结核分枝杆菌黏附素HBHA在结核病免疫学诊断中的应用

【摘要】目的：探讨结核分枝杆菌粘附素（HBHA）在结核病免疫学诊断中的应用价值。方法：将培养基中处于稳定期的卡介苗菌株超声裂解（Pyrolyse）、层析（Chromatography）和洗脱（elution）最终获得天然HBHA并制备重组蛋白；选取肺结核（TB）患者、结核病毒感染者以及健康人各30例，采集3组研究对象的外周血液中单核细胞，使用HBHA重组蛋白作为抗原培养实验，使用ELISA方法检测各培养基中的 IFN-γ含量。结果：潜伏者组患者的IFN-γ含量显著高于健康人组，同时略高于结核病患者组，数据差异显著P

【关键词】结核病；HBHA；免疫学；诊断

【中图分类号】R-0 【文献标识码】A 【文章编号】1671-8801（2016）03-0193-02

结核病的诊断一直一来都是临床诊断的难点，常规的诊断方法具有耗时长、阳性率低等缺点使得临床应用价值难以达到预期。为了提升肺外结核病症诊断的准确率，并可给患者的治疗提供指导依据，寻求全新且有效的检测方法成为亟待解决的问题[1]。HBHA是结核分支杆菌分泌的一种粘附素，医学研究发现其是一种参与肺外结核转移的基因，并逐渐将其应用于肺结核的诊断中，现做以下报告：

资料与方法

1.1一般资料

（1）血清样本：实验中使用的肺结核患者血清均是来自于某医院确诊的TB患者，共计30例，其中男性18例，女性12例，平均年龄为（45.3±1.4）岁，平均病程为（2.0±0.7）年；结核病毒感染组30例，男女性比例为1：1，平均年龄为（43.7±3.5）岁；健康组血清为同时期进行健康检查者的血清样本，受检者30例，男女性比例为17：13，平均年龄为（42.3±3.0）岁。（2）BCG菌株：本次实验的BCG菌株由中国药品、生物制品研究所提供。（3）试剂：HRP标记羊抗鼠IgG由北京中杉试剂生产公司提供；肝素吸附柱由US，Sigma公司提供； 吸附柱由鼎国生物有限公司提供。

1.2方法

（1）HBHA蛋白制备方法：首先在培养基中培养卡介苗时期繁殖至稳定期，采用超声对其进行Pyrolyse、 和elution处理，最终获取纯天然的HBHA，将BCG基因组作为模版将HBHA基因片段进行扩增，质粒PET，32a为载体，以大肠杆菌（Escherichia Coli）作为宿主菌制备HBHA重组蛋白。（2）外周血管单核细胞分离方法：分离过程均在无菌环境中进行，采集测试者的静脉血液，然后使用淋巴分离液获得血样中的单核细胞并洗涤操作，完毕后使用1640培养基重悬处理，悬浮密度控制在1.0*106/ml，然后将悬浮液分别加入96孔细胞培养板中（250ul/孔）。每个研究组又分为无刺激（无抗原）和HBHA组（HBHA2mg/L），连续培养4d后进行分析[2]。（3）检测方法：使用ELISA方法检测各培养基中的 IFN-γ含量，其操作步骤详见试剂说明书。

1.3统计学方法

采用SPSS20.0统计学软件处理本次实验的数据，计数资料用%表示，组间数据用X2检验，P

2结果

3组研究对象的IFN-γ平均值差异显著，健康测试者无刺激组的IFN-γ平均数为（8.5±0.2）ng/L，HBHA组平均值为（50.2±0.01）ng/L；病毒感染测试者无刺激组的IFN-γ平均值为（13.0±0.02）ng/L，HBHA组平均值为（781.5±4.0）ng/L；结核病患者无刺激组IFN-γ平均值为（12.2±0.4）ng/L，HBHA组平均值为（7876.8±112.4）ng/L，数据对比差异显著，P

3、讨论

据医学前沿报告显示，HBHA是目前具备可靠治疗效果的结核病靶抗原，该物质能偶促使患者机体发生具有保护效果的免疫应答，从而最大程度降低病毒感染体中荷菌数量。对于潜伏期的TB患者HBHA能够诱导其CD8+T淋巴细胞出现特异性反应，从而产生诸如IFN-γ等类似细胞因子，这些细胞因子不仅能够起到细胞毒的作用杀死细胞和病毒，还能够与巨噬细胞产生NO杀死细菌[3]。

本文则主要从HBHA在结核病诊断中的应用价值进行分析，天然的HBHA可以和G肌蛋白进行结合来调节肌动蛋白，位于细胞表面的HBHA通过控制肌动蛋白促使动态细胞骨架发生改变，吞噬细胞便可进入细胞质内顺利繁殖。相比于传统的PPD抗原诊断方式，HBHA诊断方法在操作上更加简便，另外检测耗费的时间更短，检测者也不会出现阳性反应的情况。本次实验中我们将IFN-γ的指标作为诊断的参考物质，结果发现将HBHA抗原刺激后，其分泌量显著升高，与无刺激组数据差异对比异常显著，P

综上所述，在肺结核疾病的诊断时以HBHA抗原进行刺激后，能够使得检测物质分泌量迅速且大量升高，从而诊断提供依据，提升诊断的准确率，值得普及应用。

参考文献：

[1]张念伦.结核分枝杆菌黏附素在结核诊断中的引用分析[J].中外健康文摘， 2012（43）：27-29.

[2]肖佳妮，吴家宝，季萍.抗结核分枝杆菌蛋白IgA在结核诊断中的应用研究[J].全国免疫学学术大会， 2015（05）：67-68.

[3] Diel R， Goletti D， Ferrara G， et al. Interferon-γ release assays for the diagnosis of latent Mycobacterium tuberculosis infection： a systematic review and meta-analysis[J]. European Respiratory Journal， 2011， 37（1）： 88-99.