中医抗老驻颜古方抗小鼠光老化损伤的初步研究

[摘要]目的:初步研究中医古医籍记载的美容驻颜抗衰古方可能的抗光老化作用。方法:采用UVA/320～400nm+UVB/280～320nm紫外灯模拟日光紫外线组合造模光老化小鼠,选择中药古医籍记载的美容驻颜抗衰古方每天分别灌胃各组小鼠,共12周。生化法检测小鼠受试区皮肤组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH2Px)活性和丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(HYP) 含量。结果:接受实验选择的古医籍记载的美容驻颜抗衰古方治疗的小鼠,表现出不同程度的光保护效果。各组与UV损伤组比较:滋阴为主的神仙驻颜方GSH-Px、HYP表达有极显著性差异(P

[关键词]光老化;中医古方;抗衰老;实验研究;小鼠

[中图分类号]R289.3 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455(2010)04-0578-03

Experimental study on the anti-senility effects of several Traditional Ancient Decoctions in mice ageing induced by photoage

LIU Yuan1, ZHANG Mi-na2 ,WEI Kai-feng2 ,LU Yuan3,LAI Ming-sheg3,LU Ping-cheng2

(1.Shenzhen City Fourth People's Hospital, Shenzhen 518033, Guangdong, China;2.Nanjing University of Traditional Chinese Medicine, Nanjing 210029, Jiangsu,China;3.Shenzhen City sixth People's Hospital,Shenzhen 518052, Guangdong,China)

Abstract:Objective To investigate the anti-senility effects of several classic doctions mentioned in books of Traditional Chinese Medicine (TCM) to senility induced by photoaging.MethodsA mice model exposed under UVA/320～400nm+UVB/280～320nm UV light to simulate sunlight ultraviolet was served. Mice were feed with several chosen traditional ancient decoctions which were said to have the effects of anti-senility.The experimental procedure lasted for twelve weeks. The levels of superoxide dismutase(SOD), glutathiane peroxidase (GSH-Px), malondialdehyde (MDA) and hydroxyproline(HYP)in the observed skin area of mice before and after experiment were assayed by biochemic methods. Results Mice received treatment of TCM decoctions showed different good effects of anti-photoage. Compared with UV group, Shenxianzhuyan Decoction which mainly menifested enhancing "yin"showed higher levels of GSH-Px and Hyp (P

Key words:photoaging; anti-senility; Traditional Chinese Medicine (TCM); experiment; mice

紫外线(ultraviolet, UV)慢性损伤导致的皮肤光老化(photoaging)是皮肤提早衰老的重要因素,如何防治光老化已引起美容医学界越来越多的重视。而研究植物草药预防皮肤衰老一直是国内外美容医学界被广泛关注和经常使用的手段,并随着研究的深入和有效的运用,已得到了众多学者们的认同[1-2]。我国运用草药美容驻颜有数千年历史,历代的本草医药著作中收录记载了大量有效美容驻颜的植物,尤其是具有中医医学背景,独特的复方中药。大量研究显示许多中药单体和复方中药具有良好的提高机体抗氧化、清除自由基的作用,有很好的抗衰老功效,但是否能有效预防或治疗皮肤光老化?有关的研究尚不多。本研究选择古医籍记载的美容驻颜抗衰古方为对象,研究其可能的抗UV氧化损伤和抗光老化作用。

1材料和方法

1.1材料:神仙驻颜延年方(太平圣惠方):熟地黄、干地黄、甘、天门冬;黄芪六一散(局方):炙黄芪、炙甘草、大枣 ;生脉散\生脉饮(内外伤辨惑论):人参、五味子、麦冬;延龄固本丸(景岳全书):肉桂、泽泻、茯苓、白术、黄芪、枸杞子、当归、远志、莲须、山茱萸、酸枣仁;龟龄集(集验良方):鹿茸、人参、熟地黄、海马、杜仲、肉苁蓉、补骨脂、兔丝子、枸机子、麻雀脑、丁香、淫羊藿、大青叶、沙仁、天冬。各方剂严格按照古医籍记载的方剂配伍、剂量和制剂方法,由南京中医药大学药理研究室制成成药。

实验动物采用清洁的昆明种小白鼠70只,体重20～25g,雌雄不限。超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase ,CAT)、谷胱甘肽氧化酶( (glutathione peroxidase,GSH-Px)和丙二醛(malondiald ehyde ,MDA)试剂盒(南京建成生物工程有限公司),羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)标准品(中国科学院上海生物化学研究所)。SS-04P型光疗仪(上海Sigma公司),UVA紫外莹光灯管/320～400nm、UVB紫外莹光灯管/280～320nm(Philips公司),UVA和UVB型紫外线辐照计(北京师范大学光电仪器厂),DS-1型高速组织匀浆机(上海骠马),835型氨基酸自动分析仪(日本日立)。

1.2方法

1.2.1 动物分组和处理:小鼠实验前适应环境1周,室温控制在22℃～25℃,全价颗粒饲料喂养。随机分组为神仙驻颜延年方组、黄芪六一散组、生脉散组、延龄固本丸组、龟龄集组,其余再列空白对照组及UV损伤对照组。各中药组和空白对照组,UV损伤组每组10只。各组小鼠背部剃毛,面积3cm×2cm,以后在每次紫外线照射前重复剃毛;各中药组小鼠中药服药量以古方推荐的服用量为标准,按李仪奎[3]加大给药量公式换算出小鼠中药饲喂量,每天2次用等量的生理盐水灌胃饲药;空白对照组和UV损伤对照组给予等量生理盐水每天2次灌胃,直至实验结束。

1.2.2小鼠模拟紫外线光老化皮肤损伤照射:除空白对照组,各组小鼠于首次灌胃后的第2周起开始实施紫外线照射。照射时将小鼠用固定器固定,头部区遮光,置于SS-04P型光疗仪下照射,光疗仪紫外灯管以UVA/320～400nm+UVB/280～320nm模拟日光组合配置。UVB和UVA紫外线辐照计监控辐照强度,UVA辐照强度1.12mW/cm2, UVB辐照强度0.118mW/cm2。辐照时间以小鼠开始出现皮肤轻度泛红为准,并按因试验进度小鼠增强的耐受适应性统一作渐进性增时调整。每天照射一次,连续12周,累计照射剂量约为UVA198J/cm2、UVB 2.13J/cm2。

1.2.3抗氧化酶活性及MDA、HYP含量测定:最后一次紫外线照射后24h,处死小鼠,剪取各试验组小鼠背部脱毛区皮肤,冷生理盐水漂洗,除去皮下组织,再用6mm皮肤活检钻孔器,在处理好的脱毛区皮肤相对应位置钻取8片相等面积的皮肤组织。滤纸拭干,按试验组别称重,剪成肉糜状,放入匀浆器,加入9倍重量冷生理盐水,制成10%组织匀浆。经4℃,8000 r/min 离心15min,取上清液,分别测定SOD、GSH-Px活性和MDA、HYP含量。操作方法组遵循试剂盒说明。

1.3数据统计处理:采用SPSS 15.0 统计软件包,统计方法选用ANOVA分析,结果以 x±s表示,P

2结果

结果显示实验选择的古医籍记载的美容驻颜抗衰古方,表现出不同程度的抗御UV对小鼠皮肤的光老化损伤。各组与UV损伤组比较:滋阴为主的神仙住颜方GSH-Px、HYP表达有极显著性差异(P

3 讨论

一定时量累积的UV辐射损伤会导致皮肤光老化,而UV辐射皮肤诱生的高浓度活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)则是光老化发生发展的重要介导。UV 可通过直接和间接的多种途径使皮肤中ROS 浓度异常升高,高浓度的ROS 具有活泼的化学性质,可与皮肤组分发生复杂的化学反应产生多种生物学效应。消耗皮肤中的抗氧化系统包括抗氧化酶和低分子抗氧化剂,使脂质、蛋白质氧化,脂质过氧化物堆积,DNA 破坏,细胞损伤,基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)高表达,胶原代谢障碍等,使皮肤产生一系列变化,导致皮肤光老化的发生[4]。

正常皮肤具有较完善的抗氧化防御系统,能清除ROS、抗御其损害,这一系统主要由谷胱甘肽氧化酶(GSH-Px) 和谷胱甘肽(GSH) 、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT) 、血红素氧化酶和醌氧化酶、铁蛋白、金属硫蛋白和硫氧还原蛋白(Trx) 以及低分子抗氧化剂维生素C 和维生素E 等组成。光老化使皮肤抗氧化系统产生复杂的适应性改变,使皮肤细胞抗氧化酶活性降低[5]。ROS引起的脂质过氧化反应可生成多种终产物,丙二醛(MDA)是其中最常见的一种,光老化皮肤中MDA 含量显著升高。皮肤基质胶原受损是光老化特征性临床外观和组织病理表现的原因。光老化皮肤中正常胶原成分显著减少,这主要是由于UV可通过多种途径诱导基质金属蛋白酶(MMPs)的表达,加速胶原降解,而且还能通过影响成纤维细胞数量和活性而使胶原合成减少[6-7]。另外,过氧化脂质或其氧化释放产物如丙二醛(MDA)等能与胶原蛋白产生交联,加速胶原蛋白的老化。羟脯氨酸(HYP)是胶原蛋白中一种相对特有、含量稳定(占13.4%)的氨基酸,其含量变化可反映胶原的代谢状况。

大量中药抗皮肤衰老的研究显示,许多中药含有各种氨基酸、脂类、多糖、有机酸、生物碱、皂苷、果胶、维生素、微量元素等多种成分,具有清除体内自由基,增强机体抗氧化能力,提高皮肤胶原纤维及胶原蛋白含量,改善皮肤微循环,提高调节免疫功能等作用[8]。而近来一些不多的有关中药抗光老化研究发现人参、黄芪、黄芩、黄精、绿茶、芍药、地榆、莪术、雷公藤等中药及其提取物在改善皮肤组织结构、提高抗氧化酶活性、抑制基质金属蛋白酶高表达、增强皮肤免疫防御功能等多方面对皮肤光老化起着防治作用。而认为中药是拮抗皮肤光老化的一种有效手段,在改善和防治皮肤光老化方面具有巨大的潜力。在皮肤美容医学方面具有重要的研究意义[9]。

我们的初步研究显示,所选择的古医籍记载的美容驻颜抗衰延年古方均不同程度表现出一定的抗御UV对皮肤的光老化损伤作用:①能提高皮肤抗氧化酶活性;②抑制ROS诱导的脂质过氧化反应;③提高或维持皮肤胶原蛋白含量。虽然我们还不知道这些中药古方的抗光老化的作用机理,也不清楚养阴、益气、补血、滋肾填精不同作用偏向的古方在影响光老化时在不同的环节或有的差异,但我们认为这些中药复方体现了中国传统医学的精髓和价值,能因人因证施宜,按机体气血阴阳偏胜整体调治,预防光老化,抗御衰老。对它们的深入研究或会更有助于我们从中医的认知角度来认识光老化,有助于开发出更有效和方便日常使用的抗光老化中医药产品。

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[收稿日期]2010-01-04 [修回日期]2010-03-16