RP-HPLC同时测定复合氨基酸胶囊中五种水溶性维生素的含量

【摘要】目的 建立复合氨基酸胶囊中5种水溶性维生素的含量测定方法。方法 采用反相高效液相色谱法，流动相为乙腈与0.04%戊烷磺酸钠溶液(用醋酸调pH3.0)，流速1.0 ml/min，柱温25℃ ，检测波长为275 nm，进样量为10μl。结果 维生素C、维生素B1、维生素B2、维生素B6和烟酰胺检测浓度的线性范围分别为0.06637～0.33185、0.01651～0.08255、0.0105～0.0525、0.008867～0.044335、0.006987～ 0.034935 mg／ml；平均回收率分别为101.34%、101.98%、98.48%、100.23%、102.56%,RSD分别为1.89％、1.43％、1.48％、0.75％和0.95％。结论 此法准确、简便、快捷、经济，可以同时测定复合氨基酸胶囊中维生素C、维生素B1 、维生素B2 、维生素B6和烟酰胺的含量。

【关键词】复合氨基酸胶囊 水溶性维生素 高效液相色谱法

中图分类号：R927 文献标识码：B 文章编号：1005-0515（2011）5-253-02

Simultaneous Determ ination of five water soluble vitam in compound amino acid capsulesby Reversed-phase HPLC

Yangyong Hanyonghui

(Guizhou Shenqi Pharmaceuticals Co.,Ltd.,Guizhou 550004,China)

【Abstract】Objective To establish a method for assaying five water-soluble vitamins in compound amino acid capsules，Methods By high pefomance liquid chromatography method，the mobile phase consisted of acetonitrile-0.04% 1-Pentanesulfonic Acid Sodium Salt solution(adjusted to pH3.0 with acetic acid),The flow rate was 1.0 ml/min．Column Was Cl8 and was maintained at a constant temperature of about 25℃.Th e detection wavelength was 275 nm．The injecting volume was 10μl.Results The linear ranges of VitC，ViB1，VitB2，VitB6 and niacinamide were 0.06637～0.33185、0.01651～0.08255、0.0105～0.0525、0.008867～0.044335、0.006987～ 0.034935 mg/ml respectively;the average recoveries were 101.34% 、101.98% 、98.48% 、100.23% 、102.56% ,with RSD of 1.89％ 、1.43％ 、1.48％、0.75％和0.95％。Conclusion This method is found to be accurate，simple，quick and saving．It can assay simuh a．neously for VitC 、VitB1、VitB2、VitB6 and niaeinamide in compound amino acid capsules．

【Key words】compound amino acid capsules water-soluble vitamins HPLC

复合氨基酸胶囊由8种氨基酸及11种维生素等组成。虽然有关水溶性维生素含量测定方法的研究报道已有很多，但由于处方、制剂的不同，导致在具体应用时并非每一种分析方法都是通用的。本文建立了一种新的水溶性维生素含量测定分析方法，可同时测定复合氨基酸胶囊中维生素C、维生素B1、维生素B2、维生素B6和烟酰胺的含量，其它成分无干扰。

1 材料

1.1 仪器

P680戴安高效液相色谱仪，UV170U紫外检测器，赛多利斯BP211D电子天平，超声波发生器。

1.2 试药

维生素C、维生素B1、维生素B2 、维生素B6和烟酰胺对照品（中国药品生物制品检定所），乙腈（色谱纯），戊烷磺酸钠（分析纯），醋酸酸（分析纯），复合维生素胶囊样品（贵州神奇神制药有限公司）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A：乙腈；流动相B:0.04%戊烷磺酸钠溶液(用醋酸调pH3.0),梯度洗脱(0.0～8分钟，96%B ；9～15分钟，90% B，16～27分钟，87%B）)，流速：1.0ml/min，进样量：10μl，检测波长为275nm，柱温25℃。

按上述条件进行检测，复合维生素胶囊中维生素C 、维生素B1、维生素B2 、维生素B6和烟酰胺得到很好的分离，分离度分别为：1.67、1.83、1.78、1.73和1.66，理论板数均不低于2000(见下图)。

复合氨基酸胶囊高效液相色谱图

2.2 线性关系

精密称取维生素C、维生素B1、B２、维生素B6与烟酰胺对照品适量，用0.01mol/L盐酸溶液（含0.1%的偏磷酸）溶解并定量稀释制成每1ml中分别约含0.2mg、0.05mg、0.0３mg、0.025mg与0.02mg的混合对照品溶液。分别精密量取上述混合对照品溶液各3?l、6?l、9?l、12l、15?l进样，记录色谱图，以峰面积Ｙ(mAU)为纵坐标，进样量Ｘ（μg）为横坐标，作图，维生素C回归方程为Ｙ=5237.3Ｘ+0.1104(r =0.9998), 维生素B1 回归方程为Ｙ=17845x-0.0101(r=0.99999), 维生素B2回归方程为Ｙ=65211x-0.1149(r=0.9999), 维生素B6回归方程为Ｙ=7507.4x+0.001 (r= 0.9999), 烟酰胺回归方程为Ｙ=14653x+0.1285(r =0.9998)。

2.3 精密度试验

取同一供试液重复进样6次，记录色谱图，维生素C 、维生素B1、维生素B2、维生素B6和烟酰胺峰面积的RSD分别为0.97%、0.83%、0.18%、0.33%、0.62%。

2.4 重复性试验

取同一批号的样品6份，依法测定，维生素C平均含量为111.8％、RSD为1.04%,维生素B1平均含量为106.49％,、RSD为1.24%、维生素B2平均含量为89.80５,RSD为1.47% 、维生素B6平均含量为104.56％,RSD为0.82%和烟酰胺平均含量为113.49％,RSD为1.00%的RSD，结果见表3。

2.5 回收率

取缺维生素C 、维生素B1、维生素B2 、维生素B6和烟酰胺的阴性样品9份，每份0.15g，精密加入约含维生素C（0.4mg/ml）、维生素B1（0.1mg/ml）、维生素B2（0.06mg/ml）、维生素B6（0.05mg/ml）、烟酰胺（0.04mg/ml）的混合对照品溶液25ml，按含量测定项下方法测定，记录色谱图计算回收率，维生素C回收率为101.34％（n=9），RSD为1.89％；烟酰胺回收率为102.56％（n=9），RSD为0.95％；维生素B1回收率为101.98％（n=9），RSD为1.43％；维生素B２回收率为98.48％（n=9），RSD为1.48％；维生素B６回收率为100.23％（n=9），RSD为0.75％。

3 讨论

3.1 试验结果证明，此分析方法的线性、精密度和回收试验均满足方法学验证的要求，5种维生素的回收率均在(97.0％～103.0％)以内。

3.2 通常水溶性维生素测定，离子对试剂的用量在5mmol/L以上，用本法将其用量减少为2 mmol/L，仍然得到了较好的测试结果。对于含有多种维生素的复方药物，由于各种维生素理化性质的差异，导致溶解性的不同，且维生素C极不稳定，易氧化，在溶液状态下稳定性大大降低，试验加入偏磷酸，使维生素C的稳定性大大提高。

3.3 本法为含有多种水溶性维生素的复方制剂种水溶性维生素的测定提供了一种较好的方法。可准确的测定复合氨基酸胶囊中的5种水溶性维生素的含量。

参考文献

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