非创性肢体远端缺血预处理联合七氟醚后处理对心肌缺血再灌注的影响

[摘要] 目的 探讨非创性肢体远端缺血预处理联合七氟醚后处理对心肌缺血再灌注保护是否有叠加作用。方法 成年雄性SD大鼠40只，随机分为5组，假手术组（S组）；缺血再灌注组（I/R组）；非创性肢体远端缺血预处理组（NIPC组）；七氟醚后处理组（Spo组）；非创性肢体远端缺血预处理+七氟醚后处理组（NIPC+Spo组）。再灌注120min后检测CK-MB表达及心肌超氧化物歧化酶（SOD）的活性。结果 与I/R组比较，NIPC组、Spo组和NIPC+Spo组CK-MB降低、SOD活性增加（P

[关键词] 七氟醚后处理；心肌缺血再灌注；非创性肢体远端缺血预处理；SOD

[中图分类号] R654.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2014）11-0016-03

[Abstract] Objective To investigate the effects of non-traumatic ischemic preconditioning combined with Sevoflurane postconditioning on myocardial ischemia-reperfusion（I/R）in rat. Methods Forty male SD rats weighing 250 to 280 g were randomly divided into 5 groups （n=8 each）： Sham operation group （Group S）， ischemia and reperfusion group （Group I/R）， non-traumatic ischemic preconditioning group（Group NIPC）， sevoflurane postconditioning group（Group Spo），non-traumatic ischemic preconditioning combined with Sevoflurane postconditioning group （Group NIPC +Spo）. After being reperfused for 120 minutes， detected blood serum CK-MB level and myocardial SOD expression. Results Compared with the I/R group， the levels of CK-MB decreased（P

[Key words] Sevoflurane postconditioning； Myocardial ischemia-reperfusion； Non-traumatic ischemic preconditioning；SOD

自1986年，Murry发现心肌缺血预处理可以减轻缺血再灌注损害以来，人们发现七氟醚预处理和后处理及非创性肢体远端缺血预处理都对心肌缺血再灌注损伤有保护作用[1，2]。本文采用大鼠心肌缺血-再灌注模型，观察血清中CK-MB和心肌组织中SOD活性水平，来研究非创性肢体远端缺血预处理联合七氟醚后处理是否对缺血再灌注保护有叠加作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物

健康雄性SD大鼠40只，体重250～280 g，由山西医科大学动物中心提供。

1.2 模型制备

实验动物称重，腹腔注射3%戊巴比妥钠（45 mg/kg）麻醉，固定于实验台上，颈部正中切口，分离气管后进行气管插管，接ALC-V 8 动物呼吸机（上海奥尔特生物科技有限公司）行机械通气，呼吸机进气口与七氟烷挥发罐（aeommedvp 3000）相连，潮气量8～10 mL，通气频率60次/min，吸入纯氧，吸呼比1∶2。左侧颈总动脉穿刺置管，连接BI-420F生物机能实验系统（成都泰盟科技有限公司），用于监测有创动脉压及标准Ⅱ导联心电图。于左侧胸壁第3、4肋间距离胸骨左缘约0.5 cm处逐层钝性分离开胸，去除心包膜，6-0丝线在左心耳下约3 mm处穿过左冠状动脉前降支（LAD），将丝线两头穿过硅胶管，用血管钳推压小管压迫LAD造成缺血，以结扎处远端心前壁呈青紫色或苍白色、ST段抬高、T波高耸为缺血成功标志。缺血30min时松开结扎线，心肌缺血区恢复红润、ST段回落>1/2和（或）R波恢复为再灌注成功的标志。

1.3 动物分组

实验动物随机分为5组（n=8）：假手术组（S组）、缺血再灌注组（I/R组）、非创性肢体远端缺血预处理组（NIPC组）、七氟醚后处理组（Spo组）和非创性肢体远端缺血预处理联合七氟醚后处理组（NIPC+Spo组）。S组：只穿线不结扎；I/R组：阻断LAD30 min，再灌注120 min。NIPC组：在缺血前阻断右侧股动脉5 min再灌注5 min，三个循环后行LAD缺血30 min，再灌注120 min[3]；Spo组：阻断LAD30 min，再灌注前吸入2%七氟醚15 min，再灌注120 min；NIPC+Spo组：在缺血前阻断右侧股动脉5 min再灌注5 min，三个循环后行LAD缺血30 min，再灌注前吸入2%七氟醚15 min，再灌注120 min[4-8]。

1.4 血清中CK-MB测定

再灌注120 min时，从大鼠左侧股动脉取血2 mL，离心后测定血清中CK-MB水平。

1.5 心肌组织病理变化和SOD测定

再灌注120 min取血后，将大鼠处死，取部分缺血区心肌组织，石蜡包埋，切片，HE染色，观察各组病理学变化。剩下缺血区心肌，去除包膜，称重后匀浆，离心后取上清液，采用黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性。

1.6 统计学处理

采用SPSS17.0软件分析数据，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，数据进行正态性检验，组间进行单因素方差分析，两两比较采用LSDt法。P

2 结果

与其余4组比较，S组CK-MB（177.44±53.34）U/L含量最低，心肌组织SOD活性（235±21）U/mg最高，差异有统计学意义（P

光镜下观察心肌组织病理变化，S组心肌组织结构正常，细胞及间质正常。I/R组心肌组织结构紊乱，细胞肿胀，间质水肿。NIPC组与Spo组相似，心肌组织结构轻度紊乱，细胞肿胀和间质水肿水平较轻。NIPC+Spo组心肌组织结构基本正常，细胞结构基本正常。见封三图2。

3 讨论

近年来，随着心脏冠状动脉搭桥手术，心脏支架及溶栓手术的发展，心肌缺血再灌注损伤受到人们越来越多的关注。近年来人们发现药物预处理和后处理，及肢体远端缺血预处理都对心肌缺血再灌注有保护作用，但其对心肌缺血再灌注保护的机制至今不甚明确[9]。

CK-MB主要分布于心肌组织，心肌损伤后释放到血液，是心肌缺血再灌注损伤的敏感指标之一。本实验通过检测心肌缺血再灌注后血清中的CK-MB水平来判断心肌损伤程度。结果显示非创性肢体缺血预处理和七氟醚后处理，非创性肢体缺血预处理联合后处理都能明显降低CK-MB水平，减少心肌细胞炎性损伤和凋亡[10]。

超氧阴离子自由基是人体内多种生理反应的中间产物，具有极强的氧化能力，是人体氧毒害的重要因素之一。SOD是一种金属酶，能够催化超氧化物转化为氧气和过氧化物，过氧化物会立即被体内的过氧化物酶分解为对人体无害的水。SOD是生物体内清除自由基的首要物质，可以降低自由基的生成和氧化应激，有抗氧化、抑制凋亡和减缓衰老的作用。而心肌缺血再灌注损伤正是由于缺血的炎性反应产生大量氧自由基造成氧化损伤，引起细胞凋亡和损伤。SOD活性增加可以减少心肌缺血再灌注损伤，保护心肌。从SOD的活性情况来看，非创性肢体远端缺血预处理和七氟醚后处理都能通过增加SOD的活性来减轻心肌缺血再灌注的损伤，保护心肌细胞[11-13]。

本实验研究结果表明，非创性肢体远端缺血预处理联合七氟醚后处理对心肌缺血再灌注的保护具有叠加作用，其保护作用的增加与SOD活性的升高有关，但对心肌缺血再灌注损伤的保护是相互联系、相互影响的复杂网络，其详细的过程和保护机制仍需通过进一步的动物实验证实。

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（收稿日期：2013-12-27）