祛痘宝口服液的质量标准研究

[摘要] 目的 确定祛痘宝口服液的质量控制标准。 方法 主药材的定性检验参照《中华人民共和国药典》2010年版中的有关方法；以黄芩苷为对象进行含量测定；制订质量标准，并进行稳定性和回收率试验研究。 结果 该产品质量标准符合要求， 黄芩苷在0.0535～0.289 μg范围内线性关系良好，其回归方程为Y=10 629X-71.34（r=0.9999）。 结论 本质量标准合理、稳定，测得祛痘宝口服液中黄芩苷的含量符合药典标准。

[关键词] 祛痘宝口服液；质量标准；薄层色谱；高效液相色谱

[中图分类号] R927.11 [文献标识码] B [文章编号] 1674-4721（2013）12（c）-0192-03

祛痘宝口服液是由桂枝、黄芩、白芍以及葛根等10味中药经过提取制成的纯中药制剂。这10味药均为清热药，具有辛凉解表、解毒的功效。该制剂具有疗效确切、安全、有效、使用方便等特点，主要成分为黄芩苷，它有清热燥湿、泻火解毒的功能[1-2]。为了控制该制剂的质量，保证疗效，本研究采用反相高效液相色谱法（HPLC）测定祛痘宝口服液中黄芩苷的含量，同时建立了口服液中主药材的定性方法，即采用TLC对桂枝、黄芩和白芍进行鉴别，采用HPLC对黄芩苷的进行含量测定，较全面地建立了祛痘宝口服液的质量标准，为有效地控制药品的质量提供了依据。

1 材料与方法

1.1 仪器与设备

Agilent 1200高效液相色谱仪（德国安捷伦公司），TU-1901紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司），RE-52CS旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），DFZ-6020真空干燥仪（上海基玮试验仪器公司），Sartarious BP211D电子分析天平（德国赛多利斯公司），KQ-250DB超声仪（昆山市超声波仪器公司），LXJ-ⅡB 离心机（上海安亭科学仪器公司）。

1.2 处方量的确定

治疗青春痘的处方（出自《伤寒杂病论》）：桂枝15 g、黄芩25 g、炙甘草10 g、白芍15 g、生姜2片、大枣12枚、葛根25 g、黄连10 g、知母15 g、白术15 g。

1.3 主要成分的鉴别及制备

①药材的定性检验：原药材或饮片按《中华人民共和国药典》（简称“药典”）2010年版一部正文项下进行检验，检验合格后方可使用[1]；②药材的提取：根据药材理化性质及药理作用，拟将桂枝、黄芩、炙甘草、白芍、生姜、大枣、葛根、黄连、知母、白术等10味药材，以黄芩苷为指标，采用水提或醇提法，回收乙醇，制备提取物，并使用正交实验设计优化提取工艺。

1.4 色谱条件

色谱柱为Lichrospher C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液（25∶75），流速为1 ml/min，检测波长为278 nm，进样量为10 μl，流速为1 ml/min。理论塔板数以黄芩苷峰计≥2500，样品中黄芩苷峰与其他组分峰分离度>1.5。

1.5 溶液的制备

1.5.1 对照品溶液的制备 精密称取105℃干燥至恒重的黄芩苷对照品，加甲醇制成30 μg/ml的溶液，摇匀，即成。

1.5.2 供试品溶液的制备 精密量取本制剂2 ml置于50 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，0.45 μm滤膜过滤，即成。

2 结果

2.1 性状鉴别

2.1.1 性状 本品为棕红色液体，味苦。

2.1.2 桂枝的鉴别 取本品3 ml，置具塞锥形瓶中，加甲醇20 ml，密塞，超声处理30 min，滤过，滤液置水浴上挥去甲醇，加入20 ml水溶解，用乙醚20 ml萃取，共3次，挥去乙醚，残渣加无水乙醇5 ml溶解，作为供试品溶液。另配制缺桂枝药材的制剂，按供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液。另取桂皮醛对照品，加乙醇配成40 μg/ml的对照品溶液。照薄层色谱法（药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述3种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（17∶3）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼试液[1]。结果显示，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙色斑点；缺桂枝的阴性样品无干扰。

2.1.3 黄芩的鉴别 取本品2 ml，置具塞锥形瓶中，加入醋酸乙酯-甲醇（3∶1）的混合溶液10 ml，密塞，超声30 min，过滤，滤液用旋转蒸发仪真空减压浓缩至干燥，残渣加甲醇0.5 ml溶解，取上清液作为供试品溶液。另配制缺黄芩药材的制剂，按供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成1 mg/ml的对照品溶液。照薄层色谱法（药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验[3]，吸取上述3种溶液各2 μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（10∶3∶1∶2）为展开剂，预饱和30 min，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果显示，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗色斑点；缺黄芩的阴性样品无干扰。

2.1.4 白芍的鉴别 取本品3 ml，加水15 ml，回流30 min，滤过，滤液用乙醚振摇提取2次，每次20 ml，弃去乙醚液，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次30 ml，弃去水层，合并2次正丁醇液后，蒸干，残渣加入甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液[4]。按处方配比称取缺白芍的其他药味适量，用供试品溶液制备方法制备阴性样品溶液。另取芍药苷对照品，加入乙醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述3种溶液各10 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点清晰[5]。结果显示，供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点；缺白芍的阴性样品无干扰。

2.2 含量测定

2.2.1 线性关系考察 分别精密量取“1.5.1”项下对照品贮备液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 ml，分别置于10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成不同浓度的对照品溶液。分别吸取上述溶液各10 μl，依次进样，记录色谱图，以峰面积积分值（Y）为纵坐标，检测浓度（X）为横坐标进行线性回归，得回归方程为Y=10 629X-71.34（r=0.9999），证明黄芩苷在0.0535～0.289 μg范围内线性关系良好。

2.2.2 精密度试验 精密吸取“1.5.1”项下对照品溶液10 μl，重复进样6次，记录色谱图，结果显示，平均峰面积为884，RSD=1.45%，表明仪器精密度良好。

2.2.3 重复性试验 取同一批样品6份，按“1.5.2”项下方法制备6份供试品溶液，分别测定含量，求出平均含量并计算出RSD值。结果提示，测得峰面积分别为836、849、841、831、842、839，RSD=2.03%，表明重复性良好。

2.2.4 专属性试验 按“1.5.2”项下方法，不加黄芩药材制备阴性对照液，按“1.4”项下色谱条件进样10 μl，结果提示，阴性样品在黄芩苷对照品色谱峰相应位置无色谱峰干扰（图1）。

A

B

C

A.阴性对照；B.对照品；C.供试品

图1 专属性实验HPLC色谱图

2.2.5 稳定性试验 取“2.2.3”项下任意一份供试品溶液于0、5、10、15、20、24 h，分别进样10 μl，记录色谱图，测得平均峰面积为841，RSD=1.76%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.2.6 加样回收率试验 分别精密量取“2.2.3”项下同一批次已知含量的6个样本的祛痘宝口服液1 ml，置于10 ml量瓶中，共6份，再分别精密加入已知含量的同一黄芩苷的甲醇对照品溶液1 ml，按“1.4”项下色谱条件测定黄芩苷总含量，结果提示，平均回收率为98.33%，RSD=1.78%（n=6）（表1）。

表1 样本加样回收率试验结果

2.2.7 样品含量测定 分别精密吸取“1.5.1”项下对照品溶液与同一批次的3份供试品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按峰面积计算样品含量，结果提示，平均含量为0.0321 mg/ml，RSD值1.82%（表2）。

表2 样品含量测定结果

3 讨论

HPLC测定项中，制备对照品溶液及供试品溶液时采用甲醇作溶剂比采用甲醇与水混合溶液作溶剂所得的色谱峰要敏锐，而且出峰时间缩短[6]。

黄芩苷是黄芩中的有效成分之一，具有抗菌消炎的作用，为祛痘宝口服液的有效成分。本研究利用反相HPLC测定祛痘宝口服液中黄芩苷的含量，有效成分分离较好，干扰少，该方法简便、稳定、重现性好，可作为该制剂含量测定的检测方法[7]。

本制剂适用于脸上经常长痘人群，服用方便，起效迅速，是整理挖掘传统古方和中医治疗急症的需要，它的成功研制将为中医口服液治疗法提供一种高效、价廉、服用方便、毒副作用少的新药。该制剂质量标准的研究，保证了其药效和质量，使其具有广阔的开发前景。

[参考文献]

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010.

[2] 文敏，李雪，付守廷.黄芩苷药理作用研究新进展[J].沈阳药科大学学报，2008，25（2）：258.

[4] 崔淑云，王登旭.益肝康口服液的制备及质量标准研究[J].中国药房，2008，19（3）：192-194.

[5] 杨菁，石海燕，李莹，等.地黄寡糖对脑缺血再灌所致痴呆大鼠学习记忆功能的影响[J].中国药理学与毒理学杂志，2008，22（3）：165.

[6] 杨菁，史佳琳，白剑，等.地黄寡糖对谷氨酸诱导的海马神经元及葡萄糖摄入的影响[J].中国药理学与毒理学杂志，2009，23（2）：99.

[7] 李娜，高晓燕，范强，等.金银花提取液中绿原酸的快速定量[J].中国中药杂志，2007，32（4）：312.

[8] 王鑫，王静，袁子民.RP-HPLC法测定金柴黄颗粒中黄芩苷的含量[J].浙江中医药大学学报，2010，34（2）：275-276.

（收稿日期：2013-08-14 本文编辑：袁 成）