中职检验专业白细胞计数实验教学中的问题分析

摘 要 在运用显微镜计数法进行白细胞计数的实验教学中，容易出现一些问题，如技术误差、固有误差、仪器误差等。经过多年的教学总结和仔细分析，得出一些相应的解决方法，以期共同探讨。

关键词 中职检验专业；白细胞计数实验；误差

中图分类号：G712 文献标识码：B

文章编号：1671-489X（2017）03-0142-03

1 引言

中职学校检验专业学生在进行白细胞计数实验中，容易出现实验器材使用不当、实验操作不规范或对实验理论知识不理解而导致实验结果偏差甚至实验过程受阻等；另外，即使一位技术熟练者，使用同一仪器在对同一标本进行连续多次操作，检测结果也常有一定差异。本文提出白细胞计数实验中容易出现的一些问题即技术误差、固有误差以及仪器误差等进行分析探讨且给出相应的解决方法，以尽力避免学生在实验过程中出现的错误操作或无效操作，提高学生操作效率及能力，达到更好的教学效果。

2 技术误差

由于操作不正确或仪器不精确造成的误差为技术误差。这类误差通过主观努力可以避免或降到最低程度[1]。

采血部位不同结果产生偏差 世界卫生组织（WHO）推荐采血部位以左手无名指或中指指尖的内侧为宜。在我国有些地方仍采用耳垂取血，耳垂部位痛感较轻且不易感染，但其血循环较差，受温度变化影响较大，所以一般情况下采用手指部位取血。在学生实验操作时，笔者将30名学生同时采指血和耳垂血，分别进行采血取样进行对照。计数结果是耳垂血白细胞数高于手指血白细胞数的为28例，约占93.3%，平均数值增高1.9×109/L。白细胞数目的多少可能与所在采血部位的血管深浅、粗细、血流速度、血液粘滞度等多种因素有关。耳垂白细胞计数偏高的主要原因可能是耳垂体积小散热快，所处环境温度低，血流慢，血液粘滞度大，白细胞易于沉积。手指则不然，手指活动量大、体积大，温度相对高，血流快，血液粘滞度小，白细胞不易沉积，所以这些可能是手指血白细胞计数偏低的主要原因[2]。

计数板不清洁干燥

1）计数板的清洁方法。血细胞计数板使用后，取下盖玻片，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗后自行晾干或用吹风机吹干，也可用95%的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。

另外，计数板冲洗后，还要通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复清洗直到干净为止，干燥后方可放入盒内保存或使用。

2）计数板上残存水滴，会使充液不均，还会造成混合液浓度降低[3]。解决方法：将计数板置于清洁环境，自然干燥或在空气中快速挥动，如急用也可轻轻甩掉计数板上水滴后再用滤纸片将残存水分吸干。

3）计数板上残留纤维等杂质影响镜下观察清晰度。解决方法：用流动的清水洗净计数板后再进行上述具体操作。

微量吸管使用不当 本实验采用一种改进的微量吸管，属于医疗器械技术领域。它由气囊和与之管通的吸管一体构成，气囊与吸管管通一端的底部具有孔，吸管上标有刻度，故可在采取样液时利用指压启闭其孔实现准确性，该吸管具有造价低、精确度高、操作简便灵活的特点，又具有可作为一次性产品使用，能够避免交叉感染等的优点。

1）微量吸管折断。解决方法：微量吸管细长易断，在将其插入橡胶头内时，应左手持橡胶头（注意气囊孔的控制），右手必须持住靠近微量吸管上端的部分轻轻操作，才能有效防止其折断。

2）微量吸管取样混有气泡。解决方法：取样时，需将微量吸管末端完全浸入血样末端，轻轻抽吸，才不会混入空气。

3）血样进入橡胶头。解决方法：取样前应先捏紧橡胶头，封闭气孔，取样时将橡胶头慢慢地、一点一点地松开，如果松开速度过快或力度过大，就会发生上述现象[4]。

取硬僮鞑还娣 以用一次性定量（20 μl）微量吸管取末梢血为例，正确操作是：轻轻吸取末梢血到微量吸管第二个刻度线后再多取一点儿，此时右手捏稳橡胶头不动，左手持干棉球置于微量吸管管尖部位，右手轻捏橡胶头挤出管内多余血样至刚好到吸管第二个刻度线为止，此时再用左手的棉球将管尖外多余血液擦掉。上述每一步骤缺一不可。

充液不当

1）充液量过少造成充液缺损，过多则造成盖玻片悬浮，细胞飘忽不定。

2）充液时玻棒位置不正确，造成充液缺损或有气泡。正确操作是：用玻棒蘸取适量混悬液后应轻轻接触盖玻片一角，让液体自动进入计数池并刚好充满后立即移走玻棒。

3）充液时间延迟。混悬液完成后应立即充液观察计数，有实验证明如果混悬液放置超过1.5分钟以上在进行充液计数操作，会使计数结果偏低[5]。白细胞在刚刚混匀的液体中均匀分布，而静置超过1.5分钟后白细胞会逐渐下沉，造成混悬液密度不均，在吸取上层液体充液进行计数时会产生偏差[5]。

低倍镜下看不到计数池

1）了解计数板的构造。血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4个槽构成3个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两个计数区，每个计数区上面各刻有一方格网，每个方格网共分9个大方格，4个角的大方格作为白细胞计数用，每个大方格被单线划分成16个中方格；最中央大方格被双线划分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格，供计数密度较大的红细胞计数时使用。每个计数区由400个小方格组成，计数区边长为1 mm，

则计数区的面积为l mm2，每个小方格的面积为1/400 mm2。盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1 mm，所以每个计数区的体积为0.1 mm3，每个小方格的体积为1/4000 mm3。

2）计数板放置位置不正确。计数板有上下两个相同的计数池，应将要观察的、充好液的一侧置于视野中央。

3）光线过强。计数板放置好后，调整好焦距，如仍看不到计数池上的画线，可能是光线过强的缘故，调整显微镜光圈或遮光镜至视野较暗，再调整细准焦螺旋至视野清晰即可看到计数池上的画线[6]。