HPLC法测定雷公藤片中雷公藤甲素的含量
时间：2022-10-11 06:21:33
[摘要] 目的:建立高效液相法测定雷公藤片中雷公藤甲素的方法。方法:采用Diamonsil-C18(4.6 mm×200 mm,5 μm)色谱柱;流动相:甲醇-水(60∶40);检测波长:218 nm;流速:1.3 ml/min。结果:雷公藤甲素在0.047 6～0.476 0 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 1),平均回收率为99.08%,RSD=0.75%。结论:本方法简便、准确、重现性好,可用于雷公藤片中雷公藤甲素的质量控制。
[关键词] 高效液相法;雷公藤甲素;雷公藤片;含量测定
[中图分类号] R927.2 [文献标识码]B [文章编号]1674-4721(2010)02(a)-044-02
Content determination of triptolide in tripterygium Tablets by hplc
WANG Yanzhi
(The Department of Pharmacy Office, Chinese Medicine Hospital in Shuangliao City, Jilin Province, Shuangliao 136400, China)
[Abstract] Objective: To establish a method for the content determination of triptolide in Tripterygium Tablets by HPLC. Methods: The Diamonsil-C18 (4.6 mm×200 mm, 5 μm) column was used. The mobile phases consisted of methanol and water (60∶40), the flow rate was 1.3 ml/min and the detection wavelength was at 218 nm. Results: The linear ranges of Diphenhydramine Hydrochloride was at 0.047 6-0.476 0 μg (r=0.999 1), the average recovery was 99.08% with a RSD of 0.75%. Conclusion: The method is fast, reliable, accurate and can be used in the quality control of triptolide in Tripterygium Tablets.
[Key words] HPLC; Triptolide; Tripterygium Tablets; Content determination
雷公藤提取物为雷公藤根的醋酸乙酯提取物。本品为棕色的块状物或粉末;气微香,味微苦。取本品约10 mg,加乙醇15ml使溶解;加碱性二硝基苯甲酸试液0.5 ml,即显红色。雷公藤片含雷公藤甲素,有抗感染和免疫抑制作用,适用于类风湿性关节炎活动期。每次10～20 mg,3次/d,1个月为1个疗程。病情控制后减量、停药,采用间歇治疗。笔者采用HPLC法测定雷公藤片中雷公藤甲素的含量,研究结果表明,雷公藤甲素在此条件下分离较好,检测灵敏度高,测定专属性强。现报道如下:
1 仪器与试药
1.1 仪器
HP1100高效液相色谱仪;在线脱气机;四元泵;二极管阵列检测器;HP1100化学工作站;Agilent G1313ALS自动进样器;METTLER电子分析天平;simplicity-185超纯水器。
1.2 试药
雷公藤片(批号:091243,北京同仁堂公司);雷公藤甲素(批号:100021-200817,中国药品生物制品检定所);乙腈为色谱纯;水为超纯水;其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱:Diamonsil-C18(4.6 mm×200 mm,5 μm);流动相:甲醇-水(60∶40);检测波长:218 nm;流速:1.3 ml/min。柱温:35℃;进样量:10 μl;理论塔板数按雷公藤甲素计不低于3 000。
2.2 对照品溶液的制备
取雷公藤甲素对照品适量,精密称定,加甲醇溶液制成每毫升含0.023 8 mg的溶液作为对照品贮备液。精密吸取对照品贮备液4 ml置10 ml量瓶中,加甲醇溶液定容至刻度,作为对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
取雷公藤片30片,研碎后取10片量,加氯仿10 ml,超声10 min,加中性氧化铝1 g,搅拌均匀,蒸干,上中性氧化铝柱,以醋酸乙酯溶液洗脱,收集洗脱液150 ml,蒸干,残渣加甲醇溶液使溶解,定容至10 ml作为供试品溶液。
2.4 系统适用性试验
分别取雷公藤甲素对照品溶液、阴性溶液和供试品溶液,按上述色谱条件进行试验,考察系统适用性。HPLC色谱图见图1。
图 1HPLC色谱图
(A.对照品;B.阴性样品;C.供试品)
Fig.1HPLC chromatography
(A.Reference substance; B.Negative sample; C.Sample)
2.5 线性关系考察
分别精密量取“2.2”项下雷公藤甲素对照品贮备液1、2、4、6、8、10 ml,分别置10 ml量瓶中,加甲醇溶液稀释至刻度,摇匀,分别吸取20 μl,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定色谱峰面积,以对照品进样量(μg)为横坐标,峰面积为纵坐标,计算回归方程,结果表明雷公藤甲素进样量在0.047 6～0.476 0 μg范围内,呈良好的线性关系。回归方程为Y=2 110.8X+3.7(r=0.999 1)。
2.6 精密度试验
精密吸取“2.2”项下对照品溶液20 μl,重复进样5次,按上述色谱条件测定色谱峰峰面积,RSD为1.84%,结果表明本法精密度良好。
2.7 稳定性试验
精密吸取“2.3”项下供试品溶液,分别于放置0、2、4、6、8、12 h后,注入液相色谱仪,测定色谱峰峰面积,RSD为2.39%,结果表明供试品溶液在12 h内基本稳定。
2.8 重复性试验
取同一批样品,按“2.3”项下方法制备5份供试品溶液,分别测定色谱峰面积,计算得平均含量为11.48 μg/g,RSD=1.36%(n=6)。结果表明本法重复性良好。
2.9 回收率试验
取已知含量的样品6份,加入雷公藤甲素对照品溶液(0.050 48 mg/ml)1 ml,加入氯仿10 ml,按“2.3”项下方法制备样品溶液,照“2.1”项下方法测定雷公藤甲素色谱峰,测得平均回收率为99.08%,RSD=0.75%,结果见表1。
表 1回收率试验结果(n=6)
Tab.1Results ofrecovery test (n=6)
2.10 样品含量测定
取本品30片,称定重量,研碎,精密称取10片量,按“2.3”项下方法制备样品溶液,精密吸取样品溶液20 μl,依“2.1”项下方法进行测定。结果见表2。
3 讨论
雷公藤片既有抗感染作用,又有免疫抑制作用。目前其他的抗风湿药没有免疫抑制作用,而免疫抑制药又没有抗感染作用,而雷公藤两者均具有。同时对胃的刺激又比其他的抗风湿药小,细胞毒作用比其他的免疫抑制剂(如磷酰胺)安全。所以说雷公藤是一个不可多得具有很高价值的中国独创的新药。本研究通过照薄层色谱法试验,测定雷公藤片中其主要药理作用的雷公藤甲素进行含量分析,效果较好。吸取供试品溶液、对照品溶液,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以氯仿-乙醚为展开剂,展开,取出,晾干,喷以碱性二硝基苯甲酸试液,照薄层色谱法进行扫描,测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值,计算,即得。本品按片计,含雷公藤甲素(C20H24O6)不少于0.1%,此方法可以作为雷公藤片中雷公藤甲素的检测。
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(收稿日期:2009-09-28)
