HPLC法测定己氯软膏中氯霉素的含量

[摘要] 目的：建立己氯软膏中氯霉素的HPLC含量测定方法。方法： 采用Sinochrom ODS2色谱柱（4.6 mm×200 mm，5 μm），流动相为甲醇-水（59∶41），流速为1.0 ml/min，检测波长：272 nm。结果：氯霉素在57.4~106.6 μg/ml浓度范围内与峰面积成良好线性关系，r=0.995 7，平均回收率为100.18%，RSD为1.48%（n=7）。结论：本法简便，准确，适用于己氯软膏中氯霉素的含量测定。

[关键词] HPLC；氯霉素；含量测定

[中图分类号] R917 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2011）06（c）-072-02

Determination of chloramphenicol in Diethylstilbestrol Chloramphenicol Ointment by HPLC

HOU Daping,QU Xiumei, FANG Fang, LI Dong, ZHANG Zhiguo

Department of Pharmacy, the First Affiliated Hospital of Jiamusi University, Jiamusi 154002, China

[Abstract] Objective: To establish an HPLC method for determination of chloramphenicol in Diethylstilbestrol Chloramphenicol Ointment. Methods: Sinochrom ODS2 column(4.6 mm×200 mm, 5 μm) was used, methanol-warter(59∶41) was used as mobile phases, the flow rate was 1.0 ml/min and the detective wavelength was 272 nm. Results: The linear range of chloramphenicol was 57.4-106.6 μg/ml and average recovery was 100.18%, RSD=1.48(n=7). Conclusion: The method is convenient and accurate, it can be used for the determination of chloramphenicol in Diethylstilbestrol Chloramphenicol Ointment.

[Key words] HPLC; Chloramphenicol; Content determination

己氯软膏是经过我院药剂科和妇科几代专家和教授摸索、循证研制的制剂。其既具有增强阴道局部抵抗力的作用，又能有效杀灭致病菌，治愈率及总有效率较高，深受广大老年妇女欢迎，此制剂亦为我院特色制剂之一。为保证药品质量和制剂标准提高需要，本文建立了HPLC法测定己氯软膏中氯霉素的含量测定方法，该法操作简便、灵敏度高，结果满意。

1 仪器与试剂

大连伊利特P230Ⅱ高效液相色谱仪，UV230Ⅱ紫外-可见检测器，EC2006色谱数据处理工作站。

甲醇（色谱纯，天津凯通化学试剂有限公司生产）；氯霉素对照品（批号：130555-200602，中国药品生物制品检定所提供）；己氯软膏（本院制剂室生产）；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Sinochrom ODS2色谱柱（4.6 mm×200 mm，5 μm），流动相：甲醇-水（59∶41）；流速：1.0 ml/min；检测波长：272 nm；进样量：20 μl。

2.2 试验溶液的制备

精密称取本品约2 g，置100 ml碘瓶中，用甲醇超声提取2次（20、15 ml），每次20 min，冷至室温，转移至50 ml量瓶中；用少量甲醇洗涤残渣及碘瓶2次，洗液并入量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；精密量取4 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为样品溶液。按照处方比例及制备工艺，制备不含氯霉素的阴性样品，同法制备不含氯霉素的空白溶液。精密称取氯霉素对照品102.5 mg，置50 ml容量瓶用中，加甲醇溶解并稀释至刻度，混匀，作为对照品贮备溶液。精密量取贮备溶液1 ml，置25 ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度（含氯霉素0.082 mg/ml），作为对照品溶液。

2.3专属性试验

分别取对照品溶液、样品溶液和空白溶液按色谱条件进样，色谱图见图1。

2.4 线性关系试验

分别取对照品贮备溶液0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3 ml，分别置25 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，分别进样20 μl测定，以峰面积（Y）对进样浓度（X）进行线性回归，得方程为：Y=13.954X+125.98，r=0.995 7，氯霉素浓度在57.4 ~106.6 μg/ml范围内与峰面积成良好线性关系。

2.5 精密度实验

分别取浓度为82 μg/ml对照品溶液，连续进样7次，记录面积，RSD为1.58%，仪器精密度良好。

2.6 重复性试验

取0906144批号样品(含量100.29%)按“2.1”项下制备提取并进样7次，记录峰面积，RSD为1.68%，表明本方法重现性良好。

2.7 回收率试验

按处方分别精密取己烯雌酚、氯霉素和辅料，按工艺规程配制样品软膏（含氯霉素49.84 mg/g），按样品溶液制备方法分别制备样品溶液7份，按测定方法测定含量，检测结果见表1。

2.8 稳定性试验

样品溶液配制完成后，分别在1、3、5、7、22、28 h进样，记录峰面积，RSD为0.97%，结果表明样品28 h内稳定。

2.9 样品检测

按处方和工艺流程配制样品软膏15批次，按样品溶液制备方法分别制备样品溶液，按测定方法测定含量，检测结果见表2。

由表2可见，最高含量为108.13%，最低含量为92.57%。

3 讨论

笔者曾力图按文献[1-2]报道的方法同时测定氯霉素和己烯雌酚含量，不仅分离效果不佳，而且含量太低致使己烯雌酚峰高太小，噪声较大，无法进行测定。对于氯霉素的检测波长，文献报道的有241[1-3]、240[4]、280[5]、和272[6]nm，本文作者配制含氯霉素0.082 mg/ml的甲醇溶液，在220~300 nm波长进行紫外扫描，结果在272 nm处有最大吸收，与文献[6]和2005年版《中国药典》二部氯霉素含量测定项下的检测波长一致。造成差异的原因可能是与其他作者需要同时检测两种成分含量有关。在进行流动相选择时，经过筛选，以方焱等试验使用的甲醇-水（59∶41）较好，因而选择了此流动相。

由样品检测结果可见，本实验氯霉素最高含量108.13%，最低含量92.57%，鉴于制剂实际情况和检测方法刚开始使用，因此，确定软膏中含氯霉素（C11H12Cl2N2O5）应为标示含量的90%~110%。

[参考文献]

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[2] 程洪兵.高效液相色谱法测定复方己烯雌酚乳膏中己烯雌酚和氯霉素的含量[J].中国药业,2007,16(3):16.

[3] 方焱,张善堂,陈象青,等.氯霉素氢化可的松乳膏的制备及质量控制[J].中国药房,2007,18(16):1245.

[4] 王吉华,丁华,张迪.高效液相色谱法测定复方醋酸曲安奈德滴耳液的含量[J].中国医药导报,2009,6(21):48-49.

[5] 来小丹,刘松青,林彩,等.HPLC法同时测定头皮搽剂中氯霉素和盐酸达克罗宁的含量[J].药学学报,2009,25(1):71-72.

[6] 张囡,王冬.HPLC法测定复方氯霉素乳膏中氯霉素含量[J].天津药学,2010,22(2):14-15.

（收稿日期：2010-12-31）

[作者简介] 侯大平，男，主任药师；学科及研究方向：药品检验。

[通讯作者] 曲秀梅，女，副主任药师；学科及研究方向：药品检验。

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