RP-HPLC法测定光石韦中芒果苷的含量

[摘要] 目的 建立光石韦中芒果苷的含量测定方法。 方法 采用rp-hplc法，色谱柱为Agilent TC-C18柱（4.6 mm×250.0 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（13∶87），流速为1.0 mL/min，检测波长为318 nm。 结果 芒果苷在0～2.136 μg范围内呈良好的线性关系，平均回收率为104.24%，RSD ＝ 0.86%（n ＝ 6）。 结论 本方法灵敏、准确，可作为光石韦的质量控制标准。

[关键词] 光石韦；芒果苷； 含量测定；反相高效液相色谱法

[中图分类号] R282.71 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2012）04（a）-0137-03

Determination of Mangiferin in Folium pyrrosiae calvatae by RP-HPLC

WEI Zhijiang

Hechi Institute of Food and Drug Control of Guangxi, Guangxi Zhuang Autonomous Region, Hechi 547000, China

[Abstract] Objective To establish a determination method of Mangiferin in Folium pyrrosiae calvatae. Methods RP-HPLC was used with Agilent TC-C18 (4.6 mm×250.0 mm, 5 μm) as analytical column. The mobile phase was acetonitrile-0.1% phosphoric acid (13∶87). The flow rate was 1.0 mL/min, and the detective wavelength was at 318 nm. Results The calibration curve was linear in the range of 0-2.136 μg for Mangiferin. The average recovery was 104.24% with RSD ＝ 0.86% (n ＝ 6). Conclusion The method is accurate and reliable, which can be applied to quality control of Folium pyrrosiae calvatae.

[Key words] Folium pyrrosiae calvatae; Mangiferin; Determination; RP-HPLC

光石韦收载于《广西中药材标准》1990年版，为水龙骨科石韦属植物光石韦Pyrrosia clavata（Bak.）Ching的干燥叶，功效利尿通淋，清热止血，用于热淋、血淋、石淋、小便不通、淋沥涩痛、吐血、衄血、尿血、崩漏、肺热咳喘[1]。光石韦中含有β-谷甾醇、豆甾醇、胡萝卜苷、齐墩果酸、芒果苷、异芒果苷和蔗糖等多种成分[2]，其中芒果苷具有镇咳、祛痰、平喘、中枢抑制、抗氧化、抗炎、抑菌、抗病毒、抗肿瘤、利胆和免疫调节等广泛的药理活性[3]，为光石韦的主要有效成分。该药材现行质量标准中仅有“性状”鉴别，没有含量测定等检验项目[1]，笔者采用反相高效液相色谱法测定光石韦中芒果苷的含量，结果表明方法简便，准确，重复性好，为光石韦的质量标准提高提供了科学依据。

1 仪器与试药

岛津LC-2010A高效液相色谱仪；自动进样器（岛津）；双通道紫外检测器（岛津）；LCsolution色谱工作站（岛津）；XS205DU电子分析天平（METTLER TOLEDO）；TU-1901紫外-可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

芒果苷对照品（购自SIGMA公司，批号：1000837698）；光石韦药材10批（自采3批，市售7批）；乙腈、磷酸为色谱纯，其他试剂为分析纯，水为超纯水。自采药材经广西中医药研究院黄云峰鉴定为水龙骨科植物光石韦Pyrrosia clavata（Bak.）Ching。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent TC-C18柱（4.6 mm×250.0 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（13∶87）；检测波长：318 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：30℃；进样量：10 μL。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取芒果苷对照品10.68 mg，置100 mL量瓶中，加50%乙醇适量溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（106.8 μg/mL）。

2.3 供试品溶液的制备

取本品粉末（过三号筛）约0.1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%乙醇25 mL，超声处理（功率200 W，频率40 kHz）1.5 h，放冷，再精密称定重量，用50%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1 mL，置5 mL量瓶中，加50%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4 专属性试验

精密吸取对照品溶液、供试品溶液10 μL，分别注入液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件测定，光石韦供试品色谱图中，在与对照品色谱峰相应位置（tR=15.0 min）上，确认了芒果苷的吸收峰。其他成分峰与芒果苷峰分离度良好，对测定无干扰。见图1。

2.5 线性关系考察

分别精密吸取对照品溶液0、1、2、5、10、20 μL，注入液相色谱仪，以进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y = 1.791 778 × 106X - 4.116 8 × 104，（r =0.999 0，n = 6），表明芒果苷在0～2.136 μg范围内呈良好的线性关系。

2.6 提取条件筛选

为筛选最佳提取条件，笔者采用正交实验法对不同条件的提取效率进行考察[4]，结果见表1、2。

表1 因素水平设计

表2 正交试验结果分析

由表2中极差分析可知，A因素对提取效率的影响最大，B因素影响最小，顺序依次为A＞C＞B，因此最佳提取条件为A1B1C3。

2.7 精密度试验

精密吸取同一供试品溶液（靖西龙康，批号：100303）10 μL，按“2.1”项下色谱条件连续进样分析6次，测定色谱峰面积，结果峰面积的RSD = 0.29%（n = 6），表明本法精密度良好。

2.8 重复性试验

取同一批样品，按“2.2”项下方法制备6份供试品溶液，分别进样10 μL，按“2.1”项下色谱条件测定，芒果苷平均含量为81.051 7 mg/g，RSD = 2.28%（n = 6），表明本法重复性良好。

2.9 稳定性试验

取同一样品溶液，分别在0、2、6、12、18、24 h进样10 ?L测定芒果苷峰面积，结果RSD = 0.33%（n = 6），表明样品溶液在24 h内稳定。

2.10 加样回收试验

取同一批次药材（含量81.051 7 mg/g）粉末6份，精密称定，分别精密加入芒果苷对照品适量，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，计算回收率，平均回收率为104.24%，RSD = 0.86%（n = 6）。见表3。

表3 光石韦中芒果苷回收率测定结果（n = 6）

2.11 样品测定

取光石韦药材10批，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL注入液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件测定芒果苷峰面积，以外标法计算各样品中芒果苷的含量。见表4。

表4 光石韦中芒果苷的测定结果（n = 10）

3 讨论

3.1 提取方法与提取条件的选择

目前中药材中有效成分的提取通常采用加热回流提取、索氏提取和超声提取，其中超声提取法具有操作简便，提取效率高的优点，可将中药材中的芒果苷提取完全[4-5]，故采用超声提取法。从“2.6”项下正交实验结果可知，最佳提取条件为：乙醇浓度50%，溶剂用量25 mL，超声时间1.5 h。

3.2 检测波长的选择

取芒果苷对照品适量溶于50%乙醇中，在200～400 nm波长范围内扫描，结果芒果苷在240、258、318、366 nm处均有最大吸收峰。以258、318 nm为检测波长在用高效液相色谱法测定芒果苷含量的文献中均有报道，本法选择318 nm为检测波长。

3.3 流动相的选择

曾用不同比例的甲醇-0.1%磷酸溶液为流动相进行试验，发现目标峰峰形不够尖锐，且分离效果不理想；笔者参照文献[6-9]，用乙腈-0.1%磷酸溶液（13∶87）为流动相进行试验，结果目标峰峰形较尖锐，分离效果好，故选其作为流动相。

[参考文献]

[1] 广西壮族自治区卫生厅.广西中药材标准1990年版[S].南宁：广西科学技术出版社，1992：43-44.

[2] 郑兴，许云龙，徐军，等.光石韦化学成分的研究[J].中草药，1999，30（4）：253-254.

[3] 周智.芒果苷药理实验研究新进展[J].内科，2011，6（5）：462-464.

[4] 王自军，杨红兵，齐誉，等.正交设计研究石韦总黄酮和鞣质提取工艺[J].时珍国医国药，2007，18（2）：463-464.

[5] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：197-185.

[6] 李开通，张艺轩，曹阳，等.HPLC法测定不同产地和品种石韦中绿原酸和芒果苷的含量[J].中国中药杂志，2010，35（16）：2075-2078.

[7] 吴怀恩，劳深，王雯慧，等.HPLC测定石韦配方颗粒中绿原酸、咖啡酸及芒果苷的含量[J].中国实验方剂学杂志，2010，16（16）：54-56，61.

[8] 温金莲，周清，宋粉云.RP－HPLC测定栀子金花丸中芒果苷的含量[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（17）：65-67.

[9] 陈露，刘布鸣，马军花，等.中药石韦的研究概况[J].广西医学，2011，33（11）：1486-1489.

（收稿日期：2011-12-23 本文编辑：卫 轲）