多种传染病高通量ELISA检测的系统化标准化研究

【摘要】 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。要使ELISA测定得到准确的结果，不论是定性的还是定量的，必须严格按照规定的方法制备试剂和实施测定。此外，测定的实施中，各个步骤操作的标准化与否，也是直接影响测定结果准确性的重要因素。

【关键词】 高通量ELISA检测；传染病

1 研究方法和技术路线

主要对高通量ELISA法检测系统对多种传染性疾病（主要是HIV、HCV、TP、HBsAg、HBcAg）标本的检测进行研究，主要进行全自动免疫分析仪与其他全自动酶免分析系统的结果差异分析，以及临界值的合理界定，比较两套系统的优劣。研究过程中两者均采用相同的试剂，相同的测试编程，最后比较两者所测结果的稳定性、准确性，借以分析两者操作步骤的差异，确定最为标准的高通量ELISA检测各步骤操作规程，以期待为临床提供快速可靠的结果。

2 主要技术指标

酶联免疫吸附试验（ELISA）理论上只要能获得某一抗原纯品或相应的抗体制剂，即可对其相应的抗体或抗原进行ELISA测定。因此，几乎所有的可溶性抗原、抗体系统均可用该技术进行检测，其特点是实验结果具有较高的敏感性和特异性，最小可测值达ng甚至pg水平，但易受诸多测定因素（如包被抗原、抗体的质量，微孔板表面的吸附性能等）的干扰。与放射免疫分析相比，ELISA技术优点是标记试剂相对比较稳定，且无放射性危害。

因此在血源病原体（抗原和抗体），检测人类多种传染性疾病方面ELISA检测技术有着不可比拟的优势，高通量ELISA检测的系统化标准化可以大大减少ELISA法的影响因素，提高检测的准确性。

高通量酶免分析系统的标准化、系统化与网络化是全实验室自动化系统的重要组成部分，包括样本（前处理）模块、分析中（质量控制）处理模块、酶免分析后处理模块、软件信息模块等，是迈向全面实验室自动化建设的重要基石。

主要包括：

2.1 样本处理自动化 主动标本识别条码阅读功能；更高的标本处理效率；更少的劳动强度；职业暴露机会最小化；通过减少人为失误、增加加样精度与准确性来改善分析质量，采用批量或随机组合进行多种组合与多种模式检测。

2.2 高通量全自动酶免分析系统的标准化、系统化 多任务、多通道完全实现平行处理过程，特别是自由任务资源管理系统，可以随时增加（急诊）任务菜单，实现最优反应过程（试验质量）和最大化分析生产力。

2.3 设立高精密的质量控制系统，确保每一批次检验结果的准确性与精密度 高通量酶免分析系统的标准化不仅是一个测定系统或试剂的量值溯源，其还涉及到临床标本的采集运送和保存、检测系统或试剂的性能验证、检测程序、仪器设备的维护和校准、结果的分析报告和解释等的标准化，对ELISA的测定在医学实验室的应用，在借助必要的自动化分析仪器设备的基础上，进行系统化、标准化，将极大地提高检测结果的准确性以及其对临床疾病诊疗的有效性，并大大降低患者的医疗费用，我院以已开展传染病的ELISA法检测多年，目前主要是乙型肝炎表面抗原、艾滋病抗体初筛、梅毒抗体、丙肝抗体、丙型肝炎核心抗原的检测，主要使用意大利产ALISEI全自动酶免分析仪，并且实施了严格的实验室质量控制制度，操作人员经过严格的岗前培训考核合格并取得相关传染性疾病的检测资格证书，严格进行室内质量控制并定期参加省室间质量控制，医院通过了ISO2001认证，并拥有强大的科研团队和技术力量支持。

3 国内外研究综述

ELISA是目前国内临床检验科室最为常用的免疫检验方法，常用于一些重要检测项目如传染病或感染性疾病病原体的抗原和特异抗体、肿瘤标志物等常规检测，其检测结果的精准度直接影响到临床诊断、治疗检测和预后评估。要保证检测结果的精准度，实现在不同实验室间检验结果的一致性，检验结果必须要有溯源性。检验结果能否实现溯源性，取决于检测系统，即完成检测所需要的仪器、试剂、校准品和操作程序的组合。要对检测过程中的各组分进行严格的标准化尤为重要。一直以来，我国政府对ELISA检测的相关传染病十分重视，如艾滋病、梅毒等，但是在ELISA标准化方面所做的工作还不足。这就导致了检测结果容易出现假阳性、假阴性，大大降低了治疗质量，也损害了人民群众的身体健康，给患者和医疗机构造成了不可估量的损失。

目前实现ELISA检测标准化便成为了当务之急，标准化的检测系统建立是分析中质量管理的核心，一定要强化检测系统的概念，重视不同检测系统对同一标本检验结果的可比性。而目前，国内的酶联免疫吸附试验（ELISA）检测并没有实现标准化，我们致力于研究如何从理念上、设计上、硬件设置上实现ELISA检测的高通量、系统化、标准化。对比国内外目前的高通量ELISA检测各步骤操作规程，力争确定一套较为标准的操作标准，提高检测结果的准确性，从而保证检测结果的真实性和客观性。

4 结 论

通过本课题的研究促使医院临床实验室ELISA法检测水平进一步提高，全自动免疫分析仪检测系统能够得到更快速、稳定、准确的结果，促进全国标准化实验室检验结果的互认，在减少医疗资源投入的基础上获得更大的经济及社会效益。