紫外分光光度法测定缬草中总缬草素类成分的含量

摘要：采用紫外分光光度法测定缬草（Ｖａｌｅｒｉａｎａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）中总缬草素的含量。结果表明，缬草素在５～２５ μｇ／ｍＬ范围内，其浓度与吸光度呈良好线性关系（ｒ＝０．９９９ ８），该方法回收率为９８．９４％～１０１．０７％，准确、快速、重复性好，可用于缬草中总缬草素含量的测定。

关键词：紫外分光光度法；缬草（Ｖａｌｅｒｉａｎａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）；总缬草素

中图分类号：Ｒ２８４．１ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０12）18－4111-02

Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｏｔａｌ Ｖａｌｅｐｏｔｒｉａｔｅｓ ｉｎ Ｖａｌｅｒｉａｎａ oｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ ｂｙ ＵＶ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ

ＬＵＯ Ｘｉ－ｒｏｎｇ１，ＹＵＡＮ Ｔｉａｎ－ｈｏｎｇ１，ＹＡＮＧ Ｊｕｎ２，ＹＵ Ｄｅ－ｓｈｕｎ２

（１．Ｇｕｉｙａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ University， Ｇｕｉｙａｎｇ ５５０００４，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｇｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｇｕｉｙａｎｇ ５５０００２， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｖａｌｅｐｏｔｒｉａｔｅｓ ｉｎ Ｖａｌｅｒｉａｎａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ sｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ revealed a ｇｏｏｄ ｌｉｎｅａｒ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｗｉｔｈｉｎ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ ５～２５ μｇ／ｍＬ（ｒ＝０．９９９ ８）． Ｔｈｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ rate ｗａｓ ９８．９４％～１０１．０７％． Ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ waｓ ａｃｃｕｒａｔｅ， ｒａｐｉｄ ａｎｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ ｆｏｒ ｍｅａｓｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｖａｌｅｐｏｔｒｉａｔｅｓ ｉｎ Ｖａｌｅｒｉａｎａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ＵＶ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ； Vａｌｅｒｉａｎａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ； ｔｏｔａｌ ｖａｌｅｐｏｔｒｉａｔｅｓ

缬草（Ｖａｌｅｒｉａｎａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）为败酱科缬草属，多生于海拔８００～２ ５００ ｍ的山坡草地和林下，是一种多年生耐寒开花植物，分布于中国西南及东北地区，具有镇静催眠、神经保护、保护肾脏、调节循环系统、抗抑郁和抗肿瘤等药理活性［１］。缬草素类成分（Ｖａｌｅｐｏｔｒｉａｔｅｓ）是缬草的主要活性成分，具有镇静、催眠、抗焦虑、抗病毒、抗胃癌、解痉和舒张血管等药理作用［２－７］。缬草化学成分复杂，不同来源缬草有效成分组成和含量均有差异，目前缬草中缬草素类成分含量的测定方法有ＨＰＬＣ法和电位滴定法［８，９］，这类方法通常操作复杂，分析成本高。本试验采用紫外分光光度法测定缬草药材中总缬草素含量，旨在为建立缬草素快速分析方法提供参考。

１ 材料与方法

１．１ 材料

缬草采自贵州某地，粉碎后过６０目筛，待用。

缬草素标准品（四川维克奇生物科技公司）；分析纯甲醇和乙酸乙酯。

１．２ 仪器

Ｔ６新世纪紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）、ＫＱ５２００超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

１．３ 方法

１．３．１ 标准品制备 称取适量缬草素，用甲醇配制成１００ μｇ／ｍＬ的标准贮备液，分别取不同体积（０．２５～１．２５ ｍＬ）的缬草素标准贮备液于５ ｍＬ比色管中，用甲醇定容至刻度，摇匀，配制成系列浓度的标准工作溶液。

１．３．２ 样品制备 准确称取缬草粉０．５ ｇ于具塞三角瓶中，加入乙酸乙酯５０ ｍＬ，浸泡２４ ｈ后，超声提取４０ ｍｉｎ，过滤，用乙酸乙酯定容至５０ ｍＬ，取滤液０．２ ｍＬ挥干，用甲醇溶解后定容于５ ｍＬ比色管中。

１．３．３ 测定 以甲醇作空白试剂，在最大吸收波长处测定标准工作液的吸光度，绘制工作曲线，以相同条件测定样品液吸光度，计算样品中的含量。

２ 结果与分析

２．１ 测定波长的选择

在２００～４００ ｎｍ范围内分别扫描缬草素标准溶液及样品溶液，由图１可知缬草素标准溶液在２５６ ｎｍ处有最大吸收，故选择测定波长为２５６ ｎｍ。

２．２ 工作曲线

按试验方法绘制缬草素的工作曲线，结果表明吸光度Ａ与缬草素浓度Ｃ在５～２５ μｇ／ｍＬ范围内具有良好的线性关系，其线性回归方程为Ａ＝０．０３８ ３ Ｃ＋０．００４ ２，ｒ＝０．９９９ ８。

２．３ 精密度

取样品溶液按试验方法重复测定６次，结果吸光度的ＲＳＤ为０．０８％，表明仪器精密度良好。

２．４ 稳定性

取样品溶液按试验方法在５ ｈ内每隔１ ｈ测定１次，结果吸光度的ＲＳＤ为１．９３％，表明样品溶液在５ ｈ内稳定性良好。

２．５ 重复性

取同一样品溶液按试验方法平行测定６次，结果其总缬草素含量的ＲＳＤ为１．９６％，表明方法重现性良好。

２．６ 回收率

为验证试验的准确性，在样品溶液中加入缬草素标准溶液进行回收试验并计算回收率，由表１可知加样回收率为９８．９４％～１０１．０７％，试验结果准确度高，符合分析要求。

２．７ 样品测定结果

取贵州不同产地缬草药材按试验方法测定样品中总缬草素含量，结果见表２。

３ 讨论

缬草素是构成缬草疗效的有效成分，也是各种缬草共有的特征化合物［８］，缬草素、乙酰缬草素和异缬草素均在２５６ ｎｍ处有最大吸收。以缬草素为对照品，应用紫外分光光度法测定缬草中总缬草素的含量，方法学的线性关系、精密度、稳定性、重复性、回收率结果都较满意，具有简便易行、结果稳定可靠、分析费用低等优点，可作为测定缬草中总缬草素含量的一种方法。