两种检测梅毒螺旋体抗体血清学试验的比较

【摘 要】目的：分析比较非梅毒螺旋体抗原血清试验和梅毒螺旋体抗原试验的特异性。方法：收集本中心办理健康证的血清样本20464份。采用甲苯胺红不加热血清反应素试验（TRUST）对样本进行梅毒血清学初筛，阳性标本用生理盐水倍比稀释及梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA）复检。结果：20464份血样标本经TRUST试验初筛有160份呈阳性（0.78%）。将TRUST阳样标本进行TPPA试验复检，TPPA阳性占151份（94.38%）。结论：由于非梅毒螺旋体抗原试验存在一定的假阳性及漏检，有必要对初筛阳性的标本进行确证，使检测结果更加准确可靠。

【关键词】梅毒；螺旋体抗体；初筛

【文章编号】1004-7484（2014）07-4048-02

梅毒是由苍白螺旋体（Treponema pallidum，TP）引起的一种性传播疾病，主要传播途径有性传播、血液传播和母婴传播这3种。苍白螺旋体属于厌氧菌，在体外不易生存，煮沸、干燥、常用的消毒剂可致其死亡，但对潮湿、寒冷环境的耐受力较强。梅毒可侵犯人体全身器官，临床表现分为一期梅毒、二期梅毒、三期梅毒和潜伏梅毒，产生各种各样的临床症状[1]，对人类健康危害极大。人体感染梅毒后，首先产生IgM型抗梅毒螺旋体抗体，感染2周后即可测出，早期梅毒抗梅治疗3～9个月后或晚期梅毒治疗2年后，大部分病人IgM可转阴性，再感染时又出现阳性，故IgM型抗体的存在是活动性梅毒的表现。感染梅毒四周左右产生IgG型抗梅毒螺旋体抗体，即使经足量抗梅治疗，梅毒螺旋体抗原消失后很长时间，IgG抗体仍可通过记忆细胞的作用继续产生，甚至终生在血清中可测出。非特异性抗体又称反应素，是由螺旋体破坏人体组织细胞所释放的类脂样物质以及螺旋体自身的类脂和脂蛋白刺激机体产生的IgM和IgG类抗体。这种抗体也可在多种急、慢性疾病患者血中检出，易出现假阳性，可见加强梅毒诊治工作的重要环节之一就是各级医疗机构的实验室在开展梅毒检查时要保证检测质量，提供准确的检测数据。

1材料与方法

1材料

1.1.1标本来源：收集2013年1月至12月本中心进行梅毒血清学筛查的血清样本20464份，主要是办理健康证的血清。

1.1.2试剂与仪器：梅毒甲苯胺红不加热血清试验（toluidine red unheated serum test，TRUST）诊断试剂购自上海荣盛生物药业有限公司；梅毒螺旋体颗粒凝集试验（Treponema pallidum particle agglutination test，TPPA）试剂，购自日本富士瑞比欧株式会社；SO3震荡混合仪为上海汗诺仪器有限公司产品；抗TP特异性抗体和非特异性抗体的外部质控品均购自北京康彻思坦生物技术有限公司，浓度分别为4NCU/ml和1NCU/ml。

1.2方法

1.2.1梅毒甲苯胺红不加热血清试验TRUST：将本中心办理健康证的顾客血清严格按照试剂说明书进行梅毒血清学初筛实验。若血清中有心磷脂抗体存在，经SO3震荡混合仪每分钟100转摇动8分钟后，可出现肉眼可见的凝集块判断为实验阳性，无凝集块出现的为实验阴性。如需定量检测，可将待检血清用生理盐水倍比稀释后，以呈现明显凝集反应的最高稀释度作为该血清的凝集效价。每批试验都要带上试剂盒的阴阳对照及外部质控品，以监测该次实验的有效性及准确性。

1.2.2梅毒螺旋体抗原血清学试验TPPA：对所有经TRUST初筛阳性样本均用TPPA进行复检确证。TPPA实验检测血清中梅毒螺旋体抗体及测定其抗体效价。若血清中有抗TP抗体存在，即与试剂中致敏粒子反应产生凝集，凝集粒子在底部整体上呈膜状延展，实验为阳性；若粒子成纽扣状聚集，呈现出外周边缘均匀且平滑的圆形为实验阴性。在梅毒感染初期，有可能不产生抗体，或虽然产生抗体但数量很少时，实验也会阴性，所以实验结果应与临床症状结合综合判断，实验的具体操作均严格按试剂盒说明书进行。

3讨论

梅毒的血清学检测试验根据抗原不同分为以下两类：非梅毒螺旋体抗原血清试验和梅毒螺旋体抗原血清学试验。非梅毒螺旋体抗原血清试验是以心磷脂、卵磷脂及胆固醇作为抗原检查血清中的反应素，用于初筛试验。方法有甲苯胺红不加热血清试验（toluidine red unheated serum test，TRUST）、不加热血清反应素试验（unheated serum regain test，USR）等，以上两种方法也是目前较常用。试验使用的抗原由从牛心肌中提取的心磷脂、胆固醇和纯化的磷脂酰胆碱（卵磷脂）组成，即类脂质抗原，用于梅毒的筛查。由于在治疗过程中反应素滴度可呈动态变化，固非梅毒螺体抗原血清学试验常用于疗效观察、复发或再感染的检查。同时，由于价格低廉、操作简便快速，特别适合基层、样本多的实验室操作。但此类方法反映不出既往感染，并且受一些自身免疫疾病影响较大，易产生假阳性结果。阳性结果需进一步做抗梅毒螺旋体抗体确认试验。梅毒螺旋体抗原血清学试验是检测患者血中梅毒螺旋体抗原蛋白（Tp17、Tp37、Tp47）产生的特异性抗体。方法有梅毒螺旋体颗粒凝集试验（Treponema pallidum particle agglutination test，TPPA）、梅毒酶联免疫吸附试验（Treponema pallidum enzyme-linked immunosorbent assay，TP-ELISA）等。此类试验特异性强，可以作为非特异性类脂质抗原试验初筛阳性标本的复检或确证试验。但由于螺旋体感染人体后，一旦螺旋体抗体试验阳性，患者将终生阳性，所以此类方法不能区分既往感染和现症感染，亦不能作为疗效观察。以上两类试验阳性，只提示所测标本中有抗类脂抗体或抗TP抗体存在，不能作为患者感染梅毒螺旋体的绝对依据，阴性结果也不能完全排除梅毒感染。

本实验室日检梅毒标本约为150份，基本是健康体检，属于低危人群，我们筛查梅毒流程是首先使用梅毒螺旋体非特异性抗体试验TRUST进行初筛，阳性标本使用梅毒螺旋体特异性抗体TPPA试验进行确认，该流程大大缩短了检测时间和劳动强度，但会有一定的漏检。这也是美国CDC推荐检测梅毒血清学筛查方案[2]。20464份血样标本TRUST筛查有160份呈阳性，阳性样经TPPA复查后有151例阳性，仅有9份呈阴性，在没有开展FTA-ABS方法时，用TPPA做为梅毒阳性标本的确认是符合美国CDC和WHO的规定。[3]当然如果标本量少可以直接用TPPA进行初筛，阳性再用非特异性抗体试验评估活动性，但检测成本会稍高些。

参考文献

[1] 赵辨.临床皮肤病学.江苏：科学技术出版社，2010.

[2] Centers for Disease Control and Prevention （CDC）.Syphilis testing algorithms using treponemal tests for initial screening―four laboratories，New York City， 2005-2006.MMWR Morb Mortal Wkly Rep，2008，57：872-875.

[3] Peeling RW，Ye H.Diagnostic tools for preventing and managing maternal and congenital syphilis：an overview.Bull World Health Organ，2004，82：439-446.