胚胎停止发育的患者与正常早期妊娠绒毛组织缺氧适应相关基因的表达与意义

摘要：目的 探讨胚胎停止发育的患者绒毛组织缺氧适应相关基因HIF-1a、PHD1、PHD2和FH-1的表达及意义。方法 利用免疫组化方法检测34例胚胎停止发育患者的绒毛组织和24例正常早期妊娠绒毛组织的HIF-1a、PHD1、PHD2和FH-1基因蛋白水平，对两组的表达水平进行比较分析。结果 ①HIF-1a、PHD1、PHD2和FH-1基因蛋白均主要表达在合体滋养细胞和细胞滋养细胞的胞浆中；②HIF-1a、PHD1、PHD2和FH-1在胚胎停止发育研究组（强阳性率分别为0%、38%、0%、44%）及在正常早期妊娠对照组（强阳性率分别为33%、0%、25%、0%）中表达差异均有统计学意义（P

关键词：胚胎停止发育；绒毛；缺氧诱导因子-1a；缺氧诱导因子脯氨酸羟化酶；因子抑制缺氧诱导因子-1

研究表明[1]，缺氧诱导因子-1（HIF-1）参与机体对缺氧的反应，调节了胎盘血管形成。在胚胎停止发育滋养细胞中其表达不同。HIF-1a是HIF-1的功能亚基，缺氧诱导因子脯氨酸羟化酶（PHD）和因子抑制缺氧诱导因子-1（FH-1）分别通过羟化HIF-1a的脯氨酸残基和天冬氨酸残基来调节HIF-1a的蛋白含量和转录活性。PHD有四种同工酶，分别为PHD1、2、3、4本文通过免疫组化方法测定胚胎停止发育中的绒毛与正常妊娠绒毛组织中的HIF-1a、PHD1、PHD2和FH-1的表达，探讨它们在胚胎停止发育中的表达与发病机制。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2008年7月～2009年7月我院收治胚胎停止发育患者共34例，作为实验观察组，纳入条件为：初产妇，停经时间（10w），B超检查确诊为宫内妊娠，但是胚胎已停止发育，血常规及血凝四项正常；心电图及肝肾功能检查均正常；无子宫畸形和其他妇科疾病，观察组年龄（29.3±8.5）岁。另选同期相同纳入条件的自愿人工流产妇女24例作为对照组，年龄（28.6±9.6）岁，实验观察组和对照组妊娠组织均行清宫术获得。

1.2方法

1.2.1组织标本收集及处理 取上述对象子宫刮取的新鲜蜕膜组织，用生理盐水洗净血液，滤纸吸弃水分，剪成1mm大小，称重100g，以无菌器械转移置于研磨器中，加入生理盐水反复漂洗后，将绒毛和漂洗后的组织置入4%中性多聚甲醛中固定，石蜡包埋，制成5mm厚的连续切片，贴片于涂有多聚赖氨酸的载片上，经HE染色判断切片质量后，采用链霉素抗生物蛋白过氧化物酶连接（SP）法，在同一时间，同一条件进行检测.

1.2.2结果判断 每例样本选取5张染色效果良性的切片，由2名有经验的病理医师分别读片。每张切片随机观察10个高倍视野，根据阳性细胞比例及着色深浅计分：细胞无色或无阳性细胞为0分，细胞染色或阳性细胞1%～25%为1分，细胞染色为深棕色或阳性细胞26%～50%为2分，细胞染色为深棕色或阳性细胞>50%为3分，根据计分结果判断阳性等级：0～1分为阴性（-），1～2分为弱阳性（+），3～4分为阳性（++），5～6分为强阳性（+++），计算每块组织的平均得分作为每个样本的最终评分。

2 结果

胚胎停止发育患者与正常早期妊娠绒毛组织中HIF-1a、PHD1、PHD2和FH-1蛋白别的表达定位主要表达于合体滋养细胞和细胞滋养细胞的胞浆中。在正常早期妊娠绒毛组织中HIF-1a、PHD2阳性表达率明显高于研究组；而PHD1和FIH-1的表达却明显降低，2组比较，差异均有统计学意义（P

3 讨论

缺氧诱导因子（HIF-1a）是人类细胞存在的氧依赖转录激活因子，HIF是有a和β两个亚基组成，胚胎种植于子宫内膜时，滋养细胞受到局部环境的缺氧，HIF-1a在细胞内迅速聚集，并与β亚基结合后诱导其下游近百种基因的转录，引起细胞对缺氧的一系列适应性反应，使胚胎耐受缺氧，促使滋养细胞发育。

HIF-1a内ODD上的脯氨酸残基德羟基化是其降解的关键，脯氨酸羟化酶（PHD）是这一步骤的限速酶。而FH-1则通过羟化HIF-1aC端包含的反式激活结构域（trans-activation dom a in TAD）的天冬氨酸残基降低其转录激活活性。PHD四种同工酶中的PHD1在长时间缺氧状态下对HIF-1a的降解有重要意义，而PHD2是正常氧分压状态下低稳态水平HIF-1a的限速酶，且是接受HIF-1a（调控的靶基因，增高的HIF-1a可诱导其表达）。

研究结果表明HIF-1a在胚胎发育过程中起重要作用，提示早孕妇女在早孕时由于HIF-1a低水平表达，使得胚胎不能耐受低氧环境，滋养细胞的发育受到影响从而导致胚胎停止发育，HIF-1a低表达预示着胚胎停止发育，HIF-1a缺乏可能是胚胎停止发育的重要原因之一，同时我们也发现PHD1和FH-1蛋白的表达明显升高，而PHD2的表达与HIF-1a一致，在胚胎停止发育中低水平表达。

综上所述，很可能在人类妊娠的过程中，PHD1、PHD2和FH-1通过对HIF-1a的复杂调控机制，参与了对滋养细胞浸润和分化的调节以及缺氧相关下游基因表达的调节，保证了胎盘的正常发生和发育。

参考文献：

[1]WILKOWSKA TROJNIEL M，ZDRODOWSKA STEFANOW B，OSTASZEWSKA PUCHALSKA I.The influence of chlamydia trachomatis infection on spontaneous abortions[J].Advances in Medical Sciences，2009，（01）：86-90编辑/成森