HPLC测定痛泻宁颗粒中芍药苷的含量

摘要：目的 本实验为了建立痛泻宁颗粒中芍药苷的测定方法。方法 采用高效液相色谱法测定，采用依利特 SinoChrom ODS-BP（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸（15∶85）；体积流量：1.0 ml・min-1；检测波长：230 nm；柱温：25 ℃；进样量10 μl。结果 芍药苷进样量在0.248～2.480 μg呈良好的线性关系（r=0.9998），平均回收率为98.52%，RSD值为1.43%（n=6）。结论 实验表明本研究方法专属性强，灵敏度高，简便、准确、重现性好，可用于痛泻宁颗粒中芍药苷的测定。

关键词：痛泻宁颗粒；芍药苷；高效液相色谱

Abstract：Objective To establish a method for the determination of paeoniflorin in Tongxiening Granule. Methods The content of paeoniflorin was determined by HPLC，Elite SinoChrom ODS-BP column （250 mm × 4.6 mm， 5 μm） was used with acetonitrile-0.1% orthophosphoric acid （15∶85） as the mobile phase at the flow rate of 1.0 mL・min-1. The detection wavelength was set at 230 nm and the column temperature was 25℃. The injection volume was 10 μl. Results The linear range of paeoniflorin was 0.248～2.480 μg （r=0.999 8） with an average recovery of 98.52% （RSD=1.43%， n=6）. Conclusion The established method is specific， sensitive， simple， accurate， reproducible， and suitable for the quality control of paeoniflorin in Tongxiening Granule.

Key words：Tongxiening granule；Paeoniflorin；HPLC

痛泻宁颗粒是由白芍、青皮、白术 、薤白四味药组成的中药复方制剂，具有柔肝缓急、疏肝行气、理脾运湿的功效，用于肝气犯脾所致的腹痛、腹泻、腹胀、腹部不适等症，肠易激综合征（腹泻型）等见上述证候者。方中白芍为君药，具有养血调经，敛阴止汗，柔肝止痛的功效，用于血虚萎黄，月经不调，自汗，盗汗，胁痛，腹痛，四肢挛痛，头痛眩晕[1]，其主要活性成分是芍药苷。现代药理研究表明芍药苷具有镇静、镇痛、抗炎、解痉等药理活性[2]。作者采用HPLC测定了痛泻宁颗粒中芍药苷的含量，为建立该制剂完善的质量标准提供依据。

1仪器与试药

美国Waters 高效液相色谱仪，512 HPLC 泵，486紫外检测器，Chromeleon色谱工作站；Sartorius BT 25S电子天平。

芍药苷对照品（中国药品食品检定研究院，批号110726-201236）；痛泻宁颗粒购自华佗药房，5 g/袋，批号20141001、20141002、20141003；试剂乙腈（色谱纯，Fisher chemical），水为纯化水，其余试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1色谱条件 色谱柱：依利特 SinoChrom ODS-BP（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸（15∶85）；体积流量：1.0 ml・min-1；检测波长：230 nm；柱温：25 ℃；进样量10 μl。

2.2对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品约6.2 mg，置25 ml量瓶中，用甲醇超声溶解并加至刻度，摇匀，精密量取1 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（每1 ml中含芍药苷24.8 μg）。

2.3供试品溶液的制备 取痛泻宁颗粒1.0 g，精密称定，置于50 ml量瓶中，加甲醇40 ml超声提取40min，取出，冷却后用甲醇溶解并加至刻度，摇匀，经0.45 μm滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.4阴性对照溶液的制备 取不含白芍的阴性制剂，按供试品溶液的制备项下方法制成阴性溶液。

2.5专属性试验 取芍药苷对照品溶液、痛泻宁颗粒供试品溶液和阴性对照溶液各10 μl进样测定，结果在上述色谱条件下，阴性对照无干扰，色谱图见图1。

2.6线性关系考察 分别精密吸取0.2480 mg/ml芍药苷对照品储备液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10 μl进样，在选定的色谱条件下进行测定。以芍药苷进样量对峰面积进行回归分析，绘制标准曲线，结果芍药苷在0.248～2.480 μg呈良好的线性关系。回归方程Y=38682X-8792，r=0.999 8。

2.7精密度试验 精密量取同一份供试品溶液，每次10 μl，连续进样6次，芍药苷峰面积积分值RSD为0.75%，表明仪器精密度良好。

2.8稳定性试验 取同一对照品溶液10 μl，按上述色谱条件分别在0、2、4、8、12、24 h进样测定6次，测定芍药苷峰面积，结果RSD 值为1.02%（n=6），表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.9重现性试验 取同一批号的供试品6份，依法制成供试品溶液进行测定，计算芍药苷的质量分数，其RSD 值为1.08%。

2.10加样回收率试验 取痛泻宁颗粒样品6 份，每份约1.0 g，精密称定，分别精密加入芍药苷对照品0.256 mg，照2.3项下操作，制备供试品溶液，按色谱条件测定含量，计算得芍药苷的加样回收率为98.52%，RSD 值为1.43%。

2.11样品测定 取3个批号的痛泻宁颗粒样品各2 份，按2.3制备供试品溶液，分别精密吸取10 μl进样，按色谱条件测定峰面积，用外标法计算痛泻宁颗粒中芍药苷的质量分数，见表1。

3讨论

3.1流动相的选择 参考了较多研究芍药苷含量的文献，有各种流动相，主要包括乙腈-0.1%磷酸（12∶88）、甲醇-水（30∶70）等不同体系[3-6]。通过比较各种流动相对测定的影响，结果采用乙腈-0.1%磷酸（15∶85）作为流动相芍药苷的峰与杂质峰分离较好，分离度大于1.5，样品中芍药苷的色谱峰被有效地分离，其他成分对芍药苷的测定无干扰。

3.2提取条件的选择 通过参考各类文献报道[7-9]对供试品溶液的的制备方法，考察了提取溶剂（甲醇、80%甲醇、60%甲醇、95%乙醇、60%乙醇）和超声提取时间（20、40、60 min），结果显示使用甲醇作为溶剂超声提取40 min得到的芍药苷峰形好，杂质含量低。

参考文献：

[1]中国药典. 一部[S].2010：96.

[2]沈映君.中药药理学[M].上海：科学技术出版社，1995：172.

[3]魏莉本，黄玮.HPLC法测定固经丸中芍药苷的含量[J].淮海医药，2011，29（4）：353-354.

[4]汤明辉，寇俊萍，朱丹妮，等.正交设计-重复实验法优选当归芍药散的提取工艺[J].中国中药杂志，2000，25（11）：668-671.

[5]许先祥，刘亲云.双波长薄层扫描测定赤芍总苷中芍药苷的含量[J].时珍国医药，2001，12（1）：25-26.

[6]张金红，房德敏，虎冲，等.HPLC法测定消肿接骨贴中芍药苷[J].现代药物与临床，2013，2（28）：197-199.

[7]蓝鸣声，陈路，覃成芳，等.五淋散胶囊中栀子苷和芍药苷的HPLC含量测定[J].中国新药杂志，2010，19（14）：1281-1284.

[8]鲁敏，金樟照，龚青.高效液相色谱法测定治伤跌打丸中芍药苷[J].中草药，2007，38（3）：389-390.

[9]廖艳华，韩锋，马莉，等.高效液相色谱法测定栀丹安神颗粒中栀子苷[J].现代药物与临床，2013，2（28）：191-193.编辑/孙杰