肺癌中SOX2表达的临床意义及与预后的相关性

【摘要】 目的：探讨非小细胞肺癌中SOX2的表达及其临床意义。方法：应用免疫印迹和免疫组织化学方法，检测非小细胞肺癌中SOX2的表达情况，并分析其临床病理特征及与非小细胞肺癌发生发展的关系和预后相关性。结果：免疫印迹和免疫组化结果均显示SOX2在非小细胞肺癌中的表达含量远大于正常切缘肺组织。且随着TNM分期增加，SOX2表达含量也逐渐增加。且其SOX2的表达与患者淋巴结转移正相关，与患者生存期负相关。结论：SOX2可能是非小细胞肺癌多阶段演进过程中的重要变化分子之一，很有潜力作为非小细胞肺癌诊断和预后判断的生物标志。

【关键词】 非小细胞肺癌； SOX2； 生物标志； 预后

SOX（SRY-like HMG box）是一类具有一特征性HMO（high mobility group）DNA结合区域的转录因子家族，在真核生物中高度保守[1]。SOX2是SOX基因家族组中一个主要成员，表达于胚胎干细胞，在胚胎的各个发育过程中起重要作用[2]。近年来，SOX2被发现在多种肿瘤中高表达，如肺癌、胰腺癌、乳腺癌和神经内分泌癌等[3]。文献[4]报道在肺癌中SOX2高表达，但其具体的表达规律以及与患者预后生存期的相关性未见详细的报道分析，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 收集2006-2007年于本院接受手术治疗的非小细胞肺癌患者手术标本84例（随访患者至术后5年），肿瘤和癌旁组织放置-80 ℃冰箱中保存，所有组织实验前均经病理学检查证实。其中男50例，女34例，年龄50～75岁，平均（62.4±5.5）岁。根据肺癌国际TNM分期，Ⅰ期13例，Ⅱ期27例，Ⅲ期32例，Ⅳ期12例。按病理分期，高分化26例，中分化35例，低分化23例；按组织学分类：肺腺癌10例，肺鳞癌62例，肺大细胞癌12例；淋巴结转移54例，未见转移30例。

1.2 方法

1.2.1 Western blot检测SOX2的表达 选取Ⅰ～Ⅳ期肺癌及癌旁组织各8对，共32例。将组织加入蛋白裂解液，充分裂解，12 000 rpm离心5 min，取上清，置于-80 ℃低温冰箱保存。12%SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶上电泳。电泳完毕后使用电转仪将样品转印至PVDF膜。5%脱脂牛奶室温封闭1 h；一抗SOX 24 ℃孵育过夜；二抗室温孵育1 h，ECL显色后暗室曝光，胶片扫描，图像处理分析。

1.2.2 IHC检测SOX2的表达 选择具有完整临床资料的非小细胞肺癌组织84例，固定脱水后石蜡包埋切去4 mm厚组织制作切片。采用Dako Envision TM两步法进行SOX2免疫组化染色。SOX2抗体购自上海沪尚生物技术有限公司。组织切片脱蜡、水化及修复抗原。3%H2O2阻断内源性过氧化物酶活性后，抗人SOX2抗体4 ℃孵育过夜。辣根过氧化物酶（HRP）标记的Envisionl TM孵育60 min，DAB显色，苏木素复染、封片，IHC评分。

1.2.3 IHC结果判定 SOX2蛋白以细胞膜和胞浆中出现棕黄色颗粒为阳性细胞。根据全部组织中肿瘤细胞染色的阳性细胞所占总细胞的比例进行评分。在低倍视野下，阳性细胞所占比例小于10%为0分，阳性细胞数所占比例为10%～25%为1分；25%～50%为2分，50%～75%为3分，大于75%为4分。再根据免疫染色强度进行第二次评分，弱阳性为1分，中度阳性为2分，强阳性为3分。最后将2次得到的评分相乘即为最终所得到的免疫组化评分，满分为12分。其中评分≥6分作为高表达，

1.3 统计学处理 使用SPSS 17.0分析软件，各组间的分析采用t检验，患者预后分析采用KaplanMeier曲线和log-rank test分子检验，患者生存时间统计标准为手术开始时间到死亡时间或者统计终止时间，以P

2 结果

2.1 Western结果 32例非小细胞肺癌中SOX2高表达的百分率为78.1%（25/32），在TNMⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期肺癌中，SOX2高表达的百分率分别为50.0%（4/8）、62.5%（5/8）、75.0%（6/8）、87.5%（7/8）。经统计学分析，TNMⅠ期和Ⅳ期比较差异有统计学意义（P

2.2 IHC结果 根据免疫组化评分可得，SOX2在肺癌组织中的阳性表达率是85.7%。SOX2在高、中、低分化的肺癌中高表达的百分率分别为37.2%、54.2%、64.6%。高分化组与低分化组比较差异有统计学意义（P

2.3 Kaplan-Meier生存分析 Kaplan-Meier生存分析法分析了患者总体生存率和SOX2表达与肺癌患者的生存时间的相关性，SOX2高表达的肺癌患者生存期显著缩短（P=0.0161），表明SOX2的表达增高，预示着肺癌患者生存时间越短，预后相对较差；相反，SOX2表达较低的患者中，其生存时间则较长，见图2。

3 讨论

早期诊断和治疗能够明显提高恶性肿瘤患者的治愈率，降低死亡率，延长患者生存时间。因此，近年来的研究热点之一是寻找恶性肿瘤早期诊断的生物标志物，以便早期发现肿瘤、彻底治愈[5]。肺癌严重威胁着人类的生命安全。建立有效的诊断、治疗方法对改善肺癌的预后是重要的。

SOX2是SOX家族的一员，它与SOX1同属于SOX家族的B1亚组。SOX2在早期胚胎发生、神经分化和晶体发育等多种重要的发育事件中起重要作用[6]。目前与Oct4、c-Myc、Klf4、Nanog等转录因子一起被认为是胚胎干细胞和生殖细胞的标志物[7]。肿瘤细胞与胚胎干细胞之间存在着很多相似之处，尤其是两种类型的细胞都具有无限增殖和自我更新的能力。根据这些相似性可知，维持胚胎干细胞多分化潜能的转录因子很有可能在肿瘤组织中表达，且与肿瘤的发生发展有关。有研究发现，SOX2在多种肿瘤中高表达，如Neumann等[8]在结肠癌中检测到SOX2的含量高于正常组织；Rybak等[9]发现SOX2在表皮因子受体介导的前列腺癌干细胞中起重要促生长作用；Tsukamoto等[10]用RT-PCR发现了SOX2在胃癌中的表达含量较高；Chen等[11]也发现了SOX2在非小细胞肺癌发生发展过程中起重要作用，但其在肺癌中的表达规律和临床资料相关性并不十分清楚。

笔者通过Western blot方法和IHC分别分析了32例非小细胞肺癌患者肿瘤及癌旁组织中SOX2在蛋白水平的表达情况和规律，发现肿瘤组织中SOX2表达阳性率明显高于癌旁组织，且随着TNM分期的增加，其的表达量也逐渐增加。这与已报道的SOX2在乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌等恶性肿瘤中的表达情况基本一致。鉴于现有研究中SOX2与肺癌生存期、淋巴结转移、病理分型等临床特征相关性的报道甚少，本研究又通过IHC方法系统研究了SOX2在不同临床病理分型中表达情况及与其他临床特征的相关性。实验中笔者观察到，84例具有完整临床资料的肺癌患者中，生存期长的患者SOX2的表达含量明显低于生存期短的患者（P

参考文献

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[11] Chen Y，Huang Y，Huang Y，et al.The prognostic value of SOX2 expression in non-small cell lung cancer：a meta-analysis[J].PloS One，2013，8（8）：e71140.

（收稿日期：2014-01-08） （本文编辑：欧丽）