温阳活血通络方对硬皮病小鼠作用研究

【摘要】探讨温阳活血通络方对博莱霉素引起的小鼠硬皮病的治疗作用。方法：把60只清洁级Balb/c小鼠随机分为对照小组（10只）和模型组（50只），用博莱霉素选取模型组小鼠背部左侧区域皮下注射，持续28天，对照小组用PBS在相同部位皮下注射。待小鼠皮肤切片观察造模成功后，再把模型组分为中西药小组（10只）、西药小组（10只）、中药小组（10只）、模型对照小组（10只）。分别灌药，持续28天后再处死小鼠，剪去注射部分表皮组织，通过HE染色和皮肤厚度测量对比各组药物的治疗效果。结果：中西药小组的皮肤组织恢复最明显，其次是中药组，最后是西药组。结论：中西药结合应用可以最有效的改善硬皮病小鼠的皮肤组织病变。

【关键词】硬皮病；温阳活血通络方；Balb/c小鼠

【中图分类号】R285.5 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949（2014）04-0173-01

硬皮病（SD）是一个发病原因及机制当今还尚不十分清楚的与免疫、环境等紧密联系的结缔组织病.目前关于硬皮病的发病机制存在着许多的假说，但是具体病因还不十分的明确，大多数学者研究认为该病可能与遗传、人种、环境、药物、免疫异常、血管异常、结缔组织异常、性别等因素有关。悉尼学者曾做过关于硬皮病与遗传关系的研究，最后发现到，患者一级亲属患病的可能性比普通一般群体要多达11-158倍[1]。

1实验耗材与方法

1.1实验耗材

清洁级的Balb/c实验用小鼠，总计60只，都选雌性，全部为6周龄，购买时称重每只达到17-22g左右，都从湖北省动物实验中心购入，合格号：（鄂）2014-0-004。本次实验所用的温阳活血通络方，其中药组成包括：淫羊藿20g、丹参20g、黄芪20g、竹节参15g、当归10g、桂枝10g、白芍10g、白芥子10g、甘草5g，加蒸馏水煎煮成汤剂，以上中药，购自于湖北民族学院附属民大医院中药房。醋酸泼尼松片，5mg/片，从湖北民族学院附属民大医院的西药房购买，国药准字：H36020039，批号：111257。注射用进口盐酸博莱霉素粉剂（BLM），15mg/支，从日本化学药株式会社购买。另外，一些实验检测设备等全部由湖北民族学院附属民大医院风湿性疾病发生与干预免疫实验室与病理科提供。

1.2实验方法

在适应性饲养7天后，将60只Balb/c小鼠取出，随机地把它们分成10只的对照小组和50只的模型组。造模前，选取背部左侧区域消毒，先用弯头剪刀剃去小鼠背部左侧相同部位的被毛。

将准备好的400ug/ml的博莱霉素从模型组小鼠的背部左侧脱毛皮肤区皮下注射0.1ml，每天1次，持续注射总计28天，将准备好的对照小组在相同的地方皮下注射PBS0.1ml，每天1次，持续注射总计28天。

硬皮病小鼠制作成功后，需要进行分小组灌胃治疗，将模型组随机平均分成四小组（西药小组10只，中药小组10只，中西药小组10只、模型对照小组10只）。从造模成功后的第2天起开始分小组给于不同的药物，疗程共28天，每天灌胃一次，其中，中西药小组要先后依次灌入中药汤剂与西药溶剂，两者灌服给药时间的间距大约1个小时左右。本次给药严格采用《中药药理研究方法学》中的“等效剂量”法[2]实施。

（1） 模型对照小组小鼠：按照5ml.kg-1的计算方法，每天用生理盐水灌服。

（2） 中药小组小鼠：按照20.55g .kg-1（大约为正常成人使用量的12.33倍，正常成人按60kg算）的计算方法，每天用温阳活血通络方灌胃。

（3） 西药小组小鼠：将5mg醋酸泼尼松片取出，每天一片用灭菌苯研成粉末状，倒进50ml的生理盐水中充分搅匀，按照6mg .kg-1的计算方法，每天用强的松混溶液灌服。

（4） 中西药小组小鼠：西药、中药联合应用，按5ml.kg-1的计算方法灌入，两者灌服时间的间距大约为1小时。

1.3检测方法

将小鼠皮肤组织切片各免疫组化染色后在显微镜下察看，择取出5个视野（从每张切片中随机选择），并且测量器其皮肤厚度，所有数据都将通过“均数±标准差”来测量， 使用用于处理数据的SPSS软件系统，t 检验进行各小组比较，P的分析结果小于0.05算作有统计学意义。

2实验结果

2.1皮肤组织病理学改变

（1）根据相关的皮肤组织图可发现，模型组小鼠与对照小组相比，皮肤真皮层厚度明显增加，胶原纤维增生，毛囊等皮肤附属器减少，在真皮小血管四周存在炎症细胞浸润，血管腔有些缩小，血管壁变厚硬化，有一些甚至堵塞。

（2）根据相关的皮肤组织图可发现，中西药小组小鼠皮肤组织恢复最是明显，最接近于对照小组，如皮肤厚度变薄等（如表1）。其次是中药小组，最后是西药小组，两者差距不大。

3 讨论

硬皮病是一种目前病因还不十分清楚的结缔组织病。美国的一个研究显示，硬皮病可发生于任何年龄，在女性患者尤为常见，大约四倍于男性患者，儿童患者比较罕见。温阳活血通络方在湖北民族学院附属民大医院与川北医学院长期临床治疗硬皮病中取得了良好的疗效，其中淫羊藿、丹参、黄芪为共为君药，竹节参、当归为臣，桂枝、白芍、白芥子为佐，甘草为使，各种药物的相扶搭配，既能祛邪和通络调血，又能补益诸虚。

由于硬皮病的病因病机十分复杂，且病情反复，虚实驳杂，常可累及内脏，临床上单方单药难以有效控制病情发展。多数医家经过长期反复的临床实践，认为中西药合用可以达到取长补短，有效控制病情发展的目的。中医西医的结合用药，不但更能提高西药在抗炎、抑制纤维化、调整免疫等方面的药效，而且能弥补西药在增强病人体质、调节脏腑功能等方面的缺失，，减轻两者的副作用，从而综合提高治疗效果。

参考文献

[1]陈奇主编.中药药理研究方法学[M].人民卫生出版社，2006，1168

[2]张乃峥主编.临床风湿病学[M].上海：上海科学技术出版社，1999，275