原子吸收分光光度法测定人血浆中聚普瑞锌的浓度

摘要] 目的：建立人血浆中聚普瑞锌浓度的原子分光光度法测定方法。方法：采用原子吸收光谱仪，设定波长为213.9 nm，光谱通带为 0.5 nm，灯电流为10 mA，火焰类型为空气-乙炔，乙炔流量为1.2 L/min进行分析检测。结果：标准锌溶液线性范围为0.05～2.00 mg/L，定量下限为0.05 mg/L，回收率为103.0%，日内精密度及日间精密度均符合要求。结论：本方法具有选择性强、灵敏度高、稳定性好的特点，适合聚普瑞锌颗粒的人体药代动力学研究。

[关键词] 聚普瑞锌；原子分光光度法；人血浆

[中图分类号] R943 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2011）07（b）-031-02

Determination on the concentration of Polaprezinc Granules in human plasma by atomic absorption spectrometry

YUAN Xiaochun１,２, DAI Zhiyong1, XU Pingsheng1, QIN Qun1

1.Department of Pharmacy, Xiangya Hospital, Central South University, Hu'nan Province, Changsha 410008, China; 2.Department of Pharmacy, Hu'nan Provincial People's Hospital, Changsha 410005, China

[Abstract] Objective: To establish an atomic absorption photometric method for the determination of Polaprezinc Granules in human plasma. Methods: Atomic absorption spectrometer was used and parameters were set as: wavelength was 213.9 nm, band pass was 0.5 nm, lamp current was 10 mA, flame was Air-Acetylene, Acetylene flow rate was 1.2 L/min. Results: The linear range of standard Zinc solution was 0.05-2.00 mg/L, the limit of quantification was 0.05 mg/L, recovery was 103.0%, within-day and between-day precisions all met the requirements. Conclusion: The method has a high selectivity, sensitivity and stability, and it is applied to a pharmacokinetic study of Polaprezinc Granules.

[Key words] Polaprezinc Granules; Atomic absorption spectrometry; Human plasma

聚普瑞锌颗粒（Polaprezinc granules）为L-肌肽络合物[1]，属于促进防御因子类药。由于具有抗氧化及膜稳定作用从而保持胃黏膜体内平衡，达到细胞保护的作用，同时它也能促进伤口愈合，增强防御因子作用，用于防治消化性溃疡，同时它还具有增强黏膜附着性，提高胃黏膜防御作用的功效[2-3]。本品在吸收的过程中锌与L-肌肽解离，L-肌肽在体内参与代谢，经由组胺酸在生物体内作为蛋白质的组成成分而使用，因此聚普瑞锌的体内药代动力学研究以血锌为测定指标。本课题建立火焰原子吸收光谱法测定血浆锌浓度的方法[4-12]，方法简便、准确、灵敏、重现性好，可用于聚普瑞锌的体内药物浓度监测及药代动力学研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器

美国热电公司Solaar M6型原子吸收光谱仪（具空气-乙炔火焰，氘灯，锌空心阴极灯）；TD Z4-WS 台式离心机（赛特湘仪离心机仪器有限公司）；Dragonmed手动可调式移液枪（100 μl和1 000 μl，大龙仪器设备有限公司）；金花牌移液器（5 ml，北京青云卓立精密仪器设备有限公司）。

1.2 试药

锌标准溶液（1 000 mg/L，国家标准溶液（GBW 08620），国家标准物质研究中心）；曲拉通溶液（Triton X-100，Rohm-Haas，进口分装，上海化学试剂采购供应站）；硝酸（优级纯，湖南株洲市化学工业研究院）；实验用水均为双重蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 溶液的配制

2.1.1 锌标准储备液配置精密吸取 1.0 ml锌标准溶液（1 000 mg/L）置100 ml容量瓶，加入1%硝酸溶液稀释至刻度，得10 mg/L锌标准储备溶液。置4℃冰箱备用。

2.1.2 血浆样品锌浓度测定将血浆样品从冰箱中取出，放置恢复到室温后，充分摇匀。精密吸取 0.5 ml血浆样置于具塞试管中，加入1%硝酸溶液 2.0 ml，密塞，摇匀，在仪器设定的工作条件下进行浓度测定。

2.2 仪器操作条件

波长为213.9 nm，光谱通带为 0.5 nm，灯电流为10 mA，火焰类型为空气-乙炔，乙炔流量为1.2 L/min。

2.3 标准曲线和最低定量限

精密吸取0.0、0.5、1.0、3.0、5.0、7.0、10.0、15.0、20.0 ml标准应用液于100 ml容量瓶中，各容量瓶分别加入0.1 ml曲拉通溶液，然后用1%硝酸溶液稀释定容，配成空白和0.05、0.10、0.30、0.50、0.70、1.00、1.50、2.00 mg/L系列标准锌溶液。将原子吸收分光光度计调节至最佳操作条件，在213.9 nm波长下分别测定标准系列，以吸光度（Y）对锌浓度（X）进行最小二乘法线性回归，得回归方程：Y=0.272 4X+0.006 3，r=0.999 4，线性范围为0.05～2.00 mg/L。本法测定血浆锌浓度的定量下限为0.05 mg/L（回收率为103.0%，RSD为5.6%，n=8）。

2.4 方法的精密度与准确度

取空白人血浆，按“血浆样品锌浓度测定”项操作，加入适量标准锌溶液，配制成血锌浓度增加值分别为0.2、0.5、1.0 mg/L的低、中、高三浓度样品各5份，按“血浆样品锌浓度测定”项操作，测得血锌浓度，减去人血浆锌本底浓度，得实测锌加入浓度，再与对应的加入浓度相比，计算低、中、高各浓度的加样回收率和精密度。结果血锌的加样回收率分别为103.3%、101.9%、95.4%，日内精密度RSD分别为2.5%、3.0%、1.5%。按上述方法连续测定3 d，计算日间精密度，得日间RSD分别为4.0%、2.4%、3.1%。

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2.5 血浆样品室温放置稳定性考察

取人血浆，加入适量标准锌溶液，配制成血锌浓度增加值分别为0.2、0.5、1.0 mg/L的低、中、高三浓度样品，在室温条件下放置，分别在0 h和24 h按“血清样品锌浓度测定”项操作，测定血锌浓度。结果低、中、高三浓度的RSD分别为3.7%、2.9%、1.9%，样品在室温放置24 h 稳定。

2.6 反复冻融实验

取人血浆，加入适量标准锌溶液，配制成血锌浓度增加值分别为0.2、0.5、1.0 mg/L的低、中、高三浓度样品，在-40℃冰箱中冷冻后取出，室温融化，然后再冷冻，反复3次，按“血浆样品锌浓度测定”项操作，测定开始和3次冻融后样品血锌浓度。结果低、中、高三浓度的RSD分别为2.5%、3.3%、2.2%，样品在3次冻融过程中稳定。

2.7 冷冻放置稳定性考察

取人血浆，加入适量标准锌溶液，配制成血锌浓度增加值分别为0.2、0.5、1.0 mg/L的低、中、高三浓度样品，在-40℃冰箱中放置，分别在0、5、10、20、30 d取样，按“血浆样品锌浓度测定”项操作，测定血锌浓度。结果低、中、高三浓度的RSD分别为3.1%、2.5%、2.4%，样品在冷冻条件下放置30 d内稳定。

2.8 临床应用

12名健康受试者平均年龄为（22.67±3.27）岁，平均体重为（62.50±5.32） kg，平均身高为（169.00±4.20） cm，禁食10 h，空腹口服聚普瑞锌颗粒150 mg，分别于给药前0 h和开始给药后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、6、8和12 h取静脉血4.0 ml，离心分离出血浆，按“血浆样品锌浓度测定”项操作，测定血锌浓度，得平均血锌浓度-时间曲线，见图1。

3 讨论

原子吸收光谱法测定血锌浓度有极高的选择性，测定方法有石墨炉和氢火焰两种，通过比较发现，石墨炉法虽然取样量少、灵敏度高，但重现性差。因此本实验采用稳定性好的氢火焰法测定血锌浓度，保证了测定结果的准确，有利于开展聚普瑞锌的人体药代动力学研究。

由于锌为人血浆中内源性物质，配制标准曲线不能采用空白血浆。通过溶液提升实验比较，0.1%曲拉通溶液的黏度与血浆基本一致，因此在配制标准锌溶液时，加入0.1%曲拉通溶液为基质，测定结果准确可靠。

本试验采用火焰原子吸收光谱法测定血锌的浓度，血样经1%硝酸稀释处理后，进行定量分析。综上所述，该方法具有选择性强、灵敏度高、稳定性好、操作简便的优点。

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（收稿日期：2011-05-11）

[[通讯作者] 秦群，博士，副教授，主要从事临床药学研究。

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