尼古丁对小鼠骨髓细胞微核影响的实验研究

【摘要】目的：探讨香烟成分尼古丁对骨髓细胞微核产生的影响。方法：建立小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验模型，将小鼠随机分为尼古丁（低、中、高剂量）实验组、顺铂对照组、乙醇对照组、生理盐水对照组，每组10只，采用腹腔注射给药，油镜下检测骨髓中嗜多红染细胞（PCE）微核情况及绘制量效关系曲线。结果：尼古丁低剂量组和乙醇对照组的微核发生率分别为（1.90±0.88）%和（0.70±0.22）%，两组间有显著差异（P

【关键词】尼古丁；骨髓；嗜多染红细胞；微核；细胞毒性

【中图分类号】R730.55 【文献标识码】A 【文章编号】1008-6455（2011）12-0118-02

Affected on bone marrow erythrocyte micronucleus of mice by Nicotine

Shi Qiang Zheng Yongbin1* Sui Fengying2 et al.

【Abstract】Objective:To investigate the impacts of Nicotine on micronucleus in mouse bone marrow. Methods:Micronucleus test in polychromatic erythrocytes of bone marrow in mice was performed. The mice was divided into six group, there was solution group with injection of nicotine by low doses, middle doses and high doses, and control group with injection of CDDP, ethanol and saline. Ten mice in each group, the drugs were injected into abdominal. Observed micronucleus cells in bone marrow cells under Oil immersion, and drawing quantity-effect relationship curve. Results:There was apparent increasing of micronucleus frequency in nicotine low-doses solution group comparing with ethanol control group （P

【Key words】Nicotine; bone marrow; polychromatic erythrocytes; Micronucleus; Cytotoxi

尼古丁是香烟及烟雾中的主要毒物成分，常温下为无色或浅黄色油状液体，极易溶于酒精〖1〗。在烟叶尼古丁含量最高，唯有其会产生耐受、依赖、敏化以及戒断症状〖2〗。目前关于香烟成分尼古丁人体的危害主要从宏观的角度进行阐述，缺乏微观水平的毒性学证据。本实验拟通过尼古丁对小鼠骨髓嗜多染红细胞（Polychromatic erythrocytes，PCE）产生微核的影响进行研究，以期提供尼古丁对人体危害的细胞毒理学证据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物:健康雄性昆明种小鼠60只，体重25～35 g。由嘉兴学院医学实验中心提供。动物饲养室条件：室温（23 ℃±2 ℃），湿度50～60%，采用12 h明暗光照，定时通风。所有动物以标准颗粒饲料饲养，自由饮食水。

1.1.2 实验试剂:由市场购得某牌过滤嘴香烟，烤烟型，烟气烟碱量1.12 mg、焦油量17 mg。顺铂（CDDP）购自上海洽姆仪器科技有限公司，纯度>95%，临用前用生理盐水溶解。

1.2 方法

1.2.1 香烟尼古丁溶液制备:取香烟3支，剥出烟丝并全部投入索式提取器〖3〗的套筒中，在75 ml 95%的乙醇中连续加热虹吸2.5 h，虹吸6次后停止。分别记录第一次及最后一次的虹吸时间。虹吸结束后把装置改为蒸馏装置，记录蒸馏的时间，馏头77 ℃，蒸出大部分乙醇，再用25%乙醇75 ml溶解残留物。

1.2.2 动物分组及处理:按照成人重度吸烟者吸烟20支/天计算，小鼠每天吸0.01支，再根据染毒所配制溶液的浓度3支/75 ml，0.25 ml稀释液即含0. 01支香烟〖4〗。将小鼠随机分为6组，每组10只。尼古丁低剂量组：小鼠腹腔注射尼古丁溶液（稀释3倍的原溶液）0.25 ml；尼古丁中剂量组：小鼠腹腔注射尼古丁溶液（稀释2倍的原溶液）0.25 ml；尼古丁高剂量组：小鼠腹腔注射尼古丁溶液（稀释1倍的原溶液）0.25 ml；顺铂对照组：小鼠腹腔注射顺铂（0.25 mg/kg）；乙醇对照组：小鼠腹腔注射等量的25%乙醇；生理盐水对照组：小鼠注射等量生理盐水。采用两次染毒法：处死前30 h以及处死前6 h分别染毒1次。最后一次染毒后6 h，将小鼠以颈椎脱臼法处死，取骨髓，制备骨髓切片，常规染色。每只动物油镜下观察1000个嗜多染红细胞（PCE），记录含有微核的PCE细胞数，并计算骨髓嗜多染红细胞微核率（MNPCE），以百分率表示。

1.2.3 观测指标:电子显微镜油镜下观测骨髓中嗜多染红细胞（PCE）微核形成情况。PCE呈灰蓝色、成熟红细胞呈橘黄色〖5〗。观察嗜色性与核质一致的圆形或椭圆形的微小核，其独立于主核，为主核1/20～1/3大小〖6,7〗。

1.2.4 统计分析:应用SPSS 13. 0统计软件进行卡方检验进行统计学分析处理。

2 结果

2.1 小鼠骨髓PCE微核形成: 骨髓涂片油镜示：细胞密度适中，可观察到多个嗜多染红细胞（PCE），有1个微核的多见，出现2个及2个以上微核的偶见（图1）。

2.2 尼古丁量效关系:尼古丁低剂量组和乙醇对照组的微核发生率分别为（1.90±0.88）%和（0.70±0.20）%，两组间有显著差异（P

表1 各组骨髓中红细胞微核的出现率（%）

注：*P

3 讨论

尼古丁是吸烟成瘾的主要物质，具有兴奋中枢与提神的作用〖7,8〗。进入人体后，会产生四肢末梢血管收缩、呼吸心跳加快、血压升高、精神状况改变，同时也是造成高血压、中风等心血管性疾病的主要帮凶〖9〗。一旦长期停止吸烟，就会出现烦躁焦虑、注意力分散、情绪低落等戒断症状〖10〗。微核实验就是利用细胞生物学方法来检测细胞遗传损伤程度的一种遗传毒物的方法〖11〗，微核的形成作为染色体损伤、基因不稳定性甚至患癌风险的一种生物标志物〖12〗也已被广泛的应用。本研究采用香烟毒性成分尼古丁进行体内骨髓细胞染毒，结果尼古丁低剂量组骨髓细胞微核率与乙醇对照组相比有明显的差异（P

除了尼古丁，香烟中包含大约2500种化学成分，然而香烟烟雾中包含大约超过4000种化学物质，其中一些化学物质由于机体的影响作用，甚至有助于尼古丁成瘾，许多研究也都证明了其致人成瘾的作用〖8〗。而本实验通过微核照片以及可供参考的实验数据，提供尼古丁在微观水平的毒理学证据。但是，针对于本实验尼古丁是由香烟水溶液提取而来，溶液中其它杂质是否具有类似的毒性作用将进一步实验研究证实。

参考文献

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