时间：2022-10-04 02:56:04
[摘要]目的 通过测定不同产地及不同采收期五味子中木脂素的含量，为明确五味子的适宜产地及适宜采收时间提供依据。方法 采用Ecosil Cts-AQ色谱柱（250ram×4.6mm，5μm），乙腈-水为流动相，进行梯度洗脱，流速1mL/min，检测波长为217nm。结果 不同产地五味子中木脂素含量差异明显，辽宁东部山区（丹东、本溪）所产五味子中混合木脂素含量较高，含量在0.9658%～1.1232%之间；不同采收期五味子中木脂素含量差异不大。结论辽宁东部山区（丹东、本溪）适合五味子栽培，九月份是五味子的适宜采收期。
[关键词]五味子；HPLC；木脂素；不同产地；不同采收期
[中图分类号]R917 [文献标识码]A [文章编号]2095-0616（2016）11-38-04
五味子是木兰科植物五味子Sehisandrachinensis（Turcz.）Baill.的干燥成熟果实。五味子是辽宁省的主产药材，有辽五味之称。如果通过研究，能够科学规范引导五味子种植，确定五味子的适宜采收期、适宜种植区域将大大提高五味子质量，将为辽宁药都（本溪）注入新的活力。
五味子中含有木脂素、挥发油、多糖及有机酸等成分，我们对不同产地、不同采收期的五味子进行全成分研究，以期从化学成分角度为五味子的适宜采收期、适宜种植区域的确定提供依据。木脂素类成分为五味子中主要活性成分，本文是对不同产地、不同采收期五味子中木脂素含量的比较研究。
1仪器与试药
1.1实验仪器
Waters高效液相色谱仪（Waters e2695 pump、Waters2998检测器，Empower3数字处理软件）；KQ-250DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；电热恒温水浴锅（北京市永光明医疗器械有限公司）；AE240型十万分之一分析天平（瑞士METTLER）；FA1004B电子天平（上海精密科学仪器有限公司）。
1.2实验药材
五味子由辽宁中医药大学王冰教授鉴定。
1.3实验试剂
五味子醇甲（1106-101018），五味子醇乙（1327-091027），五味子酯甲（1330-110116），五味子甲素（0764-200006），五味子乙素（110765-200205）均购自中国药品生物制品检定研究院；五味子丙素（A0593）购于成都曼思特生物科技有限公司。甲醇、乙腈为色谱纯，娃哈哈纯净水。
2方法与结果
2.1色谱条件
Ecosil C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脱（0-20min，55%A；20～25min，55%～75%A：25～40min，75%～65%A：40～45min，65%～55%A）；检测波长217nm；流速1mL/min；进样量10μL；柱温30℃。色谱图见图1。
2.2对照品溶液制备
精密称取五味子醇甲、醇乙、甲素、酯甲、乙素、丙素对照品适量，置5mL容量瓶中，配制成浓度分别为0.076、0.046、0.01552、0.03528、0.05504、0.02272mg/mL的五味子混合对照品溶液，4℃冰箱中保存，备用。
2.3供试品溶液制备
取五味子粉末（过60目筛）约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20mL，密塞，称重，超声30min，用甲醇补足失重，摇匀，滤过，取续滤液，经0.45μm微孔滤膜滤过，即得。
2.4线性关系考察
精密吸取上述混合对照品，分别进样1、5、10、15、20μL，依上述色谱条件进行测定，以进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程见表1。
2.5精密度试验
精密吸取混合木脂素对照品溶液10μL，连续进样6次，测定峰面积，五味子醇甲、醇乙、酯甲、甲素、乙素、丙素的RSD分别为0.64%、1.48%、0.55%、0.90%、0.90%、1.39%，均小于3%，表明仪器性能良好。
2.6稳定性试验
精密吸取同一五味子供试品溶液10μL，分别在0、2、4、6、8、10h进样测定，结果五味子醇甲、醇乙、酯甲、甲素、乙素、丙素6种木脂素峰面积的RSD分别为0.51%、1.50%、2.14%、2.52%、1.32%、1.62%，表明供试品在10h内保持稳定。
2.7重复性试验
精密称取同一五味子粉末6份，各0.25g，按“2.3”项下制备供试品溶液，依本实验方法测定并计算含量，结果五味子醇甲、醇乙、酯甲、甲素、乙素、丙素6种木脂素的含量的RSD分别为1.22%、2.03%、2.81%、1.56%、2.15%、2.34%，表明方法重复性良好。
2.8加样回收率试验
取已知含量的五味子粉末0.12g，精密称定，共6份。根据样品中五味子醇甲的含量，加入混合对照品1.7mL，按“2.3”项下方法操作，并按“2.1”项下色谱条件测定，计算五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素的加样回收率平均值分别为95.13%、97.11%、97.28%、97.53%、98.06%、98.25%，RSD分别为1.54%、0.90%、1.22%、1.40%、1.07%、1.09%。
2.9样品测定
取不同产地及采收期五味子样品，粉碎，过60目筛，分别按照“2.3”项下方法制备供试品溶液，分别依相应的色谱条件进行HPLC测定，记录峰面积，计算含量，结果见表2～3。
由表2可知，混合木脂素含量以辽宁东部地区丹东、本溪含量较高，在0.9658%～1.1232%之间，其他地区在0.8348%～0.9343%之间。结果表明，辽宁东部地区丹东、本溪产地的五味子混合木脂素含量较高。
由表3可知，本溪产地不同采收期的五味子中混合木脂素的含量未见差异，含量均在1.11%左右，可见9月份五味子中木脂素含量变化不明显，9月份均适宜采收。
3讨论
五味子木脂素类成分具有抗炎、抗氧化、抗病毒及抑制溃疡等药理作用，有文献报道，木脂素成分具有较强的保肝作用。现代药理学研究表明，五味子中木脂素类成分主要用于治疗消化系统、中枢神经系统、心血管系统、泌尿系统等疾病。由此，五味子被广泛用于中医临床方剂和中药制剂中，并已开发研制联苯双酯、双环醇和五仁醇胶囊等保肝降酶药物。本实验对五味子中的代表性有效成分木脂素类成分进行研究，对确定五味子的适宜种植区域及适宜采收期是有明显意义的。
五味子中含有多种木脂素，其中五味子醇甲是2015版中国药典含量测定的指标性成分。本实验对多种五味子木脂素同时进行含量测定，包括五味子醇甲、醇乙、酯甲、甲素、乙素、丙素等，来探讨不同产地及不同采收期对五味子混合木脂素的影响。
研究表明，辽宁东部（丹东、本溪）所产五味子中木脂素含量较高。辽宁东部多为山区，多年来一直对五味子有栽培。本研究结果从有效成分含量的角度验证了辽宁东部山区适宜五味子的种植。五味子一般成熟期在九月份内，研究表明在成熟期内木脂素含量变化不十分明显，如果以木脂素含量为依据，可确定九月份均适宜采收。
五味子中尚含有挥发油、多糖及有机酸等成分，我们将对不同产地、不同采收期的五味子进行全成分研究，以期从化学成分角度为五味子的适宜采收期、适宜种植区域的确定提供依据。