芹菜素对大鼠骨肉瘤Caspases-3 NF-κB蛋白的影响

摘要：目的观察芹菜素对大鼠骨肉瘤Caspases-3，NF-κB蛋白水平的调节作用。方法SD大鼠50只，建立大鼠骨肉瘤模型。随机分为，模型组、顺氯氨铂组（10 mg/kg）、芹菜素组（2.5，5，10 mg/kg），每组10只，连续灌胃给药30d。模型组灌胃给予等体积的生理盐水。末次给药24h后，取大鼠胸腺、胰腺称重。Western blotting法检测骨肉瘤组织中Caspases-3，NF-κB的蛋白含量。结果与模型组相比，顺氯氨铂组胸腺和脾脏重量明显下降；芹菜素治疗组的胸腺和脾脏重量增加，增加Caspases-3蛋白表达，同时下调NF-κB蛋白的表达，差异有显著性意义（P＜0.05）。结论芹菜素可通过提高骨肉瘤大鼠免疫器官的重量，增加Caspases-3蛋白表达，下调NF-κB蛋白的表达，抑制骨肉瘤细胞的增殖，诱导骨肉瘤细胞凋亡。

关键词：芹菜素；大鼠；骨肉瘤；NF-κB；Caspases-3

Effect of Apigenin on Osteosarcoma Caspases-3 rats, NF- κ B Protei

CHENG Xin-yan

(The Guangxi Zhuang Autonomous Region people's Hospital,Nanning 530021,Guangxi,China)

Abstract：ObjectiveTo study Apigenin in treatment of rats osteosarcoma on Caspases-3 and NF-κB protein expression. Methods50 rats were randomly divided into model group, Cisplatin group(10 mg/kg), Apigenin group(2.5, 5, 10mg/kg). The models of rats osteosarcoma were made by operation. All groups were gavagefor 30 days. After the last administration 24h, weighing of rat thymus, pancreas weight. In osteosarcoma Caspases-3 and NF-κB expressions were assessed using Western blotting assay. ResultsCompared with the model group, the thymus and pancreas weight cyclophosphamide treatment group increased(P

Key words：Apigenin；Rats；Osteosarcoma；NF-κB; Caspases-3

骨肉瘤是一种原发性的恶性骨肿瘤，多发病于青少年。美国恶性骨肿瘤病例中，0~24岁的年龄段占全部病例的55%[1]。骨肉瘤多发生在四肢长骨的干骺端，发病后死亡率很高，在发生转移的患者中5年生存率不足30%[1,2]。芹菜素是一种无基因毒性作用的饮食黄铜化合物, 具有抑制宫颈癌、胃癌、骨肉瘤、肺癌等癌细胞的增殖[3,4]。本实验研究芹菜素对大鼠骨肉瘤Caspases-3和NF-κB蛋白的影响，为芹菜素的作用机制提供科学基础数据。

1资料与方法

1.1实验动物SD大鼠，雌雄各半，（200±20）g，SPF级，由广西医科大学实验动物中心提供，试验动物生产许可证SCXK(桂)2009-0002，试验动物使用许可证SCXK(桂)2009-0005。

1.2仪器与试剂大鼠骨肉细胞系UMR106（中科院上海生化与细胞学研究室上海细胞库）；兔多克隆抗NF-κB抗体(武汉博士德公司)；辣根过氧化酶标记的鼠抗羊IgG抗体、羊抗鼠IgG抗体(武汉博士德公司)；半干电转仪（美国，Bio-Rad）；低温高速离心机（德国Heraeus）；常温高速离心机（美国Thermofisher）；-40℃低温冰箱（青岛海尔股份有限公司）。

1.3实验方法

1.3.1给药及给药方法将50只SD大鼠随机分为三组，每组10只：模型组、顺氯氨铂组（10mg/kg）、芹菜素组（2.5，5，10mg/kg）。连续灌胃给药30d。

1.3.2大鼠骨肉瘤模型建立[5]腹腔注射3%戊巴比妥钠（30mg/kg）麻醉大鼠后，用1640培养液将对数生长期的大鼠骨肉细胞系UMR106稀释为5×106/ml向大鼠的后肢股骨远端的骨髓腔中注射0.2ml。

1.3.3观察指标末次给药24h后分别处死各组大鼠，切取大鼠胸腺、脾脏称重。免疫蛋白印记法测定骨肉瘤组织中Caspases-3，NF-κB的蛋白水平。

1.4统计学方法本研究数据应用SPSS 18.0软件进行统计学数据分析。数据以（x±s）表示，多样本均数间比较采用 One-way ANOVA 分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1芹菜素对骨肉瘤大鼠胸腺、脾脏的影响与模型组相比，芹菜素5，10mg/kg组的胸腺和脾脏重量均有上升（P＜0.05），见表1。

2.2芹菜素对大鼠骨肉瘤组织中NF-κB的表达影响与模型相比，芹菜素5，10mg/kg组骨肉瘤组织中的NF-κB蛋白水平均下降，差异有显著性意义（P＜0.05），见表2，图1。

图1 芹菜素对大鼠骨肉瘤组织中NF-κB蛋白表达的影响

2.3对大鼠骨肉瘤组织中Caspases3的表达影响与模型相比，顺氯氨铂组、芹菜素2.5，5，10mg/kg组骨肉瘤组织中的Caspases-3蛋白水平均上升，其中芹菜素10mg/kg组上升的水平最高，差异有显著性意义（P＜0.05），见表3，图2。

图2 芹菜素对大鼠骨肉瘤组织中Caspases-3蛋白表达的影响

3讨论

骨肉瘤为骨恶性肿瘤，由间质细胞系发展，从软骨阶段之间或间接迅速形成肿瘤骨样组织和骨组织。在患恶性肿瘤的儿童和青少年中，骨肉瘤是死亡率很高的疾病，但早期发现和及时治疗已经从很大程度上提高了该病的生存率。目前治疗骨肉瘤的方法为化学、放射性或外科手术治疗[6]。现临床使用的甲氨蝶呤、顺氯氨铂、阿霉素等化疗药物，均有使患者的免疫力下降，白细胞数降低等副作，多耐药产生等缺点[7]。芹菜素是一种天然源性的黄酮类化合物，广泛分布于蔬菜和水果中，芹菜的含量最高。具有抗肿瘤、扩张血管、抗氧化、调节血压血脂等作用[8]。实验结果表明，芹菜素治疗的骨肉瘤大鼠的胸腺与脾脏的重量均比模型组的重，推测芹菜素可通过增加胸腺、脾脏免疫器官的重量，提高免疫能力，从而改善患者生存质量。

NF-κB是转录因子蛋白家族的其中一员。NF-κB的异常活化能抑制细胞的死亡，在恶性肿瘤中NF-κB一般均呈现高表达水平。Caspases是在于胞质溶胶中的结构上相关的半胱氨酸蛋白酶。Caspases家族现研究确定至少存在11种。在细胞凋亡过程中，直接参与早起的凋亡启动、信号传递及晚期凋亡效应。其中Caspases-3蛋白是参与细胞凋亡执行。Caspases的表达水平不但反应细胞的凋亡水平，还反应凋亡启动因素的存在[9]。研究结果表明，芹菜素能增加骨肉瘤中Caspases-3的蛋白含量，下调NF-κB蛋白的表达。表明芹菜素能抑制抗凋亡因子，达到对骨肉瘤的治疗效果。

参考文献：

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