基于胶体金快速检测法检测霍乱弧菌的评价(以公安县霍乱疫情为例)

doi：10.3969/j.issn.1007-614x.2014.17.71

摘要目的：探讨胶体金快速检测法检测霍乱弧菌的可信度。方法：在霍乱疫情标本检测中，分别采用金标法和分离培养法两种方法，对疑似病例进行检测，并结合受试个体的临床反应，对最终的检测结果进行比较。结果：金标法检测结果中有4份标本结果为假阳性。假阳性标本检出率占总标本的1.8%。结论：金标法和培养法对受感染人群的检测率非常可靠。

关键词金标法培养法霍乱弧菌

Evaluation of rapid detection of vibrio cholerae based on rapid detection method of colloidal gold-an example of the cholera epidemic in Gongan County

Liu Min

The Centers for Disease Control and Prevention of Gongan County，Hubei，434300

AbstractObjective：To investigate the credibility of the rapid detection method of colloidal gold to test vibrio cholerae.Methods： In the detection of cholera specimens，we used the gold standard method and the isolation and culture method to detect the suspected cases.We compared the final results combined with the clinical response of subjects.Results：4 samples were false positive in the results of the gold standard method for detection.The detection rate of false positive samples was 1.8% of the total samples.Conclusion：The gold standard method and culture method for detection of infected people is very reliable.

Key wordsThe gold standard method；Culture method；Vibrio cholerae

霍乱是由霍乱弧菌引起的一种以腹泻为主要症状的急性肠道传染病，属于《中华人民共和国传染病防治法》规定的甲类传染病，其典型特征是由严重腹泻导致的体液和电解质大量丢失。可由污染的食物与水源迅速传播，严重威胁人的生命安全。因此，快速、准确地检测标本中霍乱弧菌对控制霍乱疫情有极为关键的作用。目前霍乱弧菌的实验室检测以分离培养法为标准，胶体金快速检测法（以下简称金标法）为辅助诊断。分离培养法是检测霍乱弧菌的经典方法，从菌落生长特点、镜下形态、血清学试验及生化实验、PCR等多种试验结果中得到统一，从而得出最后结论，其结果准确，可信度高。金标法操作简单，检测结果清晰，《霍乱诊断标准》认为此类快速检测方法的检出限为105个菌/ml[1]，因此在轻型病例及带菌者调查中存在漏检的可能，需要增菌培养后检测，以提高检出率。其中金标法作为辅助检查法，其结果可信度究竟有多高？除了因菌量不够导致漏检，是否还有其他缺陷呢？就此，公安县疾控中心实验室在某次霍乱疫情标本检测中，分别采用金标法和分离培养法两种方法，对疑似病例进行检测，并结合受试个体的临床反应，对最终的检测结果进行比较。该霍乱疫情始于2012年8月公安县斑竹档镇学堂街村。该村某医生家请客聚餐后，个别聚餐者有上吐下泻症状。公安县疾控中心收到疫情报告后，迅速前往事发地点进行流行病学调查与采样检测，在厨师肛拭子中发现霍乱弧菌，该菌株经湖北省疾控中心传染病所检测鉴定为O139群霍乱弧菌。事发后我部门及时报上级部门并启动应急响应，迅速展开系列控制预防措施，截止8月25日无新发现病例，8月28日后未发现新带菌者，最后1名阳性带菌者于9月3日出院。整个疫情过程中，阳性标本6份。其中1例病例，4例带菌者及阳性水产品1例。该疫情已经由湖北省卫生厅网站于2012年8月30日公告。

资料与方法

材料：①样品来源：按标准采样法于2012年8月25日-2012年9月3日共采集疫区标本222份[2，3]。包括人肛拭子112份，粪便9份，便池14份，水样48份，水产品25份，其他9份。②试剂来源：碱性蛋白胨水，购自北京陆桥技术有限公司；庆大霉素琼脂，购自广东环凯微生物科技有限公司；霍乱弧菌O1群多价血清，购自兰州生物制品研究所有限责任公司；霍乱弧菌O139群诊断血清，购自天津经济开发区宏达街23号；霍乱弧菌检测试剂盒，由省市疾控中心发送，厂家是郑州博赛生物技术股份有限公司。

方法：按照《霍乱诊断标准》进行霍乱弧菌的分离培养及血清学鉴定。将样本经37℃6小时碱性蛋白胨水增菌后，取增菌液表层培养物接种于庆大霉素琼脂平板和碱性营养琼脂平板上分段画线，置于37℃温箱培养24小时（碱性营养琼脂上霍乱弧菌生长的菌落呈现无色，圆形，透明或半透明，表面光滑，湿润，扁平或稍突起，边缘整齐。庆大霉素琼脂上霍乱弧菌菌落特征与在碱性营养琼脂上基本相似，呈半透明状，略带灰色，并随培养时间延长而加深颜色），挑取平板上可疑菌落，作血清学试验和革兰染色观察菌体形态，初步鉴定后按菌株管理的要求，送往上级疾控中心进行确认分析。

作分离培养法步骤到增菌环节时，所有标本的增菌液均用金标法快速检测1次。标本经37℃6小时碱性蛋白胨水增菌后，取适量增菌液表层培养物加入胶体金快速检测条，10分钟内观察结果。对照线和检测线两条均呈紫红色判为阳性，只出现对照线一条紫红色为阴性，其他情况视为无效。

结果

金标法和分离培养法检测结果对比，见表1。

讨论

本次试验同时对222份标本采用培养法与金标法两种方法做检测，以培养法作标准，金标法与之对比。研究结果表明，人肛拭子的检验结果基本上与临床反应对应，说明金标法和培养法对受感染人群的检测率非常可靠。此外，通过对水产品和水样样本进行分析，发现本次霍乱的感染源可能是由于水产品携带导致，通过对该传播渠道及时进行处理，防止疫情蔓延。一般认为，O139群霍乱弧菌索源较困难，湖北省曾发生由O139群霍乱弧菌感染引起的霍乱病例，未找到传染源[4]。

金标法检测结果中有4份标本结果为假阳性。假阳性标本检出率占总标本的1.8%。这4份差异样本发生于水产品中，这可能是由于水产品中杂菌种类多，有些菌种能与霍乱弧菌产生交叉反应，导致金标法检测呈阳性结果。通过该次实验研究得知，金标法的结果不仅如《霍乱诊断标准》上所说，“因标本所带菌量不够可能存在漏检”，而且还会因为其他原因，导致假阳性的增加。

由表1得知，金标法的灵敏度6/6= 100%，灵敏度反映筛检试验发现病菌的能力，它与假阴性率之间为互补关系；特异度212/216=98.2%，特异度反映筛检试验确定非病菌的能力，它与假阳性率之间为互补关系。假阳性率4/222= 1.8%，假阴性率为零。

总体而言，金标法的灵敏度高，标本增菌培养后假阳性率1.8%，假阴性率为零。此外，金标法检出结果的时长较培养法提前18～20小时，有利于及时发现传染源，早发现，早防疫，防止疫情蔓延。金标法提示霍乱疫情的存在，培养法则完成霍乱疫情的确诊。这对霍乱这样的甲类传染病的防治是至关重要的。

参考文献

1《霍乱诊断标准-中华人民共和国卫生行业标准》WS289-2008[S]，2008.

2肖东楼.霍乱防治手册[M].北京：人民卫生出版社，1999：78-79.

3齐小秋.病原微生物检验-细菌[M].北京：人民卫生出版社，2002：130-131.

4李冬林，李华民.一起霍乱病例流行病学调查与处理[J].公共卫生与预防医学，2006，17（3）：56-57.