DNA完整性对夫精人工授精妊娠结局的影响研究

【摘要】 目的：研究dna完整性对夫精人工授精妊娠结局的影响。方法：选取2011年1月-2013年1月在本院收治的111例男性不育症患者作为研究对象，根据DNA完整性将其分为A组（DNA完整性

【关键词】 不育症； 夫精人工授精； DNA完整性； 临床妊娠率

男性不育症是临床常见疾病，其发生与质量不良密切相关。目前研究认为，DNA完整性会影响质量，DNA破碎程度增高会产生负面影响，造成不育和反复流产[1]。人工授精是治疗男性不育症的主要方法之一[2]。本研究分析DNA完整性对夫精人工授精妊娠结局的影响，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2011年1月-2013年1月在本院收治的111例男性不育症患者作为研究对象，纳入标准：（1）符合第5版《WHO人类检查与处理实验室手册》中男性不育症的诊断[3]；（2）符合人工授精启动标准；（3）取得患者知情同意，并签署人工授精知情同意书。111例男性不育症患者研究期间无失访、脱落病例，根据DNA完整性将其分为A组（DNA完整性

1.2 方法

1.2.1 常规检查 人工授精治疗当日，患者未排精3～7 d，在取精室内通过法收集，液化后检测总数、浓度和活力等。

1.2.2 完整性检测方法 （1）准备：取出的在pH 7.4的磷酸盐缓冲液中洗涤，离心后悬浮至浓度为10×106/mL；（2）制片：70 μL的l%低熔点琼脂糖于融化于65～90 ℃水中，并在37 ℃下放置约3 min，后加入处理后的悬液30 μL，混匀后吸取20 μL混合液体，滴在0.65%标准琼脂糖凝胶包被的玻片上，盖上盖玻片，4 ℃冰箱放置3～5 min，取出后揭去盖玻片；（3）样本处理：将载玻片放入新鲜的0.08 mol/L盐酸中，22 ℃下避光7 min，后放入含0.4 mol/L DTT的裂解液内约25 min，再将载玻片置于PBS 5 min，后依次置入70%、90%、l00%的乙醇，晾干备用；（4）染色：用瑞士吉姆萨染液染色25～20 min；（5）观察并计数：载玻片自然风干后，于40倍显微镜下观察至少200个，判断标准：头部周围晕环宽度不小于头部半径，认为该染色质DNA完整，否则则认为DNA完整性破坏。完整性=DNA完整数/计数总数×100%[4]。

1.2.3 人工授精操作方法 女方选择枸橼酸氯米芬片或注射用尿促性素（HMG）对女方进行促排卵治疗，根据卵泡监测大小及血清LH、E2水平适时注射人绒毛膜粗性腺激素（hCG）5000～10 000 U，24～36 h后行人工授精治疗，男方行梯度离心法进行优化选择，次日检测排卵情况，排卵后给予黄体酮胶丸200 mg口服，每晚1次，或黄体酮注射液20 mg，每日1次支持治疗。2周后，检测尿液中hCG水平，阳性为生化妊娠，4周后，行阴道B超检查，若宫腔内可见孕囊则为临床妊娠。

1.3 观察指标 统计患者处理前的质量，包括总数、浓度、前向运动，同时统计各组的生化妊娠数及临床妊娠数。

1.4 统计学处理 采用SPSS 18.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，用完全随机设计方差分析，计数资料采用 字2检验，以P

2 结果

B、C组的临床妊娠率、总数、前向运动率均明显高于A组，差异均有统计学意义（P

3 讨论

不育症是指育龄期机体功能正常的夫妇在保持正常性生活、且未采用避孕措施的条件下，超过1年时间仍未能生育[5-6]。不育症占不孕不育症的比例超过30%。相关的研究认为，男性不育症的发生与质量不良密切相关[7]。

目前检测质量的指标主要包括数量、存活率和抗抗体。但这些指标的检测过程中受检查者的主观判断影响较大，不利于疾病的准确诊断。近年来，国外的研究发现男性不育患者的DNA碎片会明显增多，而DNA碎片程度反映遗传物质的完整性，DNA发生碎片化对生育将会产生负面影响，造成不育和反复流产[8]。研究认为检测DAN的完整性能够有效评价质量和预测生育能力[9]。

在上述研究中笔者分析了DNA完整性对夫精人工授精妊娠结局的影响，旨在为临床中探寻筛查不育症、判断质量和生育能力的辅助检查指标提供更多的理论依据。目前关于DNA完整性的流行病学资料显示，DNA的碎片化程度与体外受精的成功率呈显著负相关，当DNA碎片化的比例超过10%时，受精率明显降低；而当这一比例超过20%时，受精率更是下降了超过50%[10]。为此，笔者将接受人工授精的患者分为A组（DNA完整性

综上所述，DNA完整性与人工授精妊娠结局密切相关，DNA完整性越好，质量越好，临床妊娠率也越高。

参考文献

[1] Bungum M，Humaidan P，Axmon A，et al.Sperm DNA integrity assessment in prediction of assisted reproduction technology outcome[J].Hum Reprod，2007，22（1）：174-179.

[2]白静，李静，高瑞格.236周期宫腔内人工授精临床分析[J].中国医学创新，2011，8（8）：160-161.

[3]世界卫生组织.世界卫生组织人类检查与处理实验室手册[M].第5版.北京：人民卫生出版社，2011：53-86.

[4]王玮玮，王厚照，张玲，等.染色质扩散法检测DNA完整性方法探讨及临床意义[J].国际检验医学杂志，2012，33（14）：1723-1724.

[5]苏静，薛惠英.DNA损伤与夫精宫腔内人工授精妊娠率的关系[J].医学临床研究，2013，30（1）：167-168.

[6]熊付兴，莫晓彬.运用生精胶囊治疗男性不育症的疗效及安全性分析[J].中国医学创新，2012，9（12）：100-101.

[7]黄茜，丘映，史秋雯，等.DNA损伤与形态，顶体完整率的关系研究[J].国际检验医学杂志，2013，34（6）：649-650.

[8]张鑫，张昌军，罗清炳，等.DNA损伤对妊娠结局的影响及临床意义[J].求医问药：下半月刊，2012，10（6）：59-60.

[9]黄茜，丘映，史秋雯，等.年龄，禁欲时间对质量的影响[J].中外医学研究，2013，11（14）：1-2.

[10]刘安娜，董佳，王厚照.DNA完整性对男性不育患者质量的影响分析[J].中国优生与遗传杂志，2013，21（2）：113-114.

（收稿日期：2013-12-04） （本文编辑：欧丽）