结核分枝杆菌Rv1009蛋白的免疫学特性研究

【摘要】 目的 探讨结核分枝杆菌Rv1009蛋白在体外实验中所表现出的免疫学特征。方法 将小白鼠随机分为Rv1009免疫组和生理盐水组， 各5只。Rv1009免疫组小白鼠需要在腹股沟皮下包埋两条NC膜， 进行3次免疫， 每次免疫的时间间隔为2周；生理盐水组小白鼠皮下注射生理盐水即可。收集所有小白鼠的血清， 采用ELISA方式来对小白鼠血清中抗体的滴速情况进行测定。结果 从实验中发现， 小白鼠免疫血清抗体的滴速情况为1：1700， 淋巴细胞的增殖数量为（2.5±0.2）， 鼠源性γ干扰素（IFN-γ）的含量为（1250±33）pg/ml， 白细胞介素-10（IL-10）的含量为（522±16）pg/ml， 以上数量均明显高于生理盐水组[（0.8±0.1）、（255±20）pg/ml、（75±5）pg/ml]。在白细胞介素-12（IL-12）的水平情况方面， 各组别之间的含量较为相近。结论 结核分枝杆菌Rv1009蛋白具有极强的临床研究价值， 很有可能会成为未来新型的结合疫苗， 为人类的生命健康安全带来福音。

【关键词】 结核分枝杆菌Rv1009蛋白；体外实验；免疫学特性；皮下注射

结核病是危害人类健康的头号公敌， 是传染病中给人类造成伤害最为严重的疾病。在临床中， 针对结核疾病主要使用的药物是卡介苗， 但是从近几年的研究上来看， 卡介苗的保护性不完整情况越来越突出， 再加上人口流动性和艾滋病流行、吸毒、酗酒等外界因素的影响， 结核疾病在全世界范围内广泛扩散， 并且呈现出发病人群的数量回升的趋势。为了积极研究结核疾病的致病机制和免疫机制， 研究出有效预防和治疗结合疾病的药物， 本院特进行了一次研究， 取得了较为良好的效果， 现将具体情况报告如下。

1 材料与方法

1. 1 材料 液体培养液主要由Difco公司提供， IFN-γ、IL-10和IL-12所需要使用的检测试剂盒由深圳晶美公司提供[1]， OADC和RPM11640培养所需要的培养基主要由GIBCO公司提供。另外还在华美生物公司购进了E.coliDH5α和羊抗鼠。本次研究中所使用的对象为小白鼠， 均为雌性。

1. 2 研究方法

1. 2. 1 制备融合蛋白和转移膜[2] 将转化的E.coli DH5α添加在20 ml的培养液中， 在37℃的环境中进行振荡培养， 培养的时间在4 h左右， 并且使用IPTG进行诱导。对上述制备好的融合蛋白进行急菌处理， 将其转移到硝酸纤维素膜上， 将含有目的蛋白表达的NC膜剪下备用即可。

1. 2. 2 免疫小白鼠[3] 将小白鼠随机分为Rv1009免疫组和生理盐水组， 各5只。Rv1009免疫组小白鼠需要在腹股沟皮下包埋两条NC膜， 进行3次免疫， 每次免疫的时间间隔为2周；生理盐水组小白鼠皮下注射生理盐水即可。收集所有小白鼠的血清， 采用ELISA方式来对小白鼠血清中抗体的滴速情况进行测定。

2 结果

Rv1009蛋白小白鼠血清特异性抗体的滴速为1：1700， 生理盐水组小白鼠检测呈现出阴性。Rv1009组淋巴细胞的增殖数量为（2.5±0.2）， 生理盐水组淋巴细胞增殖的数量为（0.8±0.1）， Rv1009组淋巴细胞阻滞的速度较为明显。另外， 在IFN-γ的含量方面， Rv1009组为（1250±33）pg/ml， IL-10的含量为（522±16）pg/ml， 以上数均明显高于生理盐水组的[（255±20）、（75±5）pg/ml]。在IL-12的水平情况方面， 各组别之间的含量较为相近。

3 讨论

在临床研究的过程中， 很多学者在结核领域做出了相当大的贡献， 这些研究的成果在不同程度上给结核的防治带来了积极的借鉴意义[4]， 也给人类带来了福音。学者Mukamolova发现， resuscitation-promoting factor（Micrococcus luteus分泌的能够复活的促进因子， 简称为RPF）[5]能够刺激结核细菌休眠， 也能够促进患者机体繁殖和生长， 在结核疾病中所产生的作用与真核细胞的因子极为相似， 能够进行自我刺激。另外， 还有实验证明， RPF还能够对其他种类的高G+C含量中的革兰阳性菌产生刺激， 也就是说， RPF能够对结核分枝杆菌产生作用[6]。在学者Sassetti的研究过程中发现， RPF蛋白并不是结核株生长所必须具备的条件， 而且这种样蛋白在功能伤害会出现重叠的现象[7]。在本次研究的过程中， 进行试验的小白鼠体内特异性抗体的滴速情况为1：1700， 证实了本次实验研究的结果正确性。淋巴细胞的增殖数量为（2.5±0.2）， IFN-Y的含量为（1250±33）pg/ml， IL-10的含量为（522±16）pg/ml。上述指标均能够证明Rv1009蛋白能够诱导有效细胞产生免疫应答的情况。作者认为， 在感染的过程中首先需要使介导细胞之间出于平衡的状态， 也就是说在本次试验研究中， IL-10在小白鼠体内水平升高不能够单纯地下结论说此种情况对机体会产生不利的影响[8]。

综上所述， 结核分枝杆菌Rv1009蛋白让人们在对抗结核疾病的过程中看到了希望， 具有极强的临床研究价值， 值得在临床中推广应用。

参考文献

[1] 樊爱琳， 师长宏， 苏明权， 等. 结核分枝杆菌Rv1009结构域多肽的免疫学特性研究 .中华检验医学杂志， 2008， 31（11）：1282-1286.

[2] 冷洁， 韩娜， 邹悦.青岛地区链霉素耐药结核分枝杆菌的rpsL43基因突变特征.山东医药， 2014， 54（23）：55-57.

[3] 杨柳， 苏哲， 岳乔红， 等. 结核分枝杆菌Rv1009基因蛋白的克隆和表达. 中国防痨杂志， 2007， 29（1）：12-14.

[4] 薛莹， 姜鸿， 柏银兰， 等. 结核分枝杆菌Rv1009蛋白的免疫学特性. 中国共患病学报， 2007， 23（3）：256-258.

[5] 薛莹， 柏银兰， 高辉， 等. 结核分枝杆菌Rv1009基因真核表达质粒的构建及表达. 中国共患病学报， 2007， 23（7）：664-666.

[6] 樊爱琳， 苏明权， 师长宏， 等. 结核分枝杆菌Rv1009结构域基因的克隆、表达及亲和层析纯化. 生物技术通讯， 2007， 18（4）： 1282-1286.

[7] 阳幼荣， 吴雪琼， 韩跃松， 等. 重组结核分枝杆菌Rv1009蛋白应用价值的研究. 中国现代医学杂志， 2009， 19（22）：3410-3413.

[8] 苏明权， 李立文， 张彩莲， 等. 结核分枝杆菌Rv1009的生物信息学分析及克隆、表达. 生物技术通讯， 2003， 27（6）：557-559.

[收稿日期：2015-02-02]