氨咖愈敏溶液中对乙酰氨基酚、愈创甘油醚、咖啡因、马来酸氯苯那敏含量测定方法的研究

[摘要] 目的 研究分析氨咖愈敏溶液含量测定方法，优化色谱分离条件。方法 采用C18柱，流动相为磷酸二氢铵溶液-乙腈-甲醇（70：10：20），检测波长为271 nm，测定对乙酰氨基酚、愈创甘油醚、无水咖啡因含量；采用C18柱，流动相为磷酸二氢铵缓冲液（0.1%三乙胺）-乙腈（73：27） ，检测波长为221 nm，测定马来酸氯苯那敏含量。结果 对乙酰氨基酚、愈创甘油醚、咖啡因分别在0.030 51～0.3051 mg/ml（r=1）、0.009 748～0.097 48 mg/ml（r=1）、0.003 838～0.038 38 mg/ml（r=1）与峰面积有良好的线性关系，平均回收率分别为101.5%、100.6%、100.7%（n=9），马来酸氯苯那敏在0.003 968～0.039 68 mg/ml（r=1）与峰面积有良好的线性关系，平均回收率为100.1%（n=9）。结论 该方法操作简便、准确、重复性好，可用于氨咖愈敏溶液的质量控制。

[关键词] 氨咖愈敏溶液；对乙酰氨基酚；愈创甘油醚；咖啡因；马来酸氯苯那敏；含量测定；高效液相色谱法

[中图分类号] R92 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）12（a）-0013-04

氨咖愈敏溶液由对乙酰氨基酚、无水咖啡因、愈创木酚甘油醚、马来来酸氯苯那敏及适量辅料及水制成，用于缓解感冒引起的发热、头痛、咽痛等症状。现执行标准为《国家药品标准》化学药品地方标准上升国家标准第八册，标准编号为WS-10001-（HD-0758）-2002，国外药典均未见收载[1-2]。现行质量标准中的含量测定方法为HPLC法，色谱系统较复杂并使用了离子对试剂，且马来酸氯苯那敏需用氯仿进行提取。因此本研究对原标准含量测定方法进行考察和研究，优化色谱分离条件，改进含量测定方法。

1材料与方法

1.1 仪器与试剂

1.1.1 色谱仪 美国Waters Alliance液相色谱仪，包括Waters 2695分离单元，Waters 2996二极管阵列检测器，Empower色谱工作站。

1.1.2试剂 对乙酰氨基酚对照品（批号：100018-200408），咖啡因对照品（批号：171215-200507），愈创甘油醚对照品（批号：100528-200401），马来酸氯苯那敏对照品（批号：100047-200606），均由中国药品生物制品检定所提供；甲醇、乙腈为色谱纯；其他试剂均为分析；氨咖愈敏溶液来自3个生产厂家的8批样品（A：贵州泛德制药有限公司，批号10030601、10010602、10110603；B：北京九龙制药有限公司，批号101111、101112、101113；C：杭州娃哈哈医药保健品有限公司，批号20100501、20100702）。

1.2 对乙酰氨基酚、咖啡因、愈创甘油醚的含量测定方法

1.2.1 色谱条件 色谱柱：CNW C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），S/N：MD1A01，安谱公司产品，以磷酸二氢铵溶液（取磷酸二氢铵11.5 g，加水适量使溶解，加入磷酸1 ml，加水稀释到1000 ml）-乙腈-甲醇（70∶10∶20）为流动相；检测波长为271 nm，进样量：20 μl，流速：1.0 ml/min，柱温：30℃。

1.2.2 混合对照品溶液 取对乙酚氨基酚对照品、咖啡因对照品和愈创甘油醚对照品适量，精密称定，加水制成每1毫升含对乙酚氨基酚1.2 mg、咖啡因0.18 mg、愈创甘油醚0.375 mg的混合对照品溶液。

1.2.3 供试品溶液 精密量取本品10 ml，置100 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取10 ml，置100 ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，续滤液作为供试品溶液。

1.2.4 辅料溶液的制备 取处方辅料用量比例，按1.2.2的制备方法，配制三家药厂的空白辅料溶液。

1.2.5 检测波长的选择 对乙酰氨基酚的最大吸收波长近199 nm和243 nm，愈创甘油醚在194、221和271 nm附近有最大吸收，咖啡因在202、271 nm附近有最大吸收波长，考虑到愈创甘油醚和咖啡因在药品处方中占的比例较少，因此选用愈创甘油醚、咖啡因吸收值均较大、干扰较小的波长271 nm作为3种成分同时测定的检测波长[3]。

1.3马来酸氯苯那敏含量测定方法

1.3.1 色谱条件 色谱柱：CNW C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），S/N：MD1A01，安谱公司产品；以磷酸二氢铵缓冲液（取磷酸二氢铵11.5 g，加水适量使溶解，加入磷酸0.5 ml和三乙胺溶液1 ml，加水稀释到1000 ml）-乙腈（73∶27）为流动相；检测波长为221 nm，进样量：20 μl 流速：1.0 ml/min，柱温：30℃。

1.3.2 对照品溶液的制备 取马来酸氯苯那敏对照品适量，精密称定，加水成每制成每1毫升中含马来酸氯苯那敏0.012 mg对照品溶液，即得。

1.3.3 供试品溶液的制备 精密量取本品5 ml，置50 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过。取续滤液作为供试品溶液。

1.3.4检测波长的选择 马来酸氯苯那敏在221 nm和261 nm波长有最大吸收，其中221 nm的响应值较大，由于本品制备的供试品溶液待测成分较低，故以221 nm作为检测波长进行考察[4]。

2 结果

2.1对乙酰氨基酚、咖啡因、愈创甘油醚的含量测定结果

2.1.1专属性实验 分别取对照品溶液、供试品溶液和辅料溶液各20 μl进行测定。结果表明，在此试验条件下，对乙酰氨基酚、愈创甘油醚和无水咖啡的峰形良好，辅料对含量测定无干扰（图1）。

A

B

C

D

E

图1 对乙酰氨基酚、愈创甘油醚和无水咖啡因含量测定辅料干扰

试验色谱图

A.对照品溶液；B.供试品；C.C厂辅料溶液；D.A厂辅料溶液；E.B厂辅料溶液

2.1.2 线性关系考察 精密量取混合对照品溶液适量，分别加水配制成含对乙酰氨基酚0.03、0.06、0.12、0.18、0.24、0.3 mg/ml，愈创甘油醚0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10 mg/ml，咖啡因0.04、0.08、0.015、0.013、0.030、0.040 mg/ml 的溶液，按1.2.1色谱条件进行测定，以对照品的浓度（C）（mg/ml）为横坐标，测得的峰面积（A）为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：对乙酰氨基酚线性方程A=2×107 C -29 061，r=1；愈创甘油醚线性方程A=1×107 C-11 654，r=1；咖啡因线性方程A=6×107 C -17 833，r=1。结果表明，对乙酰氨基酚的浓度在0.03 051～ 0.3 051 mg/ml范围内与峰面积线性关系良好，愈创甘油醚的浓度在0.009 748～0.097 48 mg/ml范围内与峰面积线性关系良好，咖啡因的浓度在0.003 838～0.03 838 mg/ml范围内与峰面积线性关系良好。

2.1.3 精密度试验 取供试品溶液重复测定6次，对乙酰氨基酚的平均含量为97.54%，RSD为0.11%（n=6）；无水咖啡因平均含量为95.41%，RSD为0.15%（n=6）；愈创甘油醚平均含量为101.1%，RSD为0.16%（n=6）。该方法精密度符合要求。

2.1.4 稳定性试验 取同一份供试品溶液，按1.2.1色谱条件，分别在0、2、4、12、15、24 h进样测定。结果测得的对乙酰氨基酚、愈创甘油醚、咖啡因面积的RSD分别为1.5%、0.97%、1.5%，表明供试品溶液自制备后24 h内结果稳定。

2.1.5 重复性试验 取同一批样品 （A厂家，批号10030601）6份，按1.2.1条件测定。结果对乙酰氨基酚的平均含量为97.22%，RSD为0.63%；无水咖啡因平均含量为95.01%，RSD为0.72%；愈创甘油醚平均含量为101.0%，RSD为0.50%，表明重复性良好。

2.1.6 耐用性试验 取取同一份供试品溶液在不同的仪器、不同色谱柱：安谱公司CNW C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），安谱公司CNW C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），美国热电公司Thermo AQ柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）上试验，结果所得色谱图峰形对称，测定结果基本一致。表明本方法耐用性好。

2.1.7 回收率试验 取同一批（C厂家批号20100702）已知含量（1.894 mg/ml）的供试品9份，每份0.5 ml，置于100 ml量瓶中，分别精密加入混合对照品溶液3、5、7 ml，加水稀释至刻度，摇匀，取续滤液作为回收率测定供试品溶液；取上述溶液，按1.2.1条件测定，测得对乙酰氨基酚、愈创甘油醚、咖啡因平均回收率分别为101.5%、100.6%、100.7%，RSD分别为1.4%、1.4%、1.1%（n=9）（表1）。

2.1.8样品测定 取3个厂家的8批样品，精密量取10 ml，置100 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，续滤液作为供试品溶液。按1.2.1条件测定，结果见表2。

2.2马来酸氯苯那敏含量测定结果

2.2.1专属性实验 分别取对照品溶液、供试品溶液和辅料溶液各20 μl进行测定。结果表明，在此试验条件下，对马来酸氯苯那敏的峰形良好，辅料对含量测定无干扰（图2）。

A

B

C

D

E

图2 马来酸氯苯那敏含量测定辅料干扰试验图

A.对照品溶液；B.供试品；C.C厂辅料溶液；D.A厂辅料溶液；E.B厂辅料溶液

2.2.2线性关系考察 精密量取马来酸氯苯那敏对照品溶液适量，分别加水配制成0.003、0.006、0.012、0.018、0.021、0.03 mg/ml的溶液，按1.3.1色谱条件进行测定，以对照品浓度（C）（mg/ml）为横坐标，测得的峰面积（A）为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：A=3.5×107C -16 428，r=1；马来酸氯苯那敏的浓度在0.003 968～0.03 968 mg/ml范围内与峰面积线性关系良好。

2.2.3精密度试验 取本品供试品，重复测定6次，马来酸氯苯那敏的平均含量为99.99%，RSD为0.75%（n=6），结果表明仪器精密性良好。

2.2.4稳定性试验 取同一份供试品溶液，按1.3.1色谱条件，分别在0、3、6、12、24 h分别进样测定，结果测得马来酸氯苯那敏的RSD为1.3%，表明供试品溶液自制备后24 h内基本稳定。

2.2.5重复性试验 取供试品，制备供试品溶液6份，按1.3.1条件测定。结果马来酸氯苯那敏的平均含量为102.4%，RSD为0.97%，表明重复性良好。

2.2.6 回收率试验 取同一批（C厂家，批号20100702）已知含量（0.2880 mg/ml）的供试品9份，每份2.5 ml，分别置50 ml容量瓶中，分别精密量取1.3.2项下马来酸氯苯那敏对照品溶液3、5、7 ml各3份于供试品量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为回收率测定供试品溶液；取上述溶液，按1.3.1条件测定，测得马来酸氯苯那敏平均回收率为100.1%，RSD为1.4%（n=9）（表3）。

表3 氨咖愈敏溶液中马来酸氯苯那敏回收率测定结果

2.2.7样品测定 取3个厂家8批样品，精密量取5 ml，置50 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。按1.3.1条件测定，结果见表4。

表4 氨咖愈敏溶液中马来酸氯苯那敏含量测定结果（n=2）

3 讨论

现行质量标准中的含量测定方法为HPLC法，在一个色谱条件下同时测定对乙酰氨基酚、无水咖啡因、愈创甘油醚3个成分；在另一个色谱条件测定马来酸氯苯那敏。两系统中都使用了离子对试剂对色谱柱伤害较大，影响色谱柱寿命，马来酸氯苯那敏需用氯仿进行提取，毒性大。因此对原含量测定方法进行了考察和修订[5-6]。

马来酸氯苯那敏在处方中量最小，与处方中的其他成分有十几倍到上百倍的差别，且辅料脱氢醋酸钠有干扰，故四个成分难于在同一色谱条件下测定，现仍采用两个色谱系统，对流动相进行优化。所用方法操作简便，准确性、重复性好[5-8]。

[参考文献]

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[2] 氨咖愈敏溶液.WS-10001-（HD-0758）-2002[S].北京.

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[5] 谢华，傅萍，张悦杨，等.HPLC法测定复方氨酚烷氨片中对乙酰氨基酚、咖啡因、马来酸氯苯那敏[J].华西药学杂志，2012，27（3）：307-308.

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[8] 钱忠义，葛薇薇.高效液相色谱法测定复方对乙酰氨基酚片的含量和溶出度[J].药物分析杂志，2012，32（1）：161-164.

（收稿日期：2013-08-07 本文编辑：魏玉坡）