革兰阴性菌脓毒血症患者早期NK细胞及可溶性粒细胞靶受体对病人预后的影响

[摘要] 目的：探讨革兰阴性菌脓毒血症患者早期NK细胞及血清可溶性粒细胞靶受体（sTREM-1）对病人预后的影响。方法：脓毒血症发生后12 h内，采集49例高度怀疑革兰阴性菌感染患者的外周血，应用流式细胞术分析NK细胞，ELISA法测定血清sTREM-1的浓度，同时使用生物梅里埃API20E鉴定系统进行细菌鉴定；采集16个健康人的血样品作为对照。结果：49例患者均确诊为革兰阴性菌感染。与对照组相比，脓毒血症患者外周血NK细胞明显增多(P20%的患者生存期长于NK细胞≤20%的患者（P

[关键词] 脓毒血症；革兰阴性菌；NK细胞；血清可溶性粒细胞靶受体

[中图分类号]R37[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2007）08（c）-014-03

The prognostic influence of NK cells and sTREM-1 on the patients with early severe Gram-negative sepsis

GAO Xue-jun1, BAO Cui-xia1, NIE Da-ping2

(1.Center of Laboratory Medicine, The Affiliated Yuhuangding Hospital of Qindao University Medical College , Yantai 264000,China; 2.Department of Microorganism, The Second Affiliated Hospital of Dalian Medical University, Dalian 116000,China)

[Abstract] Objective: To explore the prognostic influence of NK cells and soluble triggering receptor expressed on myeloid cells-1(sTREM-1) on the patients with early severe Gram-negative sepsis. Methods: Within 12 hours of the advent of severe sepsis, blood was sampled from 49 patients who were highly suspected being infected by Gram-negative pathogens. And blood sampled from 16 healthy was as the control. NK cells were targeted with monoclonal antibodies and were analyzed by flow cytometry. Serum sTREM-1 was determined by ELISA. At the same time pathogenic bacteria was identified by API20E system. Results: NK cells were significantly higher in the patients with sepsis than those in the control (P20% survived longer compared with those patients with NK cells≤20%(P

[Key words] Pyemia; Gram-negative bacteria; NK cells; sTREM-1

在脓毒血症的发病过程中，NK细胞作为淋巴细胞的一个亚群，发挥着先天免疫的作用[1]。同时，中性粒细胞和单核细胞在脓毒血症时，细胞膜上表达粒细胞靶受体[2]，其可溶性形式即血清可溶性粒细胞靶受体（soluble triggering receptor expressed on myeloid cells-1，sTREM-1）作为抗炎介质，与脓毒血症向脓毒血症性休克转化有密切关系[3,4]。本课题通过对49例革兰阴性菌感染的脓毒血症患者外周血的研究，探讨脓毒血症早期NK细胞及血清sTREM-1水平对患者预后的影响。

1 资料与方法

1.1 研究对象

我院2006年1月至2007年1月的早期脓毒血症患者49例，其中急性肾盂肾炎24例，急腹症18例，医原性肺炎7例。所有病例在过去12 h内均有脓毒血症的症状，其临床特征见表1，脓毒血症诊断标准是：感染性疾病基础上发生一个以上器官的急障碍，即出现一个以上脓毒血症体征[5]。选取临床健康查体者16例作为对照组，其中男10例，女6例，平均年龄56岁，均无感染性疾病，无肝、肾及心脑血管疾病，血常规、尿常规、血糖及心电图均正常。

1.2 试剂与仪器

荧光标记单克隆抗体试剂由美国BD公司提供。NK细胞检测使用美国BD 公司FacsCalibur流式细胞仪。血清sTREM-1 ELISA检测试剂盒购自上海科华公司，使用anthos2010酶标仪检测。

1.3 方法

1.3.1标本采集在发生脓毒血症后12 h内采集每一病例的静脉血10 ml，其中加5 ml到培养瓶中进行细菌培养；加3 ml到Sysmex公司EDTA抗凝管中，用于NK细胞测定；剩下2 ml加到无菌试管中，离心后将血清保存于-60℃，用于测定血清sTREM-1水平。对照组的血样采集同上。

1.3.2 细菌鉴定培养瓶培养7 d，细菌鉴定使用生物梅里埃API20E鉴定系统。

1.3.3 NK细胞检测NK细胞由CD3-CD16+CD56+而确定。用BD公司的Cellquest软件进行测定和分析,每次获取1 000个细胞，统计结果。

1.3.4 sTREM-1测定采用双抗体夹心酶免分析法，操作按照试剂盒说明进行。

1.4 统计学方法

NK细胞测定结果用中位数和四分位间距表示，两组间比较用t检验；计数资料用χ2检验；生存时间用Kaplan-Meier生存曲线表示，采用Log-rank检验。P

2 结果

49例患者均确诊为革兰阴性菌感染。

早期脓毒血症病人与对照组NK细胞的比较见表2。从表中可以看出，早期脓毒血症病人NK细胞数较对照组明显增高（P

据NK细胞数量划分的病人的生存曲线见图1。图中可见淋巴细胞中NK细胞比例>20%的患者生存期长于NK细胞≤20%的患者（P20%的患者中有3例死亡（占27.3%），两者比较差异有统计学意义（P

据血清sTREM-1水平划分的病人的生存曲线见图2。图中可见血清sTREM-1浓度>180 pg/ml的患者生存期长于sTREM-1浓度≤180pg/ml的患者（P180 pg/ml的患者中有5例死亡（占31.3%），两者比较差异有统计学意义（P

3 讨论

细菌感染导致的脓毒血症是一种严重的临床疾病，病死率较高。脓毒血症患者发生器官衰竭后的短时间内体内免疫状态会发生一系列的改变，这些早期改变与脓毒血症从一个阶段向另一个阶段的转变有关，更重要的是这些变化可影响患者的预后[6]。本研究所选患者经血培养均证实为G-菌感染。选择研究G-菌感染的原因，是由于临床上发生G-菌病原体感染的频率较高[7]。本试验揭示了G-菌脓毒血症发生后12 h内NK细胞及血清sTREM-1水平的变化。

Hotchkiss等[8]，对脓毒血症病人尸解获得的脾细胞进行免疫表型分析，发现NK细胞数量增加，但与对照相比差异无统计学意义。但我们的研究结果证实，脓毒血症早期NK细胞明显增加，与对照组比较差异有统计学意义。另外，动物链球菌感染的实验研究表明，NK细胞增加会导致实验动物免疫应答增强[9,10]。本课题通过对G-菌脓毒血症患者的研究发现，NK细胞在淋巴细胞中比例>20%时，病人的生存时间明显延长。这可能与NK细胞的先天免疫作用有关，但具体机制有待进一步研究。

本研究还发现，脓毒血症病人早期血清sTREM-1水平增加，同时生存曲线显示，当血清sTREM-1水平>180 pg/ml时，病人生存时间明显延长。这可能是因为sTREM-1是一种新的抗炎介质，在脓毒血症时发挥抗炎的作用[8]。据报道，sTREM-1与NK细胞膜上的NKp44受体功能相似[11]，但NK细胞本身能否产生sTREM-1未见有报道。如果脓毒血症病人的NK细胞能产生sTREM-1，就可以说明在脓毒血症早期NK细胞增加对机体具有保护作用。

脓毒血症早期NK细胞数量及sTREM-1浓度增加对机体具有某种保护作用，它们能够延长病人的生存时间，改善病人的预后。

[参考文献]

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（收稿日期：2007-07-11）

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