直肠癌组织uPA系统和VEGF表达与浸润转移的关系

【摘要】 目的 研究尿激酶型纤溶酶原激活系统uPA,uPAR,PAI-1蛋白及血管内皮生长因子(VEGF)在直肠癌组织中的表达及其与直肠癌癌生物学行为的关系。方法 2005年1月至2006年1月，采用免疫组化S-P法检测67例直肠癌及癌旁组织中uPA,uPAR,PAI-1及VEGF蛋白表达情况，同时对临床病理学资料进行回顾性分析。结果 癌和癌周比较uPA,uPAR,PAI-1及VEGF蛋白阳性表达率明显升高(P

【关键词】 直肠癌；uPA系统；血管内皮生长因子；浸润；转移；免疫组化

Expression of urokinase-type plasminogen activator system and vascular endothelial growth factor in rectal cancer and its correlation with invasion and metastasis

YAN Chun-sheng,ZHAN Xue-lei.Department of Surgery,Tonghe People’s Hospital,Heilongjiang 150900，China

【Abstract】 Objective To detect the expression of urokinase-type plasminogen activator (uPA),uPA receptor (uPAR),plasminogen activator inhibitor type 1 (PAI-1) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in rectal cancer (RC) and to reveal their correlation to the major clinicopathological characteristics including tumor invasion and metastasis.Methods Expression of uPA,uPAR,PAI-1 and VEGF was examined in the tissue sections from 67 cases of RC using streptoavidin-biotin-peroxidase immunohistochemistry method.Results The expression of uPA,uPAR,PAI-1 and VEGF was mainly located in the cytoplasm of RC cells.The expression of uPA,uPAR,PAI-1 and VEGF in RC was significantly higher than in the cancer-adjacent tissue (P

【Key words】 Urokinase-type activator system;Vascular endothelial growth factor； Rectal cancer；Invasion；Metastasis；Iimmunohistochemistry

尿激酶型纤溶酶原激活剂(urokinase-type plasminogen activator，uPA)是一种蛋白水解酶，其介导的纤维蛋白降解作用能破坏细胞外基质和基底膜，在肿瘤浸润转移中起重要作用［1-2］。肿瘤诱导的血管生成反应亦与其生物学行为密切相关，血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)被认为是作用最强、特异性最高的血管生成调控因子［3］。笔者采用免疫组织化学方法检测67例直肠癌组织中uPA,uPAR,PAI-1及VEGF的表达，探讨其与直肠癌生物学行为的关系。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本院2005年1月至2008年1月直肠癌手术切除标本67例，术前未接受过抗肿瘤治疗。男54例,女13例,年龄34~78岁。所有病例均经病理诊断证实。其中溃疡型37例(55.2%),肿块型5例(7.5%),浸润型25例(37.3%)；腺瘤癌变4例(5.9%)，高分化腺癌20例(29.9%),中分化腺癌26例(38.8%)，粘液腺癌14例(20.9%)，印戒细胞癌3例(4.5%)。Dukes A期3例(4.5%)，B期55例(82.1%)，C期8例(11.9%)，D期1例(1.5%)。以癌旁组织为对照。所有标本组织经40 g/L多聚甲醛固定，常规石蜡包埋。4 μm厚连续切片。

1.2 方法 采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(S-P)方法。兔抗人uPA蛋白多克隆抗体(BA0405)、兔抗人uPAR蛋白多克隆抗体(BA1368)、兔抗人PAI-1蛋白多克隆抗体(BA1334)均购自军事医学科学院，工作浓度分别为1∶50，1∶100，1∶100。VEGF多克隆抗体、免疫组化S-P试剂盒均购自福州迈新生物技术公司，VEGF工作浓度为1∶50。每批染色均用已知阳性切片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照.染色结果判断分别按阳性细胞百分数及染色强度计分。阳性细胞数为0，计0分；1%~25%计1分；26%~50%计2分；>50%计3分。染色阴性计0分；淡黄色计1分；棕黄色计2分；棕褐色计3分。两种积分相加，积分为0~2分，表示阴性(-)；积分为3~4分，表示阳性(+)；积分为5~6分，表示阳性(++)。+、++均视为阳性表达。

2 结果

2.1 uPA，uPAR，PAI-1蛋白的表达 uPA，uPAR蛋白的阳性产物主要位于直肠癌细胞的胞质中，强度深浅不一。肿瘤内少量成纤维细胞、血管内皮细胞可见较弱的阳性表达。PAI-1蛋白的阳性产物也主要定位于直肠癌细胞的胞质中，但与分化程度有关：在分化高的直肠癌组织，肿瘤细胞呈弥漫性胞质着色；随着分化程度降低，染色有加深趋势，部分胞质中出现棕褐色颗粒。上述三种蛋白在癌旁组织都有不同程度的阳性表达。正常直肠黏膜上皮多呈阴性表达。VEGF蛋白阳性信号主要定位于癌细胞胞质，其表达呈明显异质性，在低分化癌和印戒细胞癌中的表达多呈强阳性，一些血管内皮细胞也可见弱的VEGF表达。在癌旁组织中，大部分腺上皮呈阴性表达。直肠癌组织中uPA，uPAR，PAI-1，VEGF蛋白的阳性表达率分别为68.7%，68.7%，70.1%和76.2%，明显高于他们在癌旁组织中的阳性表达，分别为28.4%，31.3%，40.3%和20.9%，差异具有显著性意义(P

2.2 uPA，uPAR，PAI-1，VEGF蛋白表达和临床病理因素的关系 uPA，uPAR，PAI-1，VEGF蛋白在侵及浆膜组中的阳性表达率明显高于未及浆膜组，差异具有显著性意义(表1)。uPA，uPAR蛋白在淋巴结转移组中的阳性率明显高于无淋巴结转移组，差异具有显著性意义。PAI-1蛋白在低分化组中的阳性率明显低于中分化和高分化组，差异有显著性(P

2.3 uPA，uPAR，PAI-1与VEGF蛋白表达和淋巴结转移的相关性 直肠癌组织中uPA蛋白表达与VEGF蛋白表达显著正相关(r=0.300,P=0.014

3 讨论

uPA介导的纤溶酶降解系统在肿瘤浸润转移过程中发挥重要作用。uPA是一种丝氨酸蛋白酶，由多种肿瘤细胞或其他细胞分泌，通过与细胞膜上的特异性受体uPAR结合发挥作用，激活纤溶酶原成为纤溶酶。另外，uPA还激活潜在活性的胶原酶，与纤溶酶一起均促使细胞外基质(包括层粘连蛋白、纤维连接蛋白、蛋白多糖和Ⅳ型胶原等)和血管基膜的降解，最终导致肿瘤细胞的浸润和转移［4］。uPA的活性被他的特异性抑制剂PAI-1所调控。本研究的结果显示uPA，uPAR，PAI-1蛋白主要定位于直肠癌组织中的癌细胞胞质，肿瘤内少量成纤维细胞、血管内皮细胞可见较弱的uPA，uPAR蛋白阳性表达。uPA，uPAR，PAI-1蛋白在直肠癌组织中的表达较癌旁组织明显增高(P

VEGF是一类作用最强、特异性最高的可溶性血管生成促进因子，他与内皮细胞上的两个特殊受体flt和flk(kDk)结合，刺激内皮细胞增生，在肿瘤血管发生中起着重要作用。在肿瘤血管的生成过程中，肿瘤也完成了扩展、侵袭和转移，故VEGF与肿瘤的生长、侵袭和转移等特性密切相关［10-11］。本结果表明，VEGF蛋白主要表达于直肠癌细胞的胞质中，一些血管内皮细胞也可见弱表达。VEGF在直肠癌组织中的阳性表达(76.1%)明显高于癌旁组织(20.9%)(P

参 考 文 献

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