几种常见淡水鱼致病菌的药敏试验

摘要 研究了强力霉素、盐酸左氧氟沙星、诺氟沙星、红霉素、甲硝唑、土霉素、氟苯尼考、氟强先锋、呋喃妥因9种抗生素和五倍子、大黄、金银花、黄芩、陈皮、黄连、板蓝根、黄柏、连翘、黄梅10种中草药对迟缓爱德华氏菌、嗜水气单胞菌、金黄色葡萄球菌、嗜麦芽寡养单胞菌和藤黄微球菌5种常见淡水鱼类致病菌的体外抑菌效果。结果显示：抗生素中氟苯尼考、诺氟沙星、红霉素、呋喃妥因对这几种致病菌抑菌效果明显；中草药中五倍子、大黄、黄芩的抑菌效果较好。

关键词 淡水鱼致病菌；中草药；抗生素；药敏试验

中图分类号 S948 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2012）19-0254-02

近年来，随着水产养殖规模的扩大和集约化程度的提高，养殖环境日益恶化，近年来水产养殖病害发病率越来越高。细菌性疾病是水产养殖动物最重要的疾病之一，2005年以来暴发的生物源性疾病中，细菌性疾病所占比例超过55%，严重制约了水产业的发展[1]。由于渔民缺乏基本的药理知识，存在滥用抗生素类药物的现象，导致耐药菌株的产生，给细菌病的防治带来了很大的困难。选取了迟缓爱德华氏菌、嗜水气单胞菌、金黄色葡萄球菌、嗜麦芽寡养单胞菌和藤黄微球菌5种常见淡水鱼的致病菌进行体外中西药抑菌试验，旨在为淡水鱼细菌病防治提供依据，减少致病菌耐药菌株的产生。

金黄色葡萄球菌、嗜水气单胞菌、迟缓爱德华氏菌、嗜麦芽寡养单胞菌和藤黄微球菌，均是淡水养殖动物最常见的致病菌，它们的大量繁殖给淡水鱼类养殖业带来巨大威胁。其中金黄色葡萄球菌是毒力最强的引起化脓性疾病的化脓菌，可以产生溶血毒素、肠毒素、血浆凝固酶等毒素和酶，引起水生动物外伤化脓死亡[2]。嗜水气单胞菌通常能够引起的疾病多为暴发性传染病，患病水生动物死亡率较高，通常导致鱼、鳖、鳗、牛蛙及蚌等水生动物的败血症及局部感染[3]。藤黄微球菌是黄鳝出血病的主要病原，黄鳝感染后出现体表弥散性出血、红肿外翻、肝脏肿大出血等症状并造成高死亡率[4]。嗜麦芽寡养单胞菌是近年来引起斑点叉尾鮰高致死性、传染性疾病的主要病原之一，发病鱼主要出现体表褪色斑、脱肛、严重肠炎和腹水等病征，并以肠套叠为主要病理特征，其发病率和死亡率均在90%以上，造成的经济损失极其严重[5]。迟缓爱德华氏菌能引起黄颡鱼食欲减退、离群缓游、反应迟钝，后期鱼嘴周边及各鳍充血斑，下颌皮肤破损出血呈圆形孔洞[6]。

1 材料与方法

1.1 供试菌株

供试菌株为迟缓爱德华氏菌、嗜水气单胞菌、金黄色葡萄球菌、嗜麦芽寡养单胞菌和藤黄微球菌，均由湖南农业大学水产微生物实验室提供。将菌转接到30 mL液体培养基中，30 ℃振荡培养24 h，离心取菌体，用无菌生理盐水稀释成5.0×107个/mL菌悬液备用。

1.2 试液与试纸制备

1.2.1 中草药有效成分的提取。供试中药材五倍子、大黄、金银花、黄芩、陈皮、黄连、板蓝根、黄柏、连翘、黄梅购于湖南农业大学养天和大药房。采用水煎煮法，每种中草药分别取5 g，加水50 mL，浸泡30 min，煎煮沸腾后文火煮30 min，过滤煎液，将药物残渣继续煎煮，共煎煮3次，合并滤液，浓缩至5 mL，使含药量为1 g/mL，于4 ℃下保存（48 h内使用）。

1.2.2 抗生素药液的配置。抗生素药品强力霉素、盐酸左氧氟沙星、诺氟沙星、红霉素、甲硝唑、土霉素、氟苯尼考、氟强先锋、呋喃妥因分别按照一定的浓度配成药液，于4 ℃下保存备用。

1.2.3 联合药敏试验药敏纸片制备。将新华1号定性滤纸用打孔器打成直径为6 mm的纸片，于121 ℃下灭菌30 min，再于100 ℃下烘干；将灭菌后的纸片放于药液中浸泡并翻动30 min；然后将纸片在无菌干燥培养皿中摊开，吹干，再置于无菌加塞小瓶中，最后置于干燥器中或者冷冻保存备用。

1.3 体外药敏纸片抑菌试验方法

接常规方法用灭菌棉签蘸取菌液，均匀涂布于营养琼脂平板表面，静置5～10 min，在无菌条件下，用无菌的眼科镊子取各种药物纸片放置于培养基表面，每个平板4～5片，并轻轻按压，使其紧贴其上，正放5～10 min，待干后，轻轻倒置于28 ℃温箱内培养24 h，取出，测各药物纸片周围抑菌圈的直径，参照一般抗菌药物判定标准及文献介绍新药标准[7]（表1）进行综合判定。

2 结果与分析

2.1 抗生素抑菌效果

从抗生素的抑菌效果（表2）可知，5株致病菌对强力霉素、诺氟沙星、红霉素、甲硝锉、氟苯尼考、呋喃妥因敏感，其中强力霉素、红霉素、氟苯尼考、甲硝锉的抑菌效果最好，抑菌圈的直径均达到20 mm以上。迟缓爱德华氏菌、嗜水气单胞菌、金黄色葡萄球菌、嗜麦芽寡养单胞菌对氟强先锋中度敏感，而藤黄微球菌对氟强先锋则表现出耐药性。这5株菌对盐酸左氧氟沙星均不敏感。

2.2 中草药抑菌效果

从中草药抑菌效果（表3）可知，五倍子、大黄对5株菌的抑菌效果最佳，黄芩次之；金银花对藤黄微球菌、嗜麦芽寡养单胞菌的抑菌效果很好，抑菌圈的直径分别为23 mm和20 mm，而对其他菌株不敏感；黄梅、板蓝根、连翘、陈皮对5株菌不敏感，中西药对5株常见水产动物疾病致病菌的抑菌效果分别见图1～图5。

3 结论与讨论

长期用药，特别是不合理的使用抗生素，使得大量的病原微生物产生了耐药性，许多疾病得不到及时有效的治疗；药物的寿命缩短，造成了极大的损失。因此，如何正确、科学使用药物，延长药物的使用寿命；找到合适中草药替代抗生素是目前的重要任务。药敏试验方便快捷，可在短时间内筛

选出最佳的治疗药物和最佳剂量，为临床用药提供依据，进行针对性治疗，能及时有效地控制疾病的感染，降低渔民的损失；利用中草药替代抗生素，能有效缓解因为过量或者滥用抗生素引起的耐药性。由试验结果可知，中草药中五倍子和大黄对各类致病菌的抑菌效果最佳，在生产实践中，可以用五倍子和大黄代替抗生素治疗淡水鱼病，也能取得较好的疗效。

4 参考文献

[1] 于海罗，于津，肖克宇.洞庭湖区域乌鳢养殖主产区养殖情况调查及分析[J].当代水产，2010（6）：64-67.

[2] 杜锐，韩文瑜，雷连成.动物源性金黄色葡萄球菌耐药检测[J].中国兽医科技，2005，35（3）：230-232.

[3] 郭松林，关瑞章，冯建军，等.嗜水气单胞菌感染对美洲鳗鲡血液和生化指标的影响[J].集美大学学报：自然科学版，2010，14（2）：13-17.

[4] 彭彬，杨光友，陈晓利，等.黄鳝藤黄微球菌的分离鉴定及药敏试验[J].上海海洋大学学报，2011，20（3）：405-411.

[5] 汪开毓，黄锦炉，肖丹，等.嗜麦芽寡养单胞菌脂多糖对斑点叉尾鮰免疫保护作用[J].水生生物学报，2012，36（3）：433-440.

[6] 周冬仁，叶雪平，罗毅志，等.黄颡鱼鲇鱼爱德华氏菌的鉴定及生物学特性研究[J].水生生物学报，2010，34（4）：852-865.

[7] 李焕荣，田丽英，崔德凤，等.致病性嗜水气单胞菌对31种抗菌药物的敏感试验[J].北京农学院学报，2001，16（3）：34-37.