Y）和比较方法（X ）之间的相对偏差（%SE） ，以美国临床实验室修正法规（CLIA′88）规定的室间质量评价允许误差范围为标准，判断不同检测试剂盒测定结果的可比性。结果 不同试剂盒检测结果发现：异常标本，特别是高度异常标本，其差异巨大，无法接受。结论 当用某一试剂时，应进行比对和偏倚评估，判断其临床可接受性能，保证检验结果的可比性。

关键词：不同试剂盒；血清乳酸脱氢酶；比对研究

两个实验室认可的国际标准ISO / IEC 17025[1]（检测和校准实验室能力的通用要求）和ISO /15189[2]（医学实验室-质量和能力的专用要求）都对检验结果的溯源性和可比性提出了明确要求，强调方法学比较试验（比对试验）是实现准确度溯源和患者标本检验结果可比性的重要途径。但比对试验如何进行，如何评估不同检测系统检验结果的偏差，如何判断不同检测系统结果的可比性，是目前检验医学界关注和讨论的热点。本研究参考美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）的EP9-A2文件[3]，对不同检测试剂盒血清乳酸脱氢酶测定进行比对和偏倚评估，为实现血清酶测定的溯源性和可比性提供实验数据，纠正许多实验室只考虑节约成本，不对异常结果关注，只有通过异常标本的检测才能发现试剂质量的好坏，从而为临床提供可靠的结果。

1 资料与方法

1.1一般资料

1.1.1检测系统的组成 以OLYMPUS AU5421生化分析仪、国内某一品牌试剂（试剂1）、贝克曼原装配套试剂（试剂2）和贝克曼复合酶校准品和伯乐质控品组成的检测系统。

1.1.2样本制备 常规工作后收集低、中、高、超高的不同浓度新鲜血清4份，分装于带盖的清洁试管内。

1.2方法

1.2.1目标检测系统使用的是以OLYMPUS AU5421生化分析仪、贝克曼原装配套试剂（试剂2）、贝克曼原装复合校准品、伯乐质控品、常规工作后收集低、中、高、超高的不同浓度新鲜血清4份组成的检测系统。

1.2.2比较检测系统使用的是以OLYMPUS AU5421生化分析仪、国内某一品牌试剂（试剂1）、贝克曼原装复合校准品、伯乐质控品、常规工作后收集低、中、高、超高的不同浓度新鲜血清4份组成的检测系统。

1.2.3检测参数按照试剂厂家提供。

1.2.4实验方法不同试剂方法间的对比试验。

1.2.5测定项目乳酸脱氢酶（LDH）。

1.2.6实验前对仪器进行常规维护与保养，各实验室按常规方法进行校准和质控，室内质控在控时进行盲样测定。每个项目的检测严格按厂商试剂盒的说明书进行。收到样品后2h内测定完毕。

1.3数据收集与处理

1.3.1不采用已明确有人为误差的结果。

1.3.2按EP9-A2文件进行方法间离群值检查。

1.3.3比较方法（X）测定范围的检验：X的分布范围是否合适，可用相关系数（r）作粗略估计，如r≥0.975或r2≥0.95，则认为X范围合适，直线回归统计的斜率和截距可靠；如r

1.3.4计算线性回归方程：实验方法Y=bX+a。

1.3.5计算方法间的系统误差：根据临床使用要求，将各个项目给定的医学决定水平浓度Xc代入回归方程，计算实验方法（Y）与比较方法（X）之间的系统误差（SE）。

SE=|Yc-Xc|

SE（%）=（SE/Xc）×100%

1.3.6不同检测系统间测定结果吸光度的比较。

1.4临床可接受性能判断 以CLIA′88对室间评估的允许误差为判断依据，由方法学比较评估的系统误差（SE%）不大于允许误差的1/2属临床可接受水平，即不同检测系统间的测定结果具有可比性。

2 结果

2.1不同检测系统血清乳酸脱氢酶测定结果的比较 见表1。

2.2不同检测系统血清酶测定结果的相关性分析 以试剂2检测系统作为目标检测系统，试剂1检测系统与其进行相关与回归分析，各检测系统回归方程及相关系数见表2。各检测系统间的相关系数均小于0.975，说明回归统计的斜率和截距不可靠，不可以用它们去估计不同检测系统间的系统误差，并以医学决定水平处的系统误差来判断不同检测系统间是否具有可比性。

2.3检测系统可接受性能的评价 以试剂2作为目标检测系统，将不同酶的医学决定水平浓度代入各自相应的回归方程，用以判断各检测系统的临床可接受性能，见表3。

2.4两种检测试剂对于不同酶浓度在340nm检测吸光度见表4。

3 讨论

血清酶测定是临床上最常用的检验项目之一，不同实验室的测定结果间存在着较大差异。为实现血清酶测定结果的可比性，国际临床化学联合会（IFCC）等不同的专业学会先后提出了酶活性测定的推荐方法，在很大程度上改进了测定结果的一致性。2002年，IFCC又提出了ALT、AST、GGT、LDH、CK测定新的参考方法，从根本上提出了酶活力检测必须使用完整的检测系统、依靠校准品的定值，才能使酶检测结果实现全球的可比性[4]。目前，酶参考品（reference material）的成功制备为实现血清酶测定结果的溯源性和可比性奠定了基础[5]，应用酶校准品可明显提高不同检测系统间血清酶测定结果的可比性[6]，但酶参考品和酶校准品制备困难，产量有限。在我国，多数实验室按照自己的意愿，选择需要的仪器、试剂、操作程序等组合的检测系统（自建检测系统），以此完成患者标本的检验。因此，面对国内大量的实验室自行建立的检测系统，应该怎样寻找检测结果溯源性和可比性，是一个极大的现实问题。为了考查实验方法和比较方法的相关度，我们选用贝克曼复合校准品以低、中、高、超高新鲜血清样品在不同试剂盒的检测系统上进行测定，结果表明，不同检测系统乳酸脱氢酶误差均高于CLIA′88规定的允许误差范围，说明不同试剂盒检测系统的误差巨大，必须以比对试验来进行验证。若原装配套方法与比较方法的比对结果临床可以接受，则可认为实验方法的准确度可以溯源，不同检测系统的检验结果具有可比性。配伍组设计资料的方差分析表明，不同试剂盒检测系统血清乳酸脱氢酶测定结果的差异均不具有统计学意义。相关与回归分析表明，实验方法与比较方法间的相关系数（r）均

参考文献：

[1]International Organization for Standardization. General Requirements for the Competence of Testing and Calibration Laboratories. ISO / IEC 17025， International Organization for Standardization， Geneva，1999

[2]魏昊，丛玉隆，主编.医学实验室质量管理与认可指南[M].北京：中国计量出版社， 2004.72-75.

[3]The National Committee for Clinical Laboratory Standards. Method Comparison and BiasEstimation Using Patient Samp les[C].App roved Guideline， Second Edition， EP9-A2，2002

[4] Siekmann L，Bonora R，Burtis CA，et al. IFCC p rimary reference procedures for the measurement of catalytic activity concentrations of enzymes at 37 degrees C. International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine. Part 7. Certification of four reference materials for the determination of enzymatic activity of gamma-glutamyltransferase， lactate dehydrogenase， alanine aminotransferase and creatine kinase accord[J].Clin Chem Lab Med，2002，40：739-745.

[5]郭健，王清涛，杨振华，等.血清酶测定标准化的实验研究[J].中华检验医学杂志，2002，25： 147-149.

[6]王清涛，童清，郭健.血清酶测定结果可溯源性研究[J]. 中华检验医学杂志， 2003， 26： 761-763.

[7]丛玉隆，冯仁丰，陈晓东，主编. 临床实验室管理学[M]. 北京：中国医药科技出版社， 2004 111-114.

[8]Moss DW. Enzyme reference materials： Their place in diagnostic enzymology[J].J iFCC， 1994，1：6-9.