结核酶联免疫斑点试验、结核分枝杆菌DNA测定和痰涂片检测在肺结核诊断中的比较研究

[摘要] 目的 比较结核酶联免疫斑点试验（T-SPOT.TB）、结核分枝杆菌DNA（TB-DNA）测定和痰涂片检测在肺结核诊断中的意义。 方法 选取2010年 5月～2013年1月在本院做结核检测的患者，其中确诊肺结核的患者95例进行T-SPOT.TB、TB-DNA测定和痰涂片检测。 结果 T-SPOT.TB、痰涂片和TB-DNA测定的敏感性分别为92.22%、24.44%、67.78%，痰涂片的敏感性最低，T-SPOT.TB最高（P

[关键词] 结核酶联免疫斑点试验；痰涂片；结核分枝杆菌DNA测定；肺结核

[中图分类号] R521 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）12（a）-0122-02

结核病（tuberculosis，TB）被列为国内重大传染病之一，是目前传染病中的头号杀手，是严重危害人类健康的呼吸道传染病，同时也是单因素致死率最高的传染性疾病[1-2]。近年来，随着人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）感染、艾滋病的流行、移民增加、人口流动性增大以及结核菌耐药性的加重，TB的发病率有上升趋势。中国是TB高负担国家之一，2010年第五次全国结核病流行病学调查显示，活动性TB患者459/10万，菌阳患者66/10万，提示TB的诊治仍然是国家TB控制策略中的重要措施。目前临床诊断TB的金标准只有结核菌培养，但其缺乏敏感性，易漏诊。本研究选取 2010年 5月～2013年1月在本院做结核检测的患者，采用结核酶联免疫斑点试验（T-SPOT.TB）、结核分枝杆菌DNA（TB-DNA）测定和痰涂片方法分别检测，探讨其诊断肺结核的应用价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2010年 5月～2013年1月在本院做结核检测的患者，其中确诊肺结核的患者95例，男60例，女35例，年龄25～70岁，平均 （50.17±11.41）岁。

1.2 诊断标准

以肺结核诊断标准（WS288-2008）为标准，结核杆菌培养阳性（金标准）或痰检抗酸杆菌阳性；肺外结核以症状、体征、涂片抗酸杆菌和结核分支杆菌培养阳性为标准[3]。

1.3 方法

1.3.1 T-SPOT.TB试验 采集患者外周血，应用上海复兴长征医学科学有限公司提供的结核感染T细胞斑点诊断试剂盒，按试剂盒说明书判读检测结果。

1.3.2 痰涂片检测 清晨收集脓性痰，进行抗酸杆菌染色，在显微镜下观察染色结果，以每100个视野抗酸杆菌≥3个为阳性。

1.3.3 TB-DNA的检测 采用实时荧光定量PCR技术，应用上海克隆生物高技术有限公司TB-DNA荧光PCR检测试剂盒，操作和诊断标准参照试剂盒说明书进行。

1.4 统计学方法

数据采用SPSS 15.0软件进行统计分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，以P

2 结果

T-SPOT.TB、痰涂片和TB-DNA的阳性率分别为87.37%、23.16%、64.12%，敏感性分别为92.22%、24.44%、67.78%，痰涂片敏感性最低，T-SPOT.TB最高（P

3 讨论

TB是一个全球性公共卫生问题，近年来TB疫情呈明显上升趋势。现在中国成为全球 22 个TB高负担国家之一，成为仅次于印度的结核大国。对于感染结核的患者进行早期诊断和治疗是改善患者预后的关键，也是控制结核播散的重要环节[4]。早期诊断对于控制TB的快速蔓延十分重要，但初期的检测困难。检测结核的方法很多，包括结核菌素皮肤试验、结核菌培养、结核菌素纯蛋白衍化物（PPD）实验、痰涂片和TB-DNA测定、T-SPOT.TB检测等，但皮试假阳性和假阴性非常多，检测不准确。结核菌培养则有周期长，假阴、假阳性比例高，难于诊断肺外结核等缺点；PPD实验受免疫力及交叉反应的影响，敏感性和特异性较低[5-6]。本研究采用痰涂片、TB-DNA测定、T-SPOT.TB方法检测肺结核患者，以期为临床检测提供依据。

痰涂片抗酸染色虽然操作简单、诊断快速、费用低廉，但检测结果受技术人员水平的影响，检测率低，且无法对肺外结核及不咯痰的儿童肺结核作出诊断。TB-DNA测定具有快速检测、高准确率等优点，但其标本来源（如浆膜腔液体、病灶分泌物等）难以获取[7-8]；T-SPOT.TB则是利用ELISPOT 法检测特异性T 细胞来诊断结核的一种新方法，它是利用结核杆菌感染者外周血单核细胞（PBMC）中存在结核感染特异性 T 细胞，这些 T 细胞在受到致病性结核杆菌特异抗原刺激后分泌IFN-γ而设计的 T 细胞免疫斑点试验，其特异性及灵敏度高。

本研究结果显示，T-SPOT.TB、痰涂片和TB-DNA敏感性分别为92.22%、24.44%、67.78%，痰涂片敏感性最低，T-SPOT.TB最高，说明T-SPOT.TB检测结核具有非常高的敏感性。目前，随着T-SPOT.TB检测技术的不断发展和完善，其可以减少结核的漏检率，是一种有效的检查TB的手段[9]。

综上所述，T-SPOT.TB 较较痰涂片和TB-DNA检测对TB的诊断有高度的敏感性，值得临床推广。

[参考文献]

[1] 中华医学会结核病学分会.肺结核诊断和治疗指南[J].中华结核和呼吸杂志，2001，24（2）：71-74.

[2] 戴骏，徐玉婵，朱文英.TB-DNA、TB-DOT、BCG-PPD检测在痰菌阴性肺结核诊断中的价值[J].山东医药，2009，49（50）：50.

[3] 李明武，朱惠琼，刘永莉，等.T-SPOT.TB、TB-DNA、PPD、TB-DOT/TB-CK 检测在结核病诊断中的临床价值[J].昆明医学院学报，2011， （8）：78-80.

[4] 祁明浩，沈凌，叶健，等.γ干扰素释放分析 T-SPOT.TB 在成年人肺结核诊断中的临床价值[J].疾病监测，2013，28（2）：115-117.

[5] 邹盛华，张丽水，黄明翔，等.结核感染T细胞斑点实验临床检测研究[J].中国防痨杂志，2009，31（9）：539.

[6] Hernández J，Jaramillo A，Mejía GI，et al.Assessment of mycobacteremia detection as a complementary method for the diagnosis of tuberculosis in HIV-infected patients[J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis，2010，29（11）：1435-1441.

[7] 卢联合，李鑫，蒋荣猛，等.艾滋病合并结核分枝轩菌感染综合诊断技术的应用研究[J].山东医药，2011，51 （29）：70-72.

[8] 李红，唐神结，史祥，等.全血 γ-干扰素释放试验对涂阴肺结核诊断价值的研究[J].中国临床医师杂志（电子版），2012，6（16）：4894-4897.

[9] 彭春仙，郑晓，钱峰，等. T细胞斑点试验技术在结核病诊断方面的应用[J].中国卫生检验杂志，2011，21（4）：18-20.

（收稿日期：2013-05-20 本文编辑：许俊琴）