反相高效液相色谱法测定利培酮片的含量

【摘要】　目的　采用反相高效液相色谱法测定利培酮片的含量。方法　色谱柱选用美国Dikma公司的DiamonsilTMC18反相柱（250　mm×4.6　mm，5　μm），所用流动相为甲醇超纯水（比例为90∶　10），控制流速为每分钟0.8　ml，检测波长为280nm，柱温为30℃，进样量为5　μL。结果　实验结果显示利培酮与片剂辅料及其杂质可完全分离；本组实验分析方法的定量测定下限为0.1　μg/ml，线性范围为1.0～100.0　μg/ml，回归方程为Y=1.08×101X3.02×101，r=0.9996（n=6），平均回收率为99.5%，RSD=0.36%。结论　反相高效液相色谱法方法准确、简单、灵敏，用于利培酮片的含量测定相当有效。

【关键词】　反相高效液相色谱法；利培酮片；测定

作者单位：410005　长沙市第一医院/中南大学药学院 利培酮片为苯并异恶唑衍生物，是新一代的抗精神病药。其活性成份利培酮是一种具有独特性质的选择性单胺能拮抗剂，它与5羟色胺能的5HT2受体和多巴胺的D2受体有很高的亲和力。利培酮也能与α1肾上腺素能受体结合，并且以较低的亲和力与H1组胺能受体和α2肾上腺素受体结合。利培酮不与胆碱能受体结合。利培酮是强有力的D2拮抗剂，可以改善精神分裂症的阳性症状，但它引起的运动功能抑制，以及强直性昏厥都要比经典的抗精神病药少。对中枢系统的5羟色胺和多巴胺拮抗作用的平衡可以减少发生锥体外系副作用的可能，并将其治疗作用扩展到精神分裂症的阴性症状和情感症状。在这篇文章中，将采用反相高效液相色谱法来测定利培酮片的含量。

1　仪器与药物

1.1　仪器选择　选择惠普（HP）AgiLent1100型高效液相色谱仪（HPLC），相应的配套设施有二级管阵列紫外检测器（DAD），　G1311A自动调配泵，G1315B、G1313A自动进样器，以及G1316A可调柱温恒温箱及AgiLent色谱化学工作站；另外还需选择上海医科大学仪器厂生产的旋涡混合器，瑞士的SARTORIUS电子天平，美国的MICRO1224高速离心机以及CSF1A超声波发生器。

1.2　药品和试剂　实验药品为西安杨森制药有限公司制造的利培酮，含量在98%以上，以及由此公司制造的利培酮片，药品批号为020319494，020319492，020319493，此外，美国Dikma公司的甲醇为色谱级，水为超纯水，实验其余试剂均选择分析纯。

1.3　对照品溶液　精密称取利培酮0.1　g，加上甲醇溶解，保证容积在100　ml左右，然后放于冰箱，4℃保存。在临用之前记住用准备好的甲醇将利培酮稀释成所需浓度的利培酮对照品溶液［1，2］。

2　方法和结果

2.1　色谱条件　选取美国Dikma公司钻石色谱柱（250　mm×4.6　mm，5　um），流动相为甲醇超纯水（90∶　10比率），流速为每分钟0.8　ml，柱温为30℃。UV　检测波长约为280　nm，满标吸光度值（AUFS）确定为0.01，并确定进样量5　uL。

2.2　测定样品的制备　首先，取利培酮片（10片左右）进行精密称重，并加以磨研至细成粉末。然后，精密称取片粉，片粉量要适量，大约与利培酮25　mg相当，再将粉末放置于50　ml大小的容量瓶中，在50　ml容量瓶中加入适量的甲醇，接着采用超声震荡大约15　min，使其快速溶解，注意将甲醇稀释到指定刻度［1］，轻轻摇晃，使其均匀，再用事先准备好的0.45　um微孔滤膜进行过滤。最后提取滤液大约1.0　ml，将滤液放置10　ml大小的容量瓶中，加入甲醇稀释到指定刻度，随后取5uL进样。

2.3　对线性关系进行考察　首先，精密吸取事先准备好的标准为0.2　mg/ml的对照品储备液，大小分别为0.5　ml，1.0　ml，2.0　ml，3.0　ml，4.0　ml，5.0　ml，然后将六种体积的同种溶液分别放置于大小为10　ml的容量瓶中，再加入甲醇稀释到指定刻度，轻轻摇晃使其均匀，所得浓度分别为10　ug/ml，20　ug/ml，40　ug/ml，60　ug/ml，80　ug/ml，100　ug/ml，此为对照品溶液。接着分别取此对照品溶液5　uL进样，测出峰面积。最后将峰面积（X）与其对应的浓度（Y）进行线性回归，我们得出回归方程为Y=1.08×101X3.02×101，r=0.9996（n=6）。实验结果显示：利培酮浓度在10ug/ml至100　ug/ml范围内与峰面积线性关系保持良好。在此种条件下，当信噪比（S/N）≥2时，最低检测限为0.1　ug/ml。

2.4　加样回收率　取出标准为30.0ug/ml的对照品溶液大约10.0　ml，将其倒入标准为50.0ug/ml的测定样品溶液中，注意溶液量大小确定为10.0　ml，按照老方法轻轻摇晃使其均匀，各取出5份，每份溶液大小为1　ml。并取5uL进样分析，计算出加样回收率。结果，我们计算出平均回收率为99.5%，RSD=0.36%（n=5）。我们再按照2.2项下测定样品的制备步骤，制备出测定样品，并在一天之内或隔天连续测定5次，每次测定均计算出精密度。结果一天之内RSD=0.52%，隔天RSD=0.61%。

2.5　样品冻存　选择浓度为50　ug/ml的对照品溶液，对其每周进行测定，每周测定次数保证1次以上，连续测定6个星期，在测定的过程中考察其稳定性。实验结果显示RSD=0.48%，说明对照品溶液在此种条件下至少在6星期之内稳定性良好。

2.6　样品的测定　取利培酮片30片，分3批进行实验，每批数量均为10片，然后按照2.2项下测定样品的制备步骤制备出所需样品，每批样品均测定5次以上，测定的过程中注意计算样品的含量［3］。

3　讨论

利培酮片用于治疗急性和慢性精神分裂症以及其他各种精神病性状态的明显的阳性症状（如幻觉、幻想、思维紊乱、敌视、怀疑）和明显的阴性症状（如反应迟钝、情绪淡漠及社交淡漠、少语），也可减轻与精神分裂症有关的情感症状（如：抑郁、负罪感、焦虑）。有效利用反相高效液相色谱法测定利培酮片的含量，将对利培酮片的临床效应带来极大的影响。

参　考　文　献

［1］　国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）.北京：化学工业出版社，2000：13.

［2］　付崇铭，孟键，刘新泳，等.培酮片的RPHPLC测定.中国医药工业杂志，2000，31（7）：307308.

［3］　李华芳，李鸣，林治光，等.利培酮的血药浓度与临床效应的关系.上海精神医学，11（4）：189192.