纳米芯片快速检测研究

标准品及缓冲液

HDL、低密度脂蛋白（LDL）、VLDL标准品及纳米金（5、10、20nm，CASno．7440575）、Tricine、十二烷基硫酸钠（SDS）、乙二醇、甲醇、甲基葡胺均购自美国Sigma公司。硝基苯并二唑C6酰基鞘氨醇（NBDC6ceramide）购自美国MolecularProbes公司。超速离心制备lLDL（密度为1．020～1．044kg／L）、sdLDL（密度为1．044～1．063kg／L）［6］。40mmol／LTricine缓冲液（pH值9．8），含40mmol／L甲基葡胺、0．02mmol／L十二烷基硫酸钠、20nmol／L纳米金（5nm）。所有试剂均为分析纯，配制试剂用水为二次蒸馏水。

临床资料

CHD患者35例，其中男20例、女15例，年龄56～78岁，均经冠状动脉造影证实有冠状动脉病变。正常对照组30名，男15名，女15名，年龄33～70岁，均排除心脑血管疾病。四、血清样本的采集及预处理2μL血清加入4μL缓冲液，再加入2μL0．1g／LNBDC6ceramide（乙二醇∶甲醇＝9∶1的混合液预先溶解）进行避光预染，1min后加入25μL缓冲液，此为电泳待测样本。

芯片电泳过程

将4μL检测样本加入试样池，5μL缓冲液分别加入试样废液池、缓冲液池、缓冲液废液池，各电泳池插入电极。试样池加＋750V电压，试样废液池接地，缓冲液池加＋200V，缓冲液废液池加＋300V，进样40s后同时切换电压进入分离阶段。分离阶段缓冲液废液池加0V，缓冲液池加＋3100V，试样池和试样废液池均施加＋300V，运行温度25℃。分离电场强度为403V／cm。

纳米金对脂蛋白分离的影响

芯片电泳分离混合的HDL标准品、VLDL标准品、lLDL和sdLDL，电泳图谱见图2。缓冲液中的纳米金颗粒为5nm时，脂蛋白各组分完全分离，当纳米金颗粒＞5nm时，脂蛋白分辨率降低，分离效率下降。图3为缓冲液中不同浓度的纳米金对脂蛋白分离度的影响。当纳米金浓度为20nmol／L时，脂蛋白各组分之间实现基线分离。

芯片电泳与琼脂糖凝胶电泳分离血清脂蛋白的对比

芯片电泳与琼脂糖凝胶电泳分离同一健康体检者血清脂蛋白，结果见图4。图4（a）为脂蛋白琼脂糖电泳图谱，健康体检者血清脂蛋白可分出3条区带，分别为HDL、VLDL及LDL。图4（b）为脂蛋白芯片电泳图谱，电泳分离出4条特征峰，分别为lLDL、sdLDL、VLDL及HDL。相对于芯片电泳，琼脂糖凝胶电泳分析时间长，分辨率不高，不能区分lLDL与sdLDL，而且LDL区带容易拖尾。

线性范围、检测限和重现性

在优化的分离条件下，lLDL、sdLDL、VLDL和HDL芯片电泳的线性范围［信噪比（S／N）＝3］分别为0．01～0．8、0．04～1．0、0．04～1．0、0．02～0．8mg／L；检出限分别为5、5、15和8μg／L。对健康体检者的血清样本连续测定5次，lLDL、sdLDL、VLDL和HDL的峰面积相对标准偏差（RSD）分别为3．5％、2．2％、4．5％、3．9％。

临床样本测定

对临床确诊的35例CHD患者和30名健康体检者血清进行芯片电泳分析。CHD组与健康对照组比较，sdLDL与VLDL峰面积显著增加（P＜0．01），HDL峰面积显著下降（P＜0．001）。见图5。

本文作者：汪骅1韩崇旭1王惠民2金庆辉3王大新1曹丽1董兰梅1作者单位：1苏北人民医院临床医学检测中心2南通大学附属医院检验医学中心3中国科学院上海微系统与信息技术研究所