益气养阴清热化痰中药复方调节肺癌恶病质细胞因子

【摘要】 目的 研究益气养阴清热化痰中药对晚期肺癌恶病质小鼠治疗反应状况。方法 建立晚期lewis肺癌动物模型，随机分为非荷瘤对照组、荷瘤对照组、中药组和甲羟孕酮组。浓缩中药溶液和甲羟孕酮(16mg/kg·d)于造模5天后出现恶病质后每日灌服0.2ml，对照组0.2ml生理盐水灌胃，连续8天。观察小鼠体重、饲料消耗量；免疫组织化学法检测肿瘤组织tnf?α、il?6的表达。结果 （1）小鼠生存状态：体重和饲料消耗量，中药组和甲羟孕酮组与荷瘤对照组比较差异有统计学意义（p<0.05）；中药组和甲羟孕酮组之间差异无统计学意义（p>0.05）。（2）免疫组化检测肺癌组织：中药组和甲羟孕酮组tnf?α和il?6表达较荷瘤对照组有不同程度减少（表现为灰度值增加），差异有统计学意义（p<0.05）。结论 益气养阴清热化痰中药对tnf?α、il?6表达有不同程度的抑制作用，在改善lewis肺癌恶病质小鼠的生活质量上与甲羟孕酮的作用相似。

【关键词】 恶病质 细胞因子（tnf?α、il?6） 中药复方

恶病质是晚期肿瘤的常见综合征，严重影响病人生活质量，而且影响治疗方案的实施，降低化疗敏感性，增加治疗的难度和相关治疗并发症的发生[1,2]。如何控制晚期肺癌恶病质症状、改善生活质量，笔者运用益气清热养阴中药治疗晚期肺癌恶病质小鼠，收到较好的疗效，为临床提供一定的理论基础，现报道如下：

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物及癌株 c57bl/6近交系小鼠， 6～8周龄，雌雄各半, 体重平均(18±2)g。均购自徐州医学院动物中心。鼠源性lewis肺癌细胞（llc）购自中科院上海细胞库。

1.1.2 药品与试剂 中药复方（徐州广济连锁药店中药房）；甲羟孕酮（山东临汾云鹏药业有限公司）；tnf?α和il?6免疫组化试剂盒购自福州迈新公司。

1.2 方法

1.2.1 动物模型的建立 取新鲜lewis肺癌癌块，剪碎研磨经400目滤网过滤，制成单细胞悬液，用生理盐水将悬液稀释成5×106个/ml癌细胞原液。将60只小鼠雌雄各半，随机分为四组，非荷瘤对照组（hc）、荷瘤对照组（ns）、中药治疗组（tcm）和甲羟孕酮组（mpa）。在小鼠腋前线第6肋间胸膜腔，每只接种0.2ml lewis肺癌细胞悬液（5×106个/ml）。非荷瘤对照组注射等量的生理盐水。约于造模5天后进入恶病质状态（体重明显下降，摄食活动减少）。给予治疗组每日分别灌服浓缩中药溶液(2.575g/ml)及甲羟孕酮（16mg/kg·d）各0.2ml，其余两组0.2ml生理盐水灌胃，连续8天。

1.2.2 观察指标 （1）小鼠生存状态：体重：在每日上午8∶00～10∶00测量每只小鼠的体重，精确到1/100g。饲料消耗量：每日上午8∶00～10∶00定量给予每组小鼠饲料，24h测量盒内剩余的饲料量，计算小鼠的饲料消耗量，精确到1/100g。饲料摄取量=前1天饲料量-次日饲料量。（2）tnf?α和il?6的表达按免疫组织化学试剂盒检测。

1.3 统计学方法

用spss 11.5软件包处理，数据以±s表示，统计学采用方差分析和t检验，p<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 小鼠生存状态

除非荷瘤对照组外其余各组小鼠均出现体重下降、摄食减少、恶病质状态明显，病程中小鼠活动减少、睡眠时间缩短、蜷曲、精神萎靡、毛发脱落。药物治疗后有好转。

2.1.1 体重 除非荷瘤对照组外，其他两组小鼠均出现不同程度的体重下降，生理盐水组体重下降尤其明显。通过药物治疗后，中药组、甲羟孕酮组与之相比较体重下降有统计学意义（p<0.05），中药组与甲羟孕酮组比较差异无统计学意义（p>0.05），见表1。表1 各组小鼠体重（克）(±s，n=15)

分组用药前第1天接种后第5天用药后第4天用药后第8天tcm19.38±0.7219.21±0.7719.95±1.2320.68±1.55*ns19.40±0.5819.14±0.4718.55±1.1118.16±1.57mpa19.39±0.5319.12±0.4720.02±0.4320.34±0.50*hc19.34±0.5320.12±0.4720.88±0.4321.89±0.50

注：tcm组、甲羟孕酮组与ns组比较 ：*p<0.052.1.2 饲料消耗量 除非荷瘤对照组外，其他两组小鼠均出现不同程度的消耗量下降，中药组、甲羟孕酮组消耗量下降不明显,与荷瘤对照组比较，差异有统计学意义（p<0.05），见表2。

2.2 免疫组化

中药组、甲羟孕酮组tnf?α和il?6表达有不同程度减少（表现为灰度值增加），与荷瘤对照组比较，差异有统计学意义（p<0.05），见表3。表2 各组小鼠饲料消耗(±s，n=15)注：中药组、甲羟孕酮组与荷瘤对照组(ns)比较：* p<0.05表3 各组中tnf?α和il?6灰度值的表达 注：中药组、甲羟孕酮组与荷瘤对照组比较：* p<0.05

3 讨论

恶病质发生的确切机制目前仍不很清楚，但有充分证据显示tnf?α和il?6等细胞因子的介导具有关键作用[2，3]。在动物模型和临床病人血液和组织中均可以检测到tnf?α和 il?6等细胞因子水平的升高[3，4]。本实验研究结果与此相同。经中药治疗后，tnf?α和 il?6的表达均下降，与生理盐水荷瘤对照组比较，差异有统计学意义。

皮质类固醇是临床最常应用的药物，对恶性肿瘤病人可增强其食欲，但却不能因此而增加体重和使肌肉恢复。甲羟孕酮口服治疗恶病质自1987年开始应用于临床，其提高食欲增加体重的疗效得到了充分的肯定，本研究亦证实了这一点。

根据肺癌恶病质的中医基本病理变化，组成以清热益气养阴为主的中药复方，重在调整肿瘤晚期阶段的免疫紊乱，增加小鼠t细胞亚群，显著提高机体免疫系统功能，达到提高宿主的生活质量[5，6]。中药复方以黄芪、紫灵芝、黄芩、桑白皮、葛根、全栝楼、沙参、麦冬等组成。方中黄芪、紫灵芝益气健脾，黄芩、桑白皮、葛根、全栝楼清肺润肺，沙参、麦冬润肺养阴。全方共奏益气养阴，清肺化痰之功效。本实验研究表明中药对改善小鼠生存状态有较好作用，与甲羟孕酮作用相似。我们期待进一步的临床研究证实。

【参考文献】

［1］ o'gorman p, mcmillan dc, mcardle cs. impact of weight loss, appetite, and the flammatory response on quality of life in gastrointestinal cancer patients[j]. nutr cancer，1998，32(2):76?80.

［2］ de wys w. management of cancer cachexia[j]. sem oncol, 1985,12:452?460.

［3］ inuia.cancer anorexia?cachexia syndrone:current issues in resea?rch and management[j].ca cancer j clin,2002,52(2):72?91.

［4］ plata?salam, cr.central nervous system mechanisms contributing to the cachexia?anorexia syndrome[j].nutrion,2000,16(10):1009?1012.

［5］ 李鸣真，叶望云，陆付耳.中医“清热解毒法”实质的研究[j]. 浙江中西医结合杂志，2000，10（8）：449?450.

［6］ 朱智彤，姚智，娄建石，等.葛根素对缺氧?复氧时乳鼠心肌细胞分泌细胞因子的作用[j].中国药理学通报，2001，17（3）：296?298.