颊针对类风湿性关节炎家兔镇痛效应及脑脊液八肽胆囊收缩素和β―内啡肽的影响

【前言】颊针对类风湿性关节炎家兔镇痛效应及脑脊液八肽胆囊收缩素和β―内啡肽的影响由文秘帮小编整理而成，但愿对你的学习工作带来帮助。Abstract：Objective To observe the analgesic effect of buccal acupuncture and explore its central analgesic mechanism in experimental rheumatoid arthritis rabbits. Methods A total of 48 rabbits were randomly divided into normal control group， mode...

摘要：目的 观察颊针对类风湿性关节炎家兔的镇痛效应，并探讨其中枢作用机制。方法 48只青紫蓝兔随机分为正常组、模型组、体针组和颊针组，将后2组又随机分为针后即时（0 h）和针后1 h亚组，每组8只。采用卵蛋白诱导造成类风湿性关节炎模型。体针组针刺双侧“膝眼”和“足三里”1次，颊针组针刺双侧颊针“膝”1次。针刺后比较正常组、模型组、体针组和颊针组家兔关节局部痛阈及脑脊液中八肽胆囊收缩素（CCK-8）和β-内啡肽（β-EP）的含量。以K+导入法引起家兔腿收缩的最小电流强度作为痛阈；用放射免疫法测定β-EP、CCK-8的含量。结果 模型组痛阈明显低于正常组（P

关键词：类风湿性关节炎；颊针；针刺镇痛；八肽胆囊收缩素；β-内啡肽；兔

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2012.12.014

中图分类号：R245 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2012）12-0037-03

Analgesic Effect of Buccal Acupuncture and Changes of β-EP and CCK-8 in Cerebrospinal Fluid of Experimental Rheumatoid Arthritis Rabbits REN Chao-zhan， DU Xiao-zheng， FANG Xiao-li （Gansu College of Traditional Chinese Medicine， Lanzhou 730000， China）

Abstract：Objective To observe the analgesic effect of buccal acupuncture and explore its central analgesic mechanism in experimental rheumatoid arthritis rabbits. Methods A total of 48 rabbits were randomly divided into normal control group， model group， body-acupuncture group， buccal acupuncture group， and the later 2 groups were further randomized into 0 h and 1 h subgroups， with 8 cases in each group. The rheumatoid arthritis model was established by egg-albumin. For rabbits of body-acupuncture group， bilateral “Xiyan” （EX-LE5） and “Zusanli” （ST 36） were punctured for 1 min， with the needle retained for 30 min. For rabbits of buccal acupuncture group， acupuncture was applied to “xi” for 1 min， with the needle retained for 30 min. The pain threshold was detected with K+ import stimulation method， and β-EP and CCK-8 contents in cerebrospinal fluid were assayed with radioimmunoassay. Results Compared with the control group， the pain threshold of model group lowered significantly （P

Key words：rheumatoid arthritis；buccal acupuncture；acupuncture analgesia；CCK-8；β-EP；rabbits

基金项目：甘肃省中医药科研立项课题（GZK-2010-60）

通讯作者：方晓丽，E-mail：

颊针是指针刺面颊部的特定穴位来治疗疾病的一种方法，是近年来被研究发现并经过大量临床实践所证实的一种行之有效的新型微针系统，尤其对疼痛性疾病的临床效果更明显[1]。本实验用卵蛋白诱导造成类风湿性关节炎模型，以关节局部痛阈和脑脊液（CSF）中八肽胆囊收缩素（CCK-8）和β-内啡肽（β-EP）的含量为观察指标，从动物实验方面观察颊针的镇痛效应，并探讨颊针镇痛的中枢机制。

1 材料与方法

1.1 动物与分组

选用2～3月龄健康青紫蓝兔60只，雌雄各半，体质量（2.5±0.3）kg，动物质量合格证号：医动字14-002，兰州生物制品研究所实验动物中心提供。动物在实验前喂养1周后进行筛选。筛选标准：引起缩腿反应痛阈在1.8 mA左右者应用于实验，大于2.3 mA或者小于1.3 mA提示动物反应迟钝或过敏，弃之不用。实验开始时，将选择的48只青紫蓝兔随机分为正常组、模型组、体针组和颊针组，然后将后2组又随机分为针后即时（0 h）和针后1 h亚组。每组8只。动物自由进食、饮水。

1.2 主要仪器与试剂

WQ-9E测痛仪（北京海淀区电子仪器厂），SN-695B型智能放免γ测量仪（上海核所日环光电仪器有限公司生产），TGL-16 g型高速台式离心机（上海博通化学科技有限公司），YP3001N电子天平（上海甄明科学仪器有限公司）。卵蛋白干粉及完全弗氏佐剂（美国Sigma公司出品，批号124K8942），β-EP、CCK-8放免试剂盒，生研（上海）生物科技有限公司生产。

1.3 造模

模型组及体针组、颊针组各亚组均以卵蛋白诱导造成类风湿性关节炎模型[2]。于造模前3 d，用8%硫化钠作为脱毛剂，脱去家兔膝关节周围（双后腿）和肩胛区预先均匀选定的6个点的毛。将4 mg/mL卵蛋白溶液与等量完全弗氏佐剂混匀，充分震荡成乳化剂。以2%碘酒、75%酒精消毒肩背部选定的6个点后，用注射器每点皮下注射该溶液0.2 mL。14 d后以相同方式、相同剂量重复皮下注射1次。第2次免疫后6 d，消毒家兔双膝关节后，向关节内分别注入0.4 mL浓度为20 mg/mL卵蛋白生理盐水溶液。24 h内家兔出现双膝关节肿胀、活动减少，经测定痛阈明显降低，表示造模成功。

1.4 针刺治疗

体针组：造模成功后，于实验第27日开始，选双侧后肢“膝眼”和“足三里”（取穴参照《实验针灸学》家兔常用针灸穴位定位标准并以比较解剖学为依据定位）。用平补平泻法针刺1次。针刺方法：采用捻转针法，频率80次/min，每穴操作1 min，留针30 min，每隔10 min行针1次，每次行针15 s。

颊针组：造模成功后，于实验第27日开始，针刺双侧颊针“膝”1次。治疗方法同体针组。颊针“膝”穴的定位方法[1]：参照人颊针“膝”穴定位标准并以比较解剖学为依据定位，即下颌角前上方约一横指，当咀嚼时咬肌隆起，按之凹陷处与承浆穴连线中点处。

以同样的方式固定正常组和模型组家兔30 min，不针刺。

1.5 观察指标与检测方法

各组动物在针刺后测定痛阈和固定取材，0 h组在针刺后立即测定痛阈，1 h组在针刺起针后1 h测定痛阈。痛阈检测方法参照相关文献[3]，将含有饱和氯化钾溶液的电极安装于家兔右膝关节表面，无关电极连接至右前肢，两极与WQ-9E测痛仪连接，以线性递增强度的直流电将K+导入家兔皮肤做疼痛刺激。将右后腿的收缩反应作为疼痛指标，以引起家兔腿收缩的最小电流强度作为痛阈。共测3次，每次之间间隔5 min，取其平均值作为痛阈。

各组动物在测定痛阈后立即抽取脑脊液。以30%乌拉坦耳缘静脉注射麻醉（1 g/kg）家兔，麻醉成功后，取侧卧位，用7号静脉穿刺针于枕外隆凸下0.5 cm处进入小脑延髓池，抽取1 mL脑脊液，注入提前浸于冰浴中的收集管中，然后立即在沸生理水中煮5 min，4 ℃、4 000 r/min离心20 min，取上清液，-20 ℃低温保存待测。采用放射免疫分析技术测定β-EP、CCK-8的含量。

1.6 统计学方法

采用SPSS13.0软件进行分析，实验数据用―x±s表示。各组间均数比较采用方差分析。组间均数的两两比较，先检验方差齐性，方差齐时选择S-N-K法，方差不齐时选择Dunnett T3法。P

2 结果（见表1～表3）

表1 各组家兔不同时点关节局部痛阈值比较（―x±s，mA）

组别 只数 0 h 1 h

正常组 8 1.85±0.12

模型组 8 1.41±0.16**

体针组 8 1.66±0.14** 1.54±0.06**

颊针组 8 1.75±0.11* 1.56±0.15**

注：与正常组比较，*P

P

表2 各组家兔不同时点脑脊液中β-EP含量比较（―x±s，mg/L）

组别 只数 0 h 1 h

正常组 8 111.85±9.35

模型组 8 129.65±7.85**