激素对黑莓‘Kiowa’叶片愈伤组织诱导的影响

摘要：以黑莓品种‘Kiowa’无菌苗的叶片为外植体，研究了外源生长调节剂对愈伤组织诱导的影响。结果表明：不同激素种类、浓度及其配比诱导‘Kiowa’的叶片都可以产生愈伤组织，并且诱导率都为100%，但愈伤组织的状态和生长量有显著差异。其中添加2，4-D产生的愈伤组织质量较好，生长素和细胞分裂素组合使用时有抑制愈伤组织诱导的作用；添加10 mg/L 2，4-D的MS培养基诱导的愈伤组织多，质地疏松，呈嫩黄色颗粒状。

关键词： 黑莓‘kiowa’；叶片；愈伤组织；悬浮培养

中图分类号：S663.204+.3文献标识号：A文章编号：1001-4942（2013）04-0051-04

黑莓（Rubus spp）是蔷薇科悬钩子属的一种多年生浆果类果树[1]，原产于北美，其果实为聚合果，营养丰富，富含糖、果酸及多种维生素，有防衰老和提高人体免疫力等功效，是近年来国内外兴起的第三代水果之一[2，3]，具有很高的经济价值。

黑莓中富含维生素E[4]。以黑莓叶片为外植体诱导产生愈伤组织，再通过细胞悬浮培养快速产生大量的含维生素E的细胞，是一种快速增殖天然维生素E的方法。目前国内对黑莓愈伤组织诱导的研究较少，更没有利用愈伤组织进行悬浮培养获得高产维生素E的报道。本试验以黑莓品种‘Kiowa’的叶片为外植体，研究了激素种类、浓度以及激素配比对愈伤组织诱导的影响，目的是筛选适于悬浮培养的愈伤组织的最佳诱导方法，为利用黑莓细胞悬浮培养获得高产维生素E奠定基础。

1材料与方法

11材料

本试验于2012年3～6月进行。黑莓品种‘Kiowa’无菌苗的叶片，取自中国科学院植物研究所组织培养实验室（南京）。取叶龄30～40天的黑莓组培苗从上往下数第2～5片叶，剪去叶尖及叶缘，剪成05 cm×05 cm左右的方块作为接种材料。接种时，使叶片背面接触培养基。

12方法

121激素种类对‘Kiowa’叶片愈伤组织的诱导 将‘Kiowa’组培苗的无菌叶片分别接种于附加10 mg/L 2，4-D、NAA、IAA、IBA、6-BA、KT、TDZ、ZT的MS培养基上，暗培养20天后观察、统计结果，比较不同激素种类对愈伤组织诱导的影响。

1222，4-D浓度对‘Kiowa’叶片愈伤组织的诱导将‘Kiowa’组培苗的无菌叶片分别接种于附加不同浓度2，4-D（05、10、15、20、30、50 mg/L）的MS培养基上，暗培养20天后观察、统计结果，比较不同2，4-D浓度对愈伤组织诱导的影响。

123生长素和细胞分裂素组合对‘Kiowa’叶片愈伤组织的诱导将‘Kiowa’组培苗的无菌叶片分别接种于附加不同浓度生长素（2，4-D）与不同浓度细胞分裂素（6-BA或TDZ）组合的MS培养基上（见表3、表4），暗培养20天后观察、统计结果，比较生长素和细胞分裂素组合对愈伤组织诱导的影响。

以上所有处理的基本培养条件是：MS培养基中蔗糖浓度为25 g/L，琼脂为56 g/L，pH值58～60，培养温度为（25±2）℃。每个处理接种叶片20个，重复3次。

124愈伤组织诱导率的计算愈伤组织诱导率（%）=（形成愈伤组织的外植体个数/接种外植体总数）×100。

2结果与分析

21激素种类对‘Kiowa’叶片愈伤组织诱导的影响

激素种类是影响植物离体器官愈伤组织发生的关键因素，在其培养中起着极为重要的调节作用[5]。由表1可以看出，当激素浓度为10 mg/L时，不同的生长素类和细胞分裂素均可诱导‘Kiowa’的叶片产生愈伤组织，且诱导率为100%，出愈时间基本一致，一般为7～10天，但是愈伤组织的状态和生长量有显著差异。其中2，4-D和TDZ诱导的愈伤组织质地疏松，且前者是颗粒状，颜色比后者更为嫩黄，总体质量也比较好，其它生长素类激素NAA、IAA、IBA虽然也能诱导出愈伤组织，但颜色和质量均不符合目标性状的要求。比如NAA诱导的愈伤组织为翠绿色，IAA、IBA诱导的为黄绿色，且呈块状、质地紧密，后期很容易生根，不利于后续的悬浮培养。细胞分裂素类激素6-BA、KT、ZT诱导的愈伤组织不仅质地紧密，且愈伤量很少，其中6-BA、KT诱导出的愈伤组织呈颗粒状黄绿色，ZT诱导出的愈伤组织呈块状黄色。由此分析认为，只有添加2，4-D的培养基诱导出的愈伤组织才最适于后续的细胞悬浮培养。