HPLC法测定清热解毒片中绿原酸的含量

【摘要】目的：建立高效液相色谱法测定清热解毒片中绿原酸的含量方法。方法 实验条件为色谱柱：KromasilC18（250mm×4.6mm，5μm），流动相：乙腈-0.4%的磷酸（20：80）检测波长：324nm，流速为1.0mlmin-1。结果：绿原酸平均回收率为 98.89%，RSD为0.68%（n=6）。结论：该法简便，结果准确，专属性强，重现性好,可将其作为清热解毒片的质控指标之一。

【关键词】hplc法；清热解毒片 ；绿原酸

Content Determination of Chlorogenic acid in Qingrejiedu Films by HPLC

Wangchunli

（Zhoukou Municipal Institute For Food and Drug Control,Zhoukou 4660000）

【Abstract】ObjectiveTo establish high performance liquid chromatography to detect the contents of qingrejiedu films chlorogenic acid .Methods:the experimental conditions for chromatographic column KromasilC18（250mm×4.6mm，5μm）,mobile phase: acetonitrile-0.4%phosphate(20:80),Detected wavelength: 324nm,tending now velocity of 1.0mlmin-1. Results: the average recovery for pingyi 98.89% ,RSD 0.68% (n=6)。ConclusionThe method is simple,accurate and strong specificity,reproducible and can be as qingrejiedu films slice quality indexes.

【Key words】HPLC； qingrejiedu films； chlorogenic acid

清热解毒片是由生石膏、金银花、栀子、连翘、黄芩等十二味中药组成，具有清热解毒的功效，临床主要用于热毒壅盛所致发热面赤、烦燥口渴、咽喉肿痛；流感、上呼吸道感染见上述症候者。为临床常用药。其质量标准载于《卫生部药品标准》[1]，现行质量标准只对绿原酸和栀子苷进行了薄层鉴别，无含量测定的方法。而方中金银花的用量和功用占主导地位。本文参照《中国药典》双黄连口服液[2]和药材金银花[3]的含量测定方法，采用HPLC法以绿原酸为质控指标对清热解毒片中的金银花进行含量测定。实验结果表明，本文所建立的方法，具有良好的专属性、准确度和重现性，并且操作方法简单，所用的色谱系统也很普遍。故将其作为含量测定质控指标之一。

1仪器与试药

LC-10ATvp型高效液相色谱仪（日本岛津），SPD-10Avp型紫外检测器，N2000型色谱数据工作站，92SM-202A型普利赛斯电子分析天平。绿原酸对照品（批号：110753-200413，中国药品生物制品检定所），清热解毒片（河南百年康鑫药业有限公司 20091002,20100201,20101213），乙腈为色谱纯，磷酸为分析纯，水为重蒸馏水。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：KromasilC18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-0.4%的磷酸（20:80）；检测波长：324nm；流速：1.0mlmin-1；进样量：20μl；柱温：室温。理论塔板数按绿原酸峰计算不低于6000；分离度大于1.5。

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液的制备

精密称取绿原酸对照品50.23mg，置于100ml棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液。精密量取2ml置于25ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀；即得对照品溶液。

2.2.2供试品溶液的制备

取本品20片，除去糖衣，精密称定，精密称取相当于一片的量，置于50ml量瓶中，加50%甲醇适量，振摇溶解，再加50%甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

2.2.3阴性对照溶液的制备

取处方中不含金银花的药材，按工艺制成却金银花的阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液.

2.3线性关系考察

精密量取上述储备液1，2，3，4，5，6ml分别置于50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，按上述色谱条件，分别取20μl进样，记录色谱图。以峰面积Y对对照品进样量（μgml-1）作线性回归。结果回归方程（n=6）为：Y=3867738х-7056181 г=0.9996

线性范围为：10.046μgml-1-60.276μgml-1

2.4精密度试验

取线性关系考察中绿原酸浓度为40.184μgml-1的对照品溶液，重复进样5次，结果RSD为1.56%。

2.5阴性干扰试验

取阴性对照溶液，依上述色谱条件测定。结果表明，阴性对照溶液对含量测定无干扰.

2.6稳定性实验

取重复性实验中的第一份溶液，室温下在0、1、2、4、6小时测定，结果表明，本品的供试品溶液在室温6小时内基本稳定，RSD=1.63%，n=5。

2.7重复性实验

精密称取同一批号样品（批号：20100201）6份，按样品测定项下的方法，测定绿原酸的含量，平均含量为2.47 mg.片-1，其RSD为1.69%。

2.8加样回收试验

精密称取已知含量的同一批号样品（批号：20100201，含量2.47mg.片-1，即8.9492mg.g-1）6份，分别精密加入对照品贮备液（50.23mg100mL）各2mL，加50%的甲醇溶解至刻度，摇匀，照本实验样品测定项下的方法测定加样回收率，结果见表1。

2.9样品含量测定

道分娩率。结合一对一全程陪伴分娩的开展，更为此项新技术在产房的运用提供了有力支持。本组对新生儿评分的观察中，未发生新生儿窒息。随着产程的进展，产妇剧烈的产痛，烦躁，过度换气，使氧耗增加，乳酸堆积。子宫收缩的频度增加和子宫收缩时间延长引起胎盘灌注量减少，胎儿易发生缺血、缺氧。

我院采用腰麻-硬膜外联合阻滞镇痛，最大限度地阻滞了子宫和阴道的感觉神经，而对运动神经阻滞则较轻微，弥补了单纯硬膜外镇痛对骶神经阻滞不完善或蛛网膜下腔阻滞过深的缺陷[3]。同时，配伍使用芬太尼，减少了局麻药的用量。该试验结果表明，此镇痛方法镇痛作用起效快，效果好，对产妇血流动力学影响轻微，又不影响产妇的宫口扩张。总产程时间及新生儿Apgar评分两组比较，差异无统计学意义。

腰麻硬膜外联合阻滞麻醉用于分娩镇痛具有浓度较低，镇痛效果确切，起效快，可控性强，不良反应少，安全性高的优点。

参考文献

[1]凌萝达，顾美礼.难产[M].重庆：重庆出版社，2001:233

[2]黄宇光,罗爱伦.21世纪医师丛书•麻醉科分册[M].北京:中国协和医科大学出版 社,2000:11.

[3]庄心良,曾因明,陈伯銮.现代麻醉学[M].3版.北京：人民出版社，2006:2610-2613.