酶免法检测丙肝病毒核心抗原在献血者筛查中的应用分析

【摘 要】目的：分析基层血站大规模筛查献血者HCV感染采用ELISA方法联合检测抗HCV 和HCV C抗原的可行性。方法：采用ELISA法检测献血者样本抗HCV和HCV C抗原，结果：与HCV PCR法进行比较分析。结果：献血者780份抗HCV初复检阴性样本中，HCV C抗原检测结果均为阴性。56份抗HCV初复检阳性样本中，HCV C抗原检测阳性16份，HCV PCR阳性17份；11份抗HCV初检或复检阳性样本中，HCV C抗原检测阳性1份，HCV PCR阳性1份；17份抗HCV初检或复检或初复检结果灰区样本中，HCV C抗原检测阳性3份，HCV PCR阳性4份。结论：ELISA法检测HCV C抗原灵敏度及特异性均较高，适合基层血站开展对献血者HCV大规模筛查，也适合基层医院开展对患者输血前HCV感染的检测。

【关键词】丙型肝炎病毒；核心抗原；核酸检测

【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）03-0595-01

丙型肝炎主要经过血液传播，是一种严重的经血传播疾病，目前没有较好的预防和治疗方法。我国是丙型肝炎感染大国，在一般人群中，丙型肝炎病毒感染率达3.2%。我国献血法规定，对献血者必须进行HCV检测，目前多数血站筛查献血者是否感染HCV采用不同厂家试剂两遍检测抗-HCV。酶免疫法检测抗-HCV窗口期长（大约70天），而HCV感染者在发病前12天即可具有传染性[1]。酶免法检测HCV C抗原可缩短HCV窗口期至15天[2]，是否适合献血者大量筛查，我们对此进行了分析。

1 材料和方法

1.1 样本 从本血站2012年6月至12月无偿献血者中抽选酶免法抗-HCV初检、复检均阳性样本56份，抗-HCV初检、复检均为阴性样本780份，仅抗-HCV初检或仅复检阳性样本11份，灰区样本（初检或复检有一次灰区或初复检均灰区，灰区=cut off×0.8）17份，共计864份样本。

1.2 试剂和仪器 抗-HCV初检试剂为上海科华生物工程股份有限公司提供，批号201207041等；抗-HCV复检试剂，英科新创（厦门）科技有限公司提供，批号2012065815等；HCV CAg检测试剂，湖南康润药业有限公司提供，批号20121001；深圳爱康Uranus AE200全自动酶标仪；美国ABI7300型基因扩增仪，试剂由深圳凯杰生物工程有限公司提供，批号20121101。

1.3 方法 献血者血清标本经抗-HCV ELISA试剂初、复检后，将所需标本分装并置-80℃条件下存放，确保被检标本仅冻融一次。864份样本均检测HCV C抗原。将抗-HCV初检、复检均阳性和仅初检或复检阳性及灰区血清标本共84份样本同时进行HCV C抗原和HCV RT-PCR检测。具体操作方法和结果判断，严格按照说明书要求进行，记录检测结果。

2 结果

2.1 780份抗-HCV初检、复检均合格的献血者样本中，ELISA检测HCV C抗原结果均为阴性（780/780）。

2.2 56份抗-HCV初检、复检均阳性的献血者样本中，HCV c抗原检测阳性样本16份，HCV PCR检测阳性样本17份。仅抗-HCV初检或仅复检阳性11份样本中，HCV c抗原检测阳性样本1份，HCV PCR检测阳性样本1份。抗-HCV检测结果灰区样本17份中，HCV c抗原检测阳性样本3份，HCV PCR检测阳性样本4份。见附表1。

检测结果采用x2检验，P>0.05，84份样本中HCV C抗原酶免疫法检出阳性率与HCV PCR方法阳性检出率无显著性差别。两种方法检出阳性符合率达90%以上。

3 讨论

卫生部的《血站技术操作规程》【2012】中明确要求，献血者丙型肝炎病毒（HCV）感染标志物及其检测方法有2种选择，可任选其中1种：1）采用2个不同生产厂家的ELISA试剂检测HCV抗体或联合检测HCV抗原和抗体；2）采用1种ELISA试剂检测HCV抗体或联合检测HCV抗原和抗体，采用1种试剂检测HCV核酸。大多数血站目前广泛选用的检测方法是采用2个不同生产厂家的ELISA试剂检测HCV抗体，抗HCV试剂因不同生产厂家所用抗原片段及抗原质量不同，试剂的灵敏度和特异性存在一定差异，从而导致抗-HCV检测结果的不一致。ELISA检测抗-HCV窗口期长，可出现漏检和假阳性情况[3]。应用PCR方法检测HCV特异性强，灵敏度高，是HCV感染辅助确证技术之一，但该方法要求条件高，操作复杂，需具备较高的设备、设施及技术条件，检测费用也高，易出现假阳性和假阴性，并不适合基层血站对献血者大规模筛查。本实验结果显示与检测抗HCV相比，ELISA方法检测HCV C抗原具有较高的特异性（780/780）；对抗-HCV初检和复检均阳性、仅初检或复检阳性、检测结果灰区等84份血清标本，ELISA方法检测HCV C抗原的检测结果（20/84）与HCV PCR方法结果（22/84）相比，阳性检出率无显著性差异，具有较好的灵敏度。

HCV核心抗原是HCV感染者体内早期标志物，几乎与HCV-RNA同时出现，在感染早期15天即可检出。比较而言，基层血站目前已具备ELISA检测设备、技术条件，不需要更多投入，适合采用ELISA法抗HCV和HCV C抗原联合检测。ELISA方法检测HCV C抗原快速、便捷，方法上适合基层血站开展对献血者样本大规模筛查，可提高献血者HCV感染检出率。

另外，ELISA HCV C抗原检测有利于HCV感染者早期发现，特别是对免疫低下患者。由于输血后丙肝引起的医疗纠纷不断增多，已引起各级医院的关注[4]，基层医院对输血患者开展输血前HCV C抗原检测有利于HCV感染者的早期发现，减少输血纠纷。

参考文献：

[1] 田庚善.病毒性疾病[A].见：方昕.现代内科学[M]，上卷.北京：人民军医出版社，1996.761-783

[2] 龙润乡，等.丙型肝炎病毒三种标志物的稳定性[J].中国生物制品学杂志，2009，22（5）：468-469

[3] 张伯伟，等.献血者丙型肝炎病毒（HCV）核心抗原初步检测及意义[J].河南医学研究，2003，12（3）：223-225

[4] 耿泰山，等.输血与感染丙型肝炎民事诉讼实案分析[J].中国医院管理杂志，2004，20（8）：505-506