不同产地栽培甘草含量测定研究

[摘要]目的研究不同产地栽培甘草总黄酮、甘草苷及甘草酸的含量。方法采用紫外分光光度法，测定总黄酮的含量；采用高效液相色谱法，测定甘草苷和甘草酸的含量。结果建立了甘草总黄酮、甘草苷和甘草酸的含量测定方法，并对不同产地甘草进行了含量测定。结论该方法适合于甘草总黄酮、甘草苷及甘草酸的含量测定，为寻找较佳甘草产地提供了依据；甘肃饮马农场3年生样品总黄酮、甘草苷、甘草酸含量皆为最高，质量最佳。

关键词：甘草总黄酮甘草苷甘草酸

[Abstract]Objective: To investigate the contents of total flavonoids, liquiritin, glycyrrhizic acid of cultivated licorice originated from different regions. Methods: The content of total flavonoids was determined by UV method and the contents of liquiritin and glycyrrhizic acid were determined by HPLC. Results: The content determination methods of total flavonoids, liquiritin and glycyrrhizic acid were established and the contents were performed determination for licorice originated from different regions. Conclusion:The methods were suitable to the assay of total flavonoids, liquiritin, glycyrrhizic acid, and provided providence for searching the better origin of the cultivated licorice, the contents of total flavnoids, liquiritin, glycyrrhzic aicd were the highest for triennialsample from Yinma Farm of Gansu province.

Key words: Licoricetotal flavonoidsliquiritinglycyrrhizic acid

中图分类号：R284 文献标识码：B文章编号：1004-7484（2011）12-0060-04

甘草为豆科植物甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch)、胀果甘草(Glycyrrhiza infata Bat)、光果甘草(Glycyrrhiza glabra L.)的干燥根及根茎[1]。甘草属于药食同源之品。生甘草能清热解毒，润肺止咳，调和诸药性；炙甘草能补脾益气，临床用量特大，出口量大。除药用之外，食品上也大量用甘草做糕点添加剂，其甜度是蔗糖的百倍。西方国家大量进口甘草，从中提取甘草次酸，治艾滋病，从中提取总黄酮，治疗胃溃疡。目前市售甘草绝大多数是栽培甘草。

外观和显微鉴定方法评价栽培甘草的质量不够充分。以内在的化学方面来说明甘草的质量，还是比较令人信服的。甘草的小分子化合物基本为黄酮和皂苷两大类。甘草中总黄酮的测定方法是个难点，通常使用紫外含量测定方法，主要有用芦丁做对照品比色法[2]；芦丁做对照品，亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠显色法[3]、硼酸-柠檬酸显色法[4]、三氯化铝显色法[5]；用柚皮苷做对照品比色法[6]；柚皮苷做对照品，氢氧化钾显色法[7]；硼氢化钾(钠)还原比色法[8]；等。但是甘草中的黄酮成分以查尔酮类(异甘草素、异甘草苷)和二氢黄酮类(如甘草素、甘草苷)化合物为主，而芦丁和柚皮苷不是甘草中的成分，紫外吸收也与这两类化合物不一致；另外硼氢化钾(钠)还原比色法的稳定性差，所以以上方法都不理想。

由于二氢黄酮类化合物在10%氢氧化钾的碱性条件下可转化为查耳酮类化合物，作者在参照文献[9,10]的基础上，做了进一步深入研究，以甘草苷作为对照品，建立了适用于测定栽培甘草生品总黄酮含量的分析方法；同时采用高效液相法分析了甘草苷和甘草酸的含量；为栽培甘草的应用和工业生产原料的选择提供内在的科学的基础研究资料。

1仪器与试药

HH.S11-2型电热恒温水浴锅(北京长安科学仪器厂)；UV-2550紫外分光光度计(日本岛津公司)；Agilent 1100 Serious高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)；Sartorius BS 110 电子天平(德国赛多利斯公司)；98-1-B型电热套 (天津市泰斯特仪器有限公司)；FW177型 中草药粉碎机(天津市索斯特仪器有限公司)；旋转蒸发仪(瑞士Buchi公司)；SHZ-D型循环水真空泵(河南郑州长城科工贸有限公司)。KQ-250DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

甘草生品由以岭集团资源考察部田清存高级工程师鉴定，与2010版一部乌拉尔甘草正品相符。甘草苷对照品(中国药品生物制品鉴定所，批号：111610-200604)；甘草酸铵对照品(中国药品生物制品鉴定所，批号：110731-200512)；95%乙醇(药用规格)；水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1 甘草总黄酮的含量测定

2.1.1 溶液的制备。对照品溶液：依据文献[1]制备。供试品溶液：取甘草粉末(过三号筛) 0.2057g，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇溶液，称定重量，超声处理30min，取出，再称量，用体积分数为70%的乙醇补足减失的重量，滤过，精密取续滤液5ml，置100ml量瓶中，用20%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。10%KOH显色溶液：称取KOH固体10g置100ml容量瓶中，缓缓加入纯净水使之溶解，定容即可。

2.1.2 测定波长的选择。精密量取甘草苷对照品和供试品溶液各1ml，分别置10ml容量瓶中，加10%KOH溶液1ml显色20min，然后加70%乙醇至刻度，摇匀，放置40min后测定，同时以70%乙醇做空白对照。显色后的溶液在200～700nm波长范围内扫描，确定最大吸收波长为402nm。

2.1.3 显色时间的确定。取浓度为0.1162 mg•ml-1的甘草苷标准品溶液2ml，7份，置10ml容量瓶中，然后加10%KOH溶液1ml显色，显色时间分别为0、5、10、20、30、60min，然后加入70%乙醇定容，摇匀，在200～700nm处进行全波长扫描，取402 nm处测定吸光度，结果为RSD =0.35%，显色20min后基本变化不大，所以显色时间选择20min。

2.1.4 稳定性考察。取甘草苷对照品溶液和样品溶液各2ml，分别置10ml容量瓶中，然后加10%KOH溶液1ml显色，显色20min后，加入70%乙醇定容，摇匀，然后分别放置5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、120 min在200～700nm处进行全波长扫描，取402 nm处的吸光度，结果为供试品和对照品溶液放置40min后吸光度趋于稳定，在随后1h内稳定。

2.1.5 线性关系考察。分别取甘草苷对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 ml置10ml容量瓶中，加10%KOH溶液1ml，摇匀使之充分反应，反应时间为20min，反应后加70%乙醇定容，摇匀，备用，在200～700nm处进行全波长扫描，分别测定在402nm和425 nm处的吸光度，结果为：吸收波长在402nm时的标准曲线为：A=17.608C+0.0797(r=0.9986)；吸收波长在425 nm时的标准曲线为：A=13.881C+0.0664(r=0.9978)。从此结果来看，无论是402 nm还是425nm，在0.0581～0.2905mg范围内，线性关系皆良好。

2.1.6 加样回收率考察。取已知总黄酮含量的样品溶液2ml，加入同量的甘草苷溶液1ml，摇匀后测定总黄酮的量，平行制备5份，计算平均回收率为104.6%，RSD=2.1%(n=6)。

2.1.7 精密度考察。取同一供试品溶液，分别放置0、5、10、20、30、60min，连续测定5次，结果为RSD =1.80%。结论为仪器精密度良好。

2.1.8 重现性考察。精密称取同一供试品5份，依法测定，结果测得RSD = 0.97%。

2.2 甘草苷的含量测定

依据文献[1]进行。方法学考察结果符合含量测定要求。

2.3 甘草酸的含量测定

依据文献[1]进行。方法学考察结果符合含量测定要求。

2.4 样品测定

取各种甘草样品，依法操作，并计算样品中总黄酮、甘草苷和甘草酸的含量，测定结果见表1。

结果是，不同产地、不同生长年限的药材主要化学成分含量差别还是比较大的；9份样品中，甘肃饮马农场3年生样品总黄酮、甘草苷、甘草酸含量皆为最高，质量最佳。

3讨论

作者曾参考文献[9]，以甘草苷为对照品，研究了盐酸-镁粉显色法测定总黄酮的含量，对镁粉的用量、反应时间、稳定性、线性关系、精密度、重现性等进行了考察，该方法稳定性，精密度，线性和重现性均良好，但是该方法测定的总黄酮的含量比甘草苷的含量还要低，遂判断此方法不适宜测定甘草总黄酮的含量。也以甘草苷为对照品，研究了不显色直接测定法、亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠显色法、5%三氯化铝显色法，结果都不理想，线性关系很差。采用氢氧化钾法是比较合适的，结果也比较准确。

从试验结果可以看出，不同产地、不同生长年限的药材主要化学成分含量差别还是比较大的。按照药典[1]要求，6～9号样品的甘草苷含量是不符合标准的，但是总黄酮含量并不低。9份样品中，甘肃饮马农场3年生样品总黄酮、甘草苷、甘草酸含量皆为最高，质量最佳。此方法在化学方面，为全面、有效地控制甘草药材质量提供了科学依据。

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