幽门螺杆菌的鉴定分析

关键词 幽门螺杆菌 鉴定 分析

幽门螺杆菌(Hp)是从胃黏膜中分离出的幽门弯曲菌(CP)。幽门螺杆菌在胃黏膜上皮细胞表面常呈典型的螺旋状或弧形。在固体培养基上生长时，除典型的形态外，有时可出现杆状或圆球状。幽门螺杆菌是微需氧菌，环境氧要求5%～8%，在大气或绝对厌氧环境下不能生长。

细菌学检验检验人员必须第一时间与临床科室联系沟通，增加检验科与临床的沟通机会

幽门螺杆菌是一种呈弧形，螺旋形或“S”形，革兰染色阴性，检验人员必须第一时间与临床科室联系沟通，增加检验科与临床的沟通机会。微需氧菌，菌体两端钝圆，长4～5mm，直径0.5～0.7μm,有2～6根鞭毛，菌体有脂多糖，凝集素，并能分泌活性很高的脲酶，研究表明，Hp是慢性活动性胃炎的病原菌，并与消化性溃疡及胃癌关系密切。

形态学检查：将采集的胃活检标本制成薄片，染色后镜检，发现阳性标本，作出初步诊断。Hp的染色方法很多，就各种染色法对Hp检验的敏感性，特异性等，国内外有诸多报道，其中HE染色使Hp呈淡红色，敏感性较低，常用的Gram染色法，其方法简易，且组织印片，切片均可使用，敏感性较高，但易与革兰阴性杆菌混淆，是其缺点。Warthin-Starry镀银染色，上皮细胞核呈棕黄色，而Hp呈黑色，易于辨认；灵敏度及特异性均达95%左右，但其操作繁琐，要求技术熟练度高，价格贵，耗时长等大大限制了了其应用。而石炭酸复红染色使Hp呈深红色，背景淡红色，易辨认，与培养法相比，特异性100%，预测值100%，敏感性也达到了92%，该法简单价廉，快速，最适宜常规应用，还有Gimenez染色，阿的平荧光染色，间接免疫荧光检查法，无标本标记PAP染色等应用于Hp检查的报道。

分离培养：细菌培养是确诊的依据，且又能进行药敏试验，虽然敏感性较低，但特异性100%，此外细菌培养也常用于对快速诊断的评估。Hp的pH耐受范围4～10，培养基的pH 5.5～8.5均宜生长，最适生长温度35～37℃，27℃以下不能生长，气体环境温度5% O2，10% CO2，85% N2的环境下培养3～4天，阳性率较高。Hp生长缓慢，一般除代培养不得少于5天，培养1周仍无生长可报阴性。

Hp的营养要求较高，在Brucella普通营养琼脂，营养肉汤及单纯的脑心浸液等培养基均不生长，马血清，可溶性淀粉及活性炭等对Hp有明显刺激作用。非选择性培养基常用的有绵羊琼脂和巧克力琼脂，选择性培养基常用的有SKirrow培养基赫MTM(Modified Thayer-Martin)培养基等，选择效应取决于所加的抗菌物质，如万古霉素(抑制革兰阳性菌)，多黏菌素(抑制革兰阴性菌)，两性霉素(抑制酵母菌，霉菌)，TMP(抑制变形菌)，萘啶酸(y抑制其他弯曲菌)Deltenre待研制的选择性培养基(Brussels Campylobacter Charcoalagar，简称BCC琼脂)，敏感性达94%。

生化检验

Hp的生化鉴定中，氧化酶，触酶，脲酶均阳性，产生H2S，酚酞试验，谷安酰肽酶，DNA酶ACP，ALP，动力均阳性，发酵靛基质葡萄糖，硝酸盐还原阴性。

临床使用较多的是尿素酶试验。由于Hp能产生大量的尿素酶，测定尿素酶被水解后的pH变化，可确定是或有Hp感染，是因为其他弯曲菌不产生此酶，据悉，尿素酶的检测敏感性，特异性分别为89%和100%。

血清学检验

Hp感染者血清异性抗体主要为Hp-IgG和IgA，还有少量的IgM，且抗Hp-IgM，IgM检出都可作为Hp的感染指标，IgG的敏感性较高(92%)，IgG特异性高(94%)，IgGI和gA水平与Hp感染程度无明显相关。有关Hp抗体大致有菌体抗体，尿素酶抗体，NLBH抗体等，而临床上通常检测Hp的菌体抗体。

Hp菌体抗体检出方法较多，其中补体结合试验敏感性较低，已很少使用。细菌凝集试验的敏感性，特异性也不尽人意。pHA法检查Hp抗体，宜用于普查，但结果判断，可靠性大大限制了其发展，单克隆抗体间接免疫荧光试验(iFA)，具简单，快速，敏感性和特异性也比较高，但需要荧光显微镜是其不足。免疫印迹法(Immunoblot)是一种灵敏可靠稳定的检测蛋白方法，能定性定位分析Hp抗体，可以对Hp作出肯定性诊断。该法用于不能做胃镜者的假阳性结果及所显示区带不稳定，难以判定结果是其缺点。

ELISA法特异，敏感，稳定，可检测不同类型的抗体，是目前临床应用较多的方法。以ELISA-Hp抗体定量法检测特异性Hp-IgG抗体，其检出率95.4%，敏感性93.8%，特异性100%，且该方法检出率高于培养法，病理HE染色法及尿素酶实验。用酶标葡萄球菌A蛋白(HRP-SPA)代替第二抗体，检测血清中Hp抗体，具操作简便，快速，稳定的优点，适宜于基层推广。

同位素检验

呼吸实验：呼吸实验适宜于流行病学调查及疗效观察。利用同位素标记尿素分子中的C原子，口服尿素后测定呼气中标记的CO2量。从而推算尿素酶的量。

15N-尿素试验：受试者口服15N-尿素，在尿素酶作用下，分解出氨，经胃吸收入血，部分随尿排出，收集尿液，计算15N排除率，已确定胃内有无Hp感染。

聚合酶链反应(PCR)

随着自动化热循仪的推广使用，聚合酶链反应以其灵敏，特异，快速的优点越来越广泛应用于临床研究。国内专家在这方面有较多的研究与报道，多数用互补于Hp尿素酶A基因片段的两对引物建立雀巢PCR，特异性达100%，灵敏度可达0.1fg菌株DNA水平。由于PCR的高灵敏度，故假阳性仍是困扰实验室的主要问题，故而防止交叉污染，做阴阳对照仍是PCR技术的主要质控措施。

目前，有关Hp的诊断优缺点不一，Hp以形态学，生物学到亚型，分子生物学的检测，各实验室应根据自身的条件，逐步建立完善Hp诊断的方法，并施行相应的严密质控措施，以期探索一种诊断Hp感染的灵敏，快速，特异，价廉的方法。