高原地区食用菌液体菌种摇床培养基试验初报

摘 要：随着食用菌生产的发展，食用菌制种方法在传统固体制作的基础上在不断的改进和提高，其中液体菌种的制作便是其中之一。液体菌种具有菌丝纯度高、活力强、繁殖快、接种到培养料内流动性好、萌发点多，发菌迅速、周期短、菌龄一致等特点。2008年对已经用固体种在我所栽培成功的12个菌种进行了液体菌种在摇床上培养的研究，并取得了一定的效果。

关键词：食用菌；液体菌种；摇床培养基

中图分类号：S646 文献标识码：A

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 供试菌种

滑菇、真姬菇、白灵菇、黑木耳、双孢菇、茶树菇、猴头菇、香巍蘑、香菇、姬菇、北虫草、黄伞。

1.1.2 供试材料

马铃薯、麦粒、葡萄糖、KH2PO4、MgSO4、VB1、蛋白胨、安琪酵母、PDA试管培养基。

1.1.3 配方

1.2 试验方法

1.2.1 制备母种

分别在上述12种菌株同一天转接入准备好的PDA斜面培养基上，每支管接种量为绿豆大小，在25℃ ±1℃的条件下培养10d，待菌丝长满斜面后备用。

1.2.2 液体菌种培养基制作

按液体培养基A、B2种配方按量称好后，分装入500mL的三角瓶中，每个种分别装2瓶，每瓶装量为150mL，共24瓶。经高压灭菌后（pa121℃下保持40min）取出放入接种室中冷却备用。

1.2.3 液体菌种培养

将已经长满管的12种菌株，在无菌操作条件下分别接入三角瓶的液体培养基内，每瓶接种量为0.5cm2菌丝3块，置入摇床上培养。摇床技术参数参考相关学术论文后，设定为：温度25℃±1℃、转速为140r/min的条件下振荡培养。每天观察液体菌种的色泽或菌球变化，待有菌球形成时观察菌球数量和稠密度，第8天时多数种已达到制定的标准时停止培养，选择出合适的配方菌种接入麦粒培养基中继续培养。

1.2.4 麦粒培养基培养

按麦粒种的配方混合均匀，经高压灭菌2h后取出冷却备用。将已经长好的液体菌接入麦粒培养基中，每个种接20瓶。接种后置25℃的条件下培养，观察菌丝萌况，长满全瓶需所天数。试验工艺流程图见图1。

图1 试验工艺流程图

2 结果与分析

2.1 液体培养结果分析

试验于2008年11月20日接种，转速调至145r/min、温度25℃、摇瓶8d，见表2。

从表2可以看出不同品种在相同接种、培养条件下，表现不一样。经摇瓶4d后观察，滑菇、真姬菇、茶树菇、香菇、姬菇、北虫草、黄伞都陆续有菌球出现，培养基颜色变为深褐色或灰褐。而白灵菇、黑木耳、双孢蘑菇、猴头菇、香巍蘑到第8天结束培养时都没有菌球出现，但后期瓶壁上有菌索出现，但培养基颜色发生了变化，都为灰白色。除北虫草、茶树菇、真姬菇的培养基比较透明外，其余的都比较混浊。通过比较观察配方A、B的效果有明显的不同，但从液体种的色泽、菌球、透明度、菌液粘稠度等综合因素的考虑，选择了B配方中的北虫草、茶树菇、真姬菇、黄伞、姬菇、滑菇表现好的接入麦粒培养基中继续培养，其余的均淘汰。

2.2 麦粒培养的结果与分析

经过8d的摇床培养，11月28日将筛选出来的北虫草、茶树菇、真姬菇、黄伞、姬菇、滑菇液体菌种接入麦粒培养基中。菌丝的萌况与生长速度见表3。

从表3中可以看出：北虫草只培养1d就开始萌发，3d就长至菌种瓶1/4，8d就长满瓶；茶树菇、真姬菇2d内就开始萌发，一周内就长至培养基1/4处，12d就完全长满菌种瓶；滑菇经过5d菌丝才开始萌发，经过12d才长至菌种瓶的1/4处，21d才长满瓶；黄伞的菌丝萌发较慢，经过9d才开始萌发，近1个月才长满。从生长势可以看出，液体菌种长势好的，在麦粒培养基上也长的好。这几种液体菌种在麦粒培养基均优于用PDA试管直接转接的培养基。

3 结语

试验所选用的12个食用菌菌株中真姬菇、茶树菇、蛹虫草3个菌株在液体培养基中，对各种营养物质分解利用较快，利于菌丝吸收，生长和活力较高，抗杂菌等方面具有一定的优势，适宜配方B液体培养。而其他9个菌株表现出菌球大小不一、菌液混浊不清、菌丝纤细轮廓不清色等，可能不适宜这2种液体培养液或摇床的转数，需进一步试验。

在选用的2种培养基培养中，从直观表现来看，北虫草、茶树菇、真姬菇、滑菇这4个品种均在配方B上长势良好，接入到麦粒培养基上后，菌丝浓密、生长健壮，而且发菌速度快，满瓶速度快。说明这4个种的液体培养较为成功。

在整个试验过程中，北虫草的液体培养表现非常良好，比试管转麦粒或麦粒种转麦粒的生长速度快的多，生长速度有原来的20～25d才能满瓶提早到8d就满瓶，提早了12～17d。茶树菇和真姬菇也比传统种需要30d提早到12d就完全长满菌种瓶，可见用液体菌种的生产效率要比传统制种快的多。

百灵菇、黑木耳、双孢蘑菇、猴头菇、香巍蘑没有菌球出现也有可能是2种培养基不适宜其生长，也可能是摇床参数不适宜其生长，这些还有待于继续试验以达到最佳效果用于生产。