蒙药长松萝的化学成分研究

[摘要] 目的：研究长松萝的化学成分。方法：用正相硅胶、Sephadex LH-20、制备高效液相色谱等方法进行分离纯化， 根据理化性质、光谱数据以及结合文献报道的波谱数据鉴定化合物的结构。结果：分离得到10个化合物， 分别鉴定为（4aR，9bS）-2，6-二乙酰基-3，4a，7，9-四羟基-8，9b-二甲基-1-氧代-1，4，4a，9b-四氢二苯骈呋喃酮（1）， （+）-松萝酸（2），苔黑酚（3），18R-hydroxydihydroalloprotolichensterinic acid（4），3β-羟基-5α，8α-桥二氧麦角甾-6，22-二烯（5）， 扁枝衣酸乙酯（6），阿拉伯糖醇（7）， 芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷（8）， 3-羟基-5-O-甲基-2-甲基苯甲酸（9），木栓酮（10）。结论：化合物1为新化合物，化合物8为首次从松萝属地衣分离得到，化合物3，4，7为首次从长松萝中分离得到。

[关键词] 长松萝；化学成分；结构鉴定

长松萝Usnea longissima Ach.系枝状地衣类（藻类和真菌的复合体）。产于广西、内蒙古、吉林、黑龙江、四川、云南、、陕西、甘肃、台湾及新疆；全球主要分布于北半球[1]。其干燥枝状体为蒙医、藏医传统用药，蒙药名为“斯日古德”，味苦。功能清热，解毒。 主治毒症，脑刺痛，腹鸣，泄泻，肠热，筋健疼痛，肺脓疡[2]。长松萝中含有松萝酸以及取代苯酚类、缩酚类、三萜类、甾醇类、脂肪酸类等成分[3-7]。松萝酸[8]为苯骈呋喃衍生物，只存在于地衣类中，有（+）和（-）对映体，具有较强的抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗辐射、防腐等作用，目前已被应用于医药、化妆品、保健品等领域，作为纯天然物质添加牙膏、防晒油等产品中。本研究对长松萝进行化学成分研究，分离鉴定了10个化合物。其中化合物3，4，7为首次从长松萝分离得到，化合物8是黄酮苷类，首次从该属地衣类分离鉴定，化合物1为新化合物。

1 材料

Unity-400超导核磁共振波谱仪（美国），EP4-004 离子阱质谱仪，Agilent1100高效液相色谱仪，Venusil MP-C18（10 mm×250 mm，10 μm），Jasco P-1020全自动旋光仪（0.1，0.5，1，4 mL样品池），WRX-4显微熔点测定仪（上海易测仪器设备有限公司），薄层色谱柱色谱硅胶（青岛海洋化工厂），Sephadex LH-20 （瑞典Pharmacia公司），D101大孔树脂（天津欧瑞生物科技有限公司），色谱纯甲醇（山东禹王实业有限公司化工分公司），其他所用试剂均为分析纯。

长松萝采集于内蒙古大兴安岭，由中国科学院昆明植物研究所王立松研究员鉴定为长松萝U. longissima的地衣枝状体。凭证标本（No. HMJAU24859）存放于吉林农业大学菌物研究所标本馆。

2 提取分离

长松萝干燥枝状体2.0 kg，粉碎后加质量6倍量95%乙醇，回流提取3次（分别2，1，1 h），合并提取液，减压浓缩得浸膏636 g，浸膏加适量水成混悬液，依次以等体积石油醚、乙酸乙酯、正丁醇各萃取3次，萃取溶液分别减压浓缩得到浸膏，得石油醚萃取物72 g，乙酸乙酯萃取物241.6 g和正丁醇萃取物35 g。石油醚萃取物，经正相硅胶柱色谱（200～300目），环己烷-乙酸乙酯梯度（100∶1～1∶100）洗脱得到5个组分（Fr.1～5），Fr.3（98 mg）经Sephadex LH-20柱，用二氯甲烷-甲醇（2∶3）洗脱得到化合物5（20 mg），Fr.4和Fr.5中析出的黄绿色针状结晶反复重结晶得到化合物2（70 mg）。取乙酸乙酯萃取物103.6 g，用正相硅胶色谱柱（200～300目），以二氯甲烷-甲醇（100∶1，50∶1，25∶1，10∶1）梯度洗脱得到11个组分（Fr.6-16），Fr.8过滤经Sephadex LH-20柱，以二氯甲烷-甲醇（2∶3）洗脱，并反复重结晶得到化合物10（18 mg），Fr.12过滤，经Sephadex LH-20柱，以二氯甲烷-甲醇（2∶3）洗脱，并反复重结晶得到化合物3（35 mg），4（10 mg）。Fr.9（188 mg）过滤，经制备液相色谱，用以甲醇-水（60∶40）为流动相，反复纯化，得到化合物1（26 mg），6（28 mg），9（12 mg）。正丁醇萃取物，进行大孔吸附树脂色谱分离，用20%，50%，75%，95%乙醇梯度洗脱，分别得到相应的组分。95%乙醇洗脱得到组分，经过滤重结晶得到化合物7（6 mg），75%乙醇洗脱得到的组分经Sephadex LH-20柱甲醇洗脱得到化合物8（10 mg）。

3 结构鉴定

化合物1 黄色片状晶体。ESI-MS m/z 361.2[M-H]-，HR-ESI-MS m/z 361.068 47[M-H]-，mp 89～90 ℃，[α]25D-48（c 0.001，CHCl3）。1H-NMR（CDCl3，400 MHz）和13C-NMR（CDCl3，100 MHz）数据与（+）-松萝酸[（+）-usnic acid]相似（表1），区别在于（+）-松萝酸的4位烯烃质子信号在化合物1中变为孤立自身偶合的亚甲基信号[δH 3.25（1H，d，J=16.0 Hz，H-4a）和3.14（1H，d，J=16.0 Hz，H-4b）]，同时化合物1中的4a碳信号向高场化显著位移了71.6，而相对分子质量比（+）-松萝酸多了18，表明化合物1为（+）-松萝酸的4位双键水加成产物，经化合物1的碳谱数据与文献[9]对照197.8应归属为C-1，194.9为C-3，并得到了化合物1的2D-NMR进一步确证。根据化合物1的HMQC波谱确定了质子与相应碳原子的归属，在化合物1的HMBC波谱中，H-4与C-3，4a，2，9b有远程相关，而甲基9b-CH3的质子除了C-9b，还与C-1，9a，4a有较弱相关，证实了上述推断。在NOESY谱中，δH 4.99（s，4a-OH）与CH3-9b有相关，说明4a-OH与9b-CH3处于顺式。同时，根据生源关系，确定化合物1为（4aR，9bS）-2，6-二乙酰基-3，4a，7，9-四羟基-8，9b-二甲基-1-氧代-1，4，4a，9b-四氢二苯骈呋喃酮[（4aR，9bS）-2，6-diactyl-3，4a，7，9-tetrahydroxy-8，9b-dimethyl-1-oxo-1，4，4a，9b-tetrahydrodibenzo[b，d]furan]（图1），为新化合物。

化合物2 黄色针晶（二氯甲烷），TLC以5%香草醛浓硫酸溶液显色为蓝色斑点，NMR数据（表1）与文献[10]一致，故鉴定为（+）-松萝酸。

化合物3 白色粉末（丙酮）。1H-NMR（Acetone-d6，400 MHz）δ：8.07（2H，s，1，5-OH），6.15（3H，s，H-2，4，6），2.15（3H，s，H-7），13C-NMR（Acetone-d6，100 MHz）δ：158.7（C-1，3），139.9（C-5），107.7（C-4，6），100.0（C-2），20.8（C-7）。与文献[11]苔黑酚数据一致。

化合物4 白色针状结晶（二氯甲烷）。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：12.92（1H，s，21-OH），4.65（1H，ddd，J=8.0，8.5，6.1 Hz，H-4），3.54（1H，m，H-18），3.33（1H，d，J=8.5，J=8.0 Hz，H-3），2.93（1H，m，H-2），2.50（2H，m，H-5），1.53（2H，m，H-17），1.24（22H，m，H-6～16），1.32（3H，d，J=8.5 Hz，H-20），1.15（3H，d，J=6.1 Hz，H -19）；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：177.6（C-1），171.4（C-21），77.21（C-4），65.70（C-18），50.7（C-3），36.2（C-2），30.4（C-5），29.2～28.6（C-7～15），38.0（C-17），25.30（C-6），25.17（C-16），23.6（C-19），13.9（C-20）。以上数据与文献[12]报道18R-hydroxydihydroalloprotolichensterinic acid的数据一致。

化合物5 白色针状结晶（甲醇）。1H-NMR（CDCl3，400 MHz）δ：6.50（1H，d，J=8.6 Hz，H-7），6.23（1H，d，J=8.6 Hz，H-6），5.13（1H，dd，J=15.2，7.8 Hz，H-22），5.21（1H，dd，J=15.2，7.8 Hz，H-23），3.97（1H，m，H-3），0.99（3H，d，J=5.3 Hz，H-21），0.91（3H，d，J=7.1 Hz，H-28），0.90（3H，s，H-19），0.81（3H，s，H-18），0.80（3H，d，J=7.1 Hz，H-26）；13C-NMR（CDCl3，100 MHz）δ：36.9（C-1），30.1（C-2），66.4（C-3），37.7（C-4），79.4（C-5），130.7（C-6），135.4（C-7），82.1（C-8），51.1（C-9），36.9（C-10），20.9（C-11），39.3（C-12），44.5（C-13），51.7（C-14），28.6（C-15），23.4（C-16），56.2（C-17），12.8（C-18），18.1（C-19），39.7（C-20），19.6（C-21），135.2（C-22），132.3（C-23），42.8（C-24），33.0（C-25），19.9（C-26），20.6（C-27），17.5（C-28）。以上数据与文献[13]报道3β-羟基-5α，8α-桥二氧麦角甾-6，22-二烯数据一致。

化合物6 无色针状结晶，mp 70～71.5 ℃。1H-NMR（CDCl3，400 MHz）δ：11.8（1H，s，2-OH），6.32（1H，d，J=2.3 Hz，H-5），6.28（1H，d，J=1.7 Hz，H-3），4.38（2H，q，J=7.0 Hz，H-1′），3.79（3H，s，H-9），2.52（3H，s，H-8），1.41（t，J=7.1 Hz，3H，H-2′）；13C-NMR（CDCl3，100 MHz）δ：171.7（C-7），165.6（C-2），163.8（C-4），143.1（C-6），111.1（C-5），105.4（C-1），98.7（C-3），61.2（C-1′），55.3（C-9），24.4（C-8），14.2（C-2′）。根据以上数据及2D-NMR，鉴定为扁枝衣酸乙酯，文献[14]曾报道从长松萝中分离得到该化合物，但数据不完整，本研究应用二维谱对该化合物的波谱数据做了全归属。

化合物7 白色方晶（丙酮）。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：4.41 （ 2H，br，-OH），4.30 （1H，br，-OH），4.17 （1H，br，-OH），4.10 （1H，br，-OH），3.65 （1H ，dd，J=11.3，6.2 Hz，H-1a），3.61～3.57 （1H，m，H-2），3.48～3.42 （1H，m，H-3），3.42～3.28 （4H，m，H-1b，4，5，5a）；13C-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：62.9（C-1）， 70.5（C-2）， 71.5（C-3），70.1（C-4）， 63.7（C-5） 。与文献[15]阿拉伯糖醇数据一致。

化合物8 淡黄色粉末。UV λmax（nm）（MeOH）（lgε）268.4（2.16），332.4（2.49）；HR-ESI-MS m/z 445.084 67 [M-H]-（calcd for C21H18O11，446.08）。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：6.87（1H，s，H-3），6.46（1H，d，J=1.8 Hz，H-6），6.85（1H，d，J=1.8 Hz，H-8），7.96（2H， d， J=8.8 Hz，H-2′，6′），6.93（2H，d，J=8.8 Hz，H-3′，5′），5.17（1H，d，J=8.9 Hz，H-1″），3.29（3H，m， H-2″，3″，5″），3.81（1H， d，J=8.9 Hz，H-4″），12.97（1H，s，5-OH），10.5（1H，s，4′-OH）；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：164.2（C-2），102.9（C-3），181.9（C-4），161.4（C-5），99.3（C-6），162.7（C-7），94.6（C-8），156.9（C-9），105.3（C-10），120.8（C-1′），128.5（C-2′，6′），161.0（C-4′），115.9（C-3′，5′），99.4（C-1″），71.6（C-2″），72.8（C-3″），74.5（C-4″），76.1（C-5″），170.7（C-6″）。以上数据与文献[16]报道芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的数据一致。

化合物9 白色针状结晶（石油醚/丙酮），TLC以5%浓硫酸乙醇溶液显色为紫色斑点。1H-NMR（Acetone-d6，400 MHz）δ：6.35（1H，d，J=2.3 Hz，H-5），6.31（1H，d，J=2.3 Hz，H-3），5.46（1H，s，2-OH），3.82（3H，s， H-9），2.55（3H，s，H-8）；13C-NMR（Acetone-d6，100 MHz）δ：174.2（C-7），167.2（C-4），165.2（C-2），144.6（C-6），111.4（C-1），106.8（C-5），99.5（C-3），55.7（C-9），24.2（C-8）。以上数据与文献[7]报道4-O-methylorsellinic acid的数据一致。

化合物10 白色针状结晶。1H-NMR（CDCl3，400 MHz）δ：0.72（3H， s， H-24）， 0.88（3H，s，H-25），0.95（3H，s，H-28），1.01（6H，s，H-26，27），1.05（3H，s，H-30），1.18（3H，s，H-29），0.87（3H，d，J=6.7 Hz，H-23），2.38（1H，m，H-4），2.23～2.29（2H，m，H-2）；13C-NMR（CDCl3，100 MHz）δ：22.2（C-1），41.4（C-2），213.2（C-3），58.1（C-4），42.1（C-5），41.2（C-6），18.0（C-7），53.0（C-8），37.4（C-9），59.4（C-10），35.6（C-11），30.4（C-12），39.6（C-13），38.2（C-14），32.2（C-15），35.8（C-16），29.9（C-17），42.7（C-18），35.4（C-19），28.1（C-20），32.7（C-21），39.2（C-22），6.7（C-23），14.6（C-24），17.9（C-25），18.6（C-26），20.2（C-27），31.9（C-28），31.7（C-29），34.9（C-30）。以上数据与文献[17]报道木栓酮的数据一致。

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Chemical constituents from Usnea longgisima， a traditional mongolian medicine

LaxinamuJila1，2， TANG Yan-xia1， BAO Hai-ying1*， BAU Tolgor1

（1.Institute of Mycology Research， Jilin Agricultural University， Changchun 130118， China；

2.College of Traditional Mongolian Medicine， Inner Mongolia University for Nationalities， Tongliao 028000， China）

[Abstract] Objective： To study the chemical constituents of the whole lichen of Usnea longissima. Method： The compounds were separated by silica gel， Sephadex LH-20 chromatography and high performance liquid chromatography（HPLC）. The structures of the compounds isolated were identified by physico-chemical properties and spectral analysis. Result： Ten compounds were isolated and their structures were identified as （4aR，9bS）-2，6-diactyl-3，4a，7，9-tetrahydroxy-8，9b-dimethyl-1-oxo-1，4，4a，9b-tetrahydrodibenzo[b，d]furan （1）， （+）-usnic acid （2）， orcinol （3）， 18R-hydroxydihydroalloprotolichensterinic acid （4）， 5， 8-epidioxy- 5α， 8α-ergosta-6， 22E-dien-3β-ol （5）， ethyl everninate（6）， arabitol（7）， apigenin 7-O-β-D-glucuronide（8）， 3-hydroxy-5-methoxy-2-methylbenzoic acid（9）， friedelin（10）. Conclusion： Compound 1was a new compound. Compound 8 was isolated from genu Usnea for the first time and compounds 3， 4 and 7 were isolated from U. longissima for the first time.

[Key words] Usnea longissima； chemical constituent； structure identification

doi：10.4268/cjcmm20131318