不同剂量的白酒对大鼠血脂及心肌的影响

[摘要] 目的 探索不同剂量的白酒对大鼠血脂及心肌的影响,寻找有利于预防心血管疾病的合适饮酒量。方法 ①140只2~3月龄健康SD大鼠随机分成7组,正常组及6组不同剂量白酒灌胃模型组:正常组每日给予10mL/(kg・d)生理盐水灌胃,其余分别给予53度赖茅酒0.8mL/(kg・d)(A组),1.6mL/(kg・d)(B组),2.4mL/(kg・d)(C组),3.2mL/(kg・d)(D组),4.0mL/(kg・d) (E组),4.8 mL/(kg・d)(F组)灌胃,6d/周,每周称重1次,连续16周。② 16周后每组大鼠禁食12h取颈总静脉血3mL,以3500rpm离心15min,分离血清,- 20℃保存待测;各组大鼠抽血同步取左心室中部冠状面心肌放入中尔马林和液氮中冷冻保存备检。③酶法检测血总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)。④HE染色法做心肌病理切片,TUNEL法检测心肌细胞凋亡。结果 ①6组不同剂量白酒灌胃模型组的HDL-C明显高于对照组(P0.05),A组和B组与对照组比较,TC无明显差异,模型C、D、E、F组的TC明显高于A、B组(P

[关键词] 白酒; 血脂; 心肌; SD大鼠

[中图分类号] R595.6;R541.9 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2010)03-09-03

饮酒对健康的影响正越来越多地受到医学界的关注。近年,许多国家的报道均证实适量饮酒可降低心血管疾病的发病率,抗动脉粥样硬化,预防冠心病的发生[1]。虽然研究表明适量饮酒能降低心血管疾病危险性,但是目前关于不同剂量白酒对血脂的影响仍存在争议,且具体多大剂量对健康有益尚无统一界定。长期过量饮酒可导致心肌毒性,但是长期饮用多大剂量的白酒对心肌无明显损伤,目前尚无统一定论。有鉴于此,本研究用不同剂量的白酒对大鼠灌胃,16周后分别测其HDL-C、TC、TG、LDL-C,以寻求既可升高HDL-C又对TC、TG、LDL-C影响不大且不会产生心肌损伤的白酒剂量,为进一步深入研究提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 健康和清洁级SD大鼠140只,2~3月龄,体重180~220g,雌雄各半,购于贵阳医学院实验动物中心,合格证号:SCXK(黔)2008-0001。

1.1.2 主要实验设备和仪器 直径0.5cm灌胃针、托盘式扭力天平、电子天平、低温冰箱、台式冷冻离心机全自动生化分析仪、Elx一800酶标仪、光学显微镜、HPIAS-1000彩色病理图像分析系统。

1.1.3 主要药品与试剂 53度的5年陈酿赖茅酒(贵州赖茅酒厂)、生理盐水、甲醛、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、苏木素染料、30%过氧化氢二甲苯 、PBS缓冲液及枸橼酸钠缓冲液、血脂检测试剂盒 、TUNEL细胞凋亡试剂盒等。

1.2 方法

1.2.1 分组与灌胃 将140只大鼠按体重编号,并按随机排列表将其随机分成7组:正常对照组及6个不同剂量白酒灌胃模型组即:0.8mL/(kg・d)(A组),1.6mL/(kg・d)(B组),2.4mL/(kg・d)(C组),3.2mL/(kg・d)(D组),4.0mL/(kg・d)(E组),4.8mL/(kg・d)(F组),每组各20只。灌胃量的计算:根据以往文献[1],人每日饮酒不超过50mL(30g酒精)为宜,规定人50mL/d为少量饮酒。通过预实验摸索,将最高白酒剂量定为4.8mL/(kg・d)比较安全,高于此标准易造成动物死亡,中间剂量组设为2.4mL/(kg・d)、3.2mL/(kg・d)、4.0mL/(kg・d)3组,低剂量组设为0.8mL/(kg・d)、1.6mL/(kg・d)2组。动物灌胃容量为10mL/kg(A、B、C、D、E、F组白酒分别用蒸馏水按2/23、4/21、6/19、8/17、2/3、12/13稀释),对照组给予10mL/kg的生理盐水灌胃。灌胃时间为16周,每周6次,每周称1次体重。灌胃16周后各组大鼠禁食12h后颈总静脉取血,离心(15min×3500r/min)制备血清,- 20 ℃保存待测;各组大鼠抽血同步取左心室中部冠状面心肌放入中尔马林和液氮中冷冻保存备检。

1.2.2 脂质测定 酶法测定血清TC、TG、HDL-C、LDL-C。

1.2.3 组织学检测 10%中性缓冲福尔马林液固定心肌24h后,常规石蜡包埋,制备横切面石蜡切片,厚度为5μm,苏木素伊红(HE)染色,光镜下观察心肌细胞及细胞间质的变化。

1.2.4 心肌细胞凋亡的检测 用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,严格按照试剂盒说明书进行。结果判断:细胞核中有棕黄色颗粒者为阳性细胞。

1.2.5 统计学处理及方法 应用SPSS16.0软件包进行数据处理,用方差分析及q检验做统计学分析。

2 结果

2.1 血脂水平的比较

见表1。

由表1可见,白酒灌胃组大鼠HDL-C 较对照组显著升高(P

2.2 不同剂量白酒对实验大鼠心肌的影响

见封三图3~5及表2。各组大鼠心肌切片经HE染色,400倍光镜下显示,封三图3(D组)、封三图4(E组)、封三图5(F组)可见心肌细胞数目减少,排列欠整齐,组胞膜不清、胞浆淡染、部分细胞可见空泡变性及片状黏液变性及不同程度的坏死,心肌间质不同程度水肿,且D、E、F组细胞数目减少及细胞、间质的变性坏死程度有逐渐加重趋势。D、E、F组大鼠心肌病理变化分别见封三图3、4、5。

由表2可见,对照组、A、B、C 组心肌凋亡细胞阳性表达率之间无明显差异,D、E、F组心肌凋亡细胞阳性表达率较对照组、A、B、C 组显著增高,差异有显著性(P

3 讨论

3.1 白酒与脂质代谢

国内外大量研究显示,适量饮酒可使HDL-C浓度升高,如继续增加饮酒量则使TC水平显著升高而HDL-C不再升高,但国内外也有部分研究与上述意见不一致,如:丁书文等[2]认为少量饮酒无升高HDL-C作用,大量饮酒者TC有下降趋势;国外Langer R等认为HDL-C的血浆浓度随着酒精摄入量的增加而增高,同时LDL-C的浓度逐渐降低。Gaziano等分析了340例心肌梗死病人的饮酒量与血脂的变化,发现中度饮酒与心肌梗死危险性呈负相关,而与血浆总HDL及其亚型HDL2、HDL3呈正相关。饮酒与TC、LDL、VLDL和TG无明显关系。这提示饮酒对冠心病的保护作用在很大程度上是由HDL及其亚型介导的。Rimm等发现,每天饮酒30g会使血浆HDL升高0.10mmol/L,从而使冠心病的危险率降低17%。本研究显示,各饮酒组TG、LDL-C水平与对照组相比差异无显著性;各饮酒组与对照组比较HDL-C有升高的倾向,且有统计学差异;(0.8 ~1.6)mL/(kg・d)之间随着饮酒量增加HDL-C升高,但当饮酒量大于1.6mL/(kg・d)时随着饮酒量的增加HDL-C没有继续升高,而血清总胆固醇水平升高,这与国内外大量文献报道相符。但与丁书文、Langer R等的结论不一致,推测原因可能为丁书文、Langer R等研究的对象除受白酒影响外,还受到吸烟、糖尿病等其他因素影响。另外,本实验未能证实文献报道的有规律的中度饮酒比不饮酒和过度饮酒者HDL-C升高更为明显,可能与实验时间偏短有关。

适量白酒升高HDL-C的机制尚不十分清楚,可能的机制包括以下几点:1)适量白酒使高密度脂蛋白胆固醇降解减少,合成增加,从而增加血浆HDL-C浓度[3];2)通过肝脏合成和分泌Apo脂蛋白和脂蛋白及脂蛋白微粒,减少血循环中HDL的清除,从而使血浆HDL-C水平升高[4];3)使载脂蛋白apoA转运率增加,从而使血浆HDL-C水平升高[5];4)可以改变一系列脂质代谢过程中的酶和蛋白的活性,如磷脂转运蛋白、胆固醇酯转运蛋白、脂蛋白脂肪酶、卵磷脂-胆固醇酯酰转移酶、肝脂肪酶、磷脂酶等[6];有实验证明高卵磷脂-胆固醇酯酰转移酶使血浆HDL-C水平升高[7]。

3.2 不同剂量白酒对心肌的影响

适量饮酒可引起心肌细胞氧化应激对心肌起保护作用,减少心肌细胞凋亡,降低缺血再灌注损伤。本实验发现大于4.0mL/(kg・d)白酒灌胃组大鼠心肌间质出现水肿,心肌细胞变性、坏死,心肌细胞凋亡加速,小于4.0mL/(kg・d)模型组心肌组织与对照组无明显变化。由于本实验未能从分子水平对各组心肌进行分析,故只发现中到大剂量白酒对心肌的损伤作用,未发现适量白酒对心肌的保护作用,因此适量白酒对心肌的保护作用仍需进一步深入的研究。

适量[(0.8~1.6)mL/(kg・d)]饮酒可能提高大鼠HDL-C,且不产生心肌损伤。中到大剂量酒精[(2.4 ~4.8)mL/(kg・d)]摄入不仅可致血脂紊乱且加快心肌细胞凋亡,引起心肌间质水肿,心肌细胞变性、坏死等病理生理损害。

[参考文献]

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(收稿日期:2009-08-15)