医院制剂“参芪舒心通胶囊”质量标准的研究

参芪舒心通是甘肃庆阳市人民医院协定处方,具有益气养血,疏通心脉,增加冠脉血流量,降低血液黏稠度的功效。由赤芍、生黄芪、红丽参、川芎、红花、水蛭等中药组成,其中赤芍为其主要成份。为完善该制剂质量标准,增加定量检测项目,参照《中国药典》2005年版一部收载的赤芍药材及逍遥丸质量标准项下之方法,笔者采用HPLC法对本品中的芍药苷含量测定方法进行了系统研究,最终确定参芪舒心通胶囊每克含赤芍以芍药苷计暂定为不得低于0.20 mg。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Waters2487高效液相色谱仪,Waters515泵,Waters2487检测器,SIL-10Advp自动进样器,SCL-10Avp系统控制器,GS-2020色谱工作站,色谱柱LunuSΜ C18150 mm×4.6 mm,5 μm(美国),TG328A分析天平(上海天平仪器厂),KS-120D型超声清洗器(宁波科生仪器厂)。

1.2 试药 乙醇、甲醇为色谱纯(美国)、冰醋酸为分析纯(沈阳化学试剂厂),蒸馏水为双蒸水,芍药苷对照品(含量测定用 ,批号110736-200320,中国药品生物制品检定所),参芪舒心通胶囊(由甘肃庆阳市人民医院药剂科提供)。

2 色谱条件的确定

2.1 色谱柱 十八烷基硅烷键合硅胶(LunuSΜ C18,4.6 mm×150 mm,5 μm)。

2.2 流动相 (1)甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(40:60);(2)乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85)。两种流动相中,以乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85)配制简便,效果理想。

2.3 检测波长 测定对照品、供试品的全波长光谱图,最大波长相同,均为230 nm。

2.4 柱温及流速 柱温为40℃,流速为0.8 ml/min。

3 提取条件的筛选

参照逍遥丸等(中国药典2005年版一部)含量测定项下的方法及供试品溶液的制备方法,以50%乙醇和50%甲醇为提取溶媒,对提取条件进行筛选。试验结果表明,以50%乙醇25 ml超声提取30 min时,芍药苷提取已较完全,故以50%乙醇25 ml超声提取30 min为本品芍药苷含量测定的提取条件。结果见表1。

表1

提取条件的筛选结果(n=2)

提取方法芍药苷含量(mg/g)平均值(mg/g)

50%乙醇超声25 ml×15 min 0.270 0.2690.270

50%乙醇超声25 ml×30 min 0.322 0.3200.321

50%乙醇超声50 ml×30 min 0.329 0.3140.322

50%乙醇超声25 ml×60 min 0.324 0.3200.322

50%甲醇超声25 ml×30 min 0.313 0.326 0.319

4 对照品溶液的制备

取芍药苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1毫升含0.10 mg的溶液,即得。5供试品溶液的制备取本品颗粒,研细,精密称取约5 g,置100 ml锥形瓶中,加50%乙醇25 ml, 精密称定,超声处理30 min,放晾,加50%乙醇补足量,摇匀,用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,取滤液,即得。

6 阴性样品溶液制备

按照参芪舒心通胶囊制备工艺方法制备未含赤芍的阴性样品,将阴性样品按供试品溶液的制备方法制备阴性样品溶液。

7 阴性干扰试验

吸取阴性样品溶液、供试品溶液、对照品溶液各10 μl,分别注入高效液相色谱仪中。阴性样品色谱图中,在与对照品色谱及供试品色谱相应的位置无吸收峰。试验结果表明,阴性样品对芍药苷的测定无干扰。

8 理论板数的计算

在上述条件下,将对照品溶液注入高效液相色谱仪中,记录色谱图,理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000。

9 线性关系考察

精密吸取芍药苷对照品溶液(浓度:0.102 mg/ml)2、4、6、8、10 μl,依法进样测定,求得回归方程为:

Y=-20122.76+2014996X r = 0.9999

芍药苷在0.204～1.020 μg 范围内呈良好的线性关系,结果见表2。

表2

线性关系考察结果

进样量(μg ) 峰面积积分值

0.204 397642

0.408 802342

0.612 1202640

0.816 1617084

1.0202045567

10 稳定性试验

取供试品溶液(批号:090701),进样10 μl,依法测定,并每隔1 h同条件进样10 μl测定1次,持续5 h,计算峰面积积分值的相对标准偏差,结果RSD为0.90%。结果见表3。

表3

稳定性试验结果

时间(h)峰面积积分值 相对标准偏差(RSD%)

0876607

1875564

2865001 0.90%

3862273

4861923

5857746

11 精密度试验

取同一供试品溶液(批号:090701),进行5次重复进样10 μl测定,试验结果见表4。

12 重现性试验

取同一样品(批号:090701),按供试品溶液制备方法平行制备5份供试品溶液,依法测定,计算含量,试验结果见表5。

表4

精密度试验结果

序号峰面积积分值平均值(mg/g) RSD%

11007411

21027284

310373251025983.41.16

41022942

5 1034955

13 加样回收试验

精密称取已知含量的样品(批号:090701,含量:0.302 mg/g)共5份,每份精密加入一定量的芍药苷对照品(浓度:4.86 mg/ml)(相当于芍药苷0.803 mg/g),按供试品溶液制备方法制备,依法测定,结果加样回收率为98.32%,RSD为2.39%。结果表明,本法回收率良好。

14 样品测定

按供试品溶液制备方法,分别对十批实验样品平行制备供试品溶液,依法进行测定。测定结果见表7。

表5

重现性试验结果

序号取样量(g)峰面积积分值芍药苷含量(mg/g)平均值(mg/g)RSD%

1 6.0125 15340170.305

2 6.0198 1503768 0.299

3 6.0012 1543414 0.308 0.3021.57

4 6.0076 1514948 0.302

5 6.0174 1488805 0.296

表6

加样回收试验结果

序号取样量(g)含量(mg)加入量(mg)测得量(mg)回收率(%)X(%)RSD%

12.85990.86370.80301.666798.44

22.94140.88830.80301.6913100.12

32.72750.82370.8030 1.626796.9898.502.09

4 1.7576 0.53080.4015 0.9323100.85

5 1.0722 0.32380.4015 0.725396.02

表7

样品含量测定结果

试验序号药材批号含量(mg/g)样品批号含量(mg/g)平均(mg/g)X(mg/g)

109050220.130407100.293;0.3030.298

209050220.130407110.323;0.3140.318

309050220.130407120.301;0.2790.290

409050420.130407130.291;0.2750.283

509050418.670407140.249;0.2510.250

609050418.670407150.252;0.2510.2520.264

709050518.140407160.215;0.2220.218

809050618.380407170.241;0.2430.242

909050618.380407180.244;0.2520.248

1009050618.380407190.226;0.2240.250

15 含量限度的确定

根据十批样品的测定结果,考虑到原料含量差异、操作过程误差,故将十批样品测定结果所得平均值的80%确定为芍药苷的含量限度:0.264 mg/g×80%=0.211 mg/g,即:参芪舒心通胶囊每克含赤芍以芍药苷计暂定为不得低于0.20 mg。

参 考 文 献

[1] 王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究.中国医药科技出版社,1994.

[2] 阴健,等.中药现代研究与临床应用(Ⅰ)(Ⅱ).学苑出版社,1994.

[3] 中华人民共和国卫生部药典委员会编.中华人民共和国药黄(2005年版一部).化学工业出版社,2005,1.