二氢杨梅素对肝纤维化大鼠肝功能及肝纤维化指标的影响

【摘要】目的：观察二氢杨梅素对四氯化碳（CCL4）所致肝纤维化大鼠血清肝功能及肝纤维化指标的影响。方法：84只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、复方鳖甲阳性对照组和二氢杨梅素低、中、高剂量组。采用40%CCL4皮下注射制备大鼠肝纤维化模型，造模的同时分别用3种不同浓度的二氢杨梅素进行干预，持续13周。测定各组大鼠血清中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）及透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原（PC-Ⅲ）、Ⅳ型胶原（CⅣ）的含量。结果：与正常组比较，模型组大鼠血清中ALT、AST及HA、LN、PC-Ⅲ、CⅣ的含量均显著升高（P

【关键词】二氢杨梅素；肝纤维化；谷丙转氨酶；谷草转氨酶；透明质酸；层粘连蛋白；Ⅲ型前胶原；Ⅳ型胶原

【中图分类号】R657.3+1【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2009)08-0006-02

Effects of Dihydromyricetin on the content of ALT, AST, HA, LN, PC-Ⅲ, CⅣ in serums

on hepatic fibrosis in rats

KUANG Manyuan, JIA Lei, LUO Mingying

（Department of Anatomy Xiangnan Medical College, Chenzhou, 423000, China）

【Abstract】 Objective: To observe the effects of dihydromyricetin on the content of ALT, AST, HA, LN, PC-Ⅲ, CⅣ in serums on hepatic fibrosis in rats induced by carbon tetrachloride(CCL4). Methods: Eighty four male SD rats were randomly divided into six groups: normal group, model group, Fufangbiejiaruanganpian group positive, lower, middle and high dosage of dihydromyricetin treatment groups. The hepatic fibrosis rat model was developed by subcutaneous injection of 40%CCL4 for 13 weeks. At the same time of modeling, rats were treated with dihydromyricetin at 25mg/100g, 50mg/100g or 100mg/100g.Then the content of ALT, AST, HA, LN, PC-Ⅲ, CⅣ were detected in liver serums. Results: Compared with control group, the content of ALT, AST, HA, LN, PC-Ⅲ, CⅣ in serums of rats of model group all raised markedly(P

【Keywords】Dihydromyricetin; Hepatic fibrosis; alanine aminotransferase; aspartate aminotransferase; hyaluronic acid; laminin; recollege Ⅲ; collagen type Ⅳ

藤茶系葡萄科蛇葡萄植物显齿蛇葡萄（Ampelopsis grossedentala）的茎叶，具有消炎止咳、清热解毒、消脂、抗高血压等作用[1]，是一种集营养、保健和药理为一体的极有开发价值的药食两用植物[2]。化学研究表明，藤茶黄酮类有效成分含量高达30%以上[3]，二氢杨梅素作为黄酮类成分中的重要一员，大量存在于显齿蛇葡萄中，在幼嫩茎叶中含量达27%～28%，最高部位可达40%以上[4]。在前期研究中，我们针对藤茶的有效成分总黄酮进行了实验研究，发现藤茶总黄酮对大鼠肝纤维化有较好的防治作用[5,6]。本研究观察了藤茶提取物二氢杨梅素对实验性肝纤维化大鼠肝功能及肝纤维化指标的影响。

1材料与方法

1.1实验动物SD雄性大鼠84只，体重180-220g，由南华大学医学院实验动物学部提供。

1.2药品与试剂二氢杨梅素，白色结晶，由湖南中医药大学药学院中药化学教研室提供；复方鳖甲软肝片由内蒙古福瑞中蒙药科技股份有限公司生产；CCL4分析纯购自天津市北宏试剂厂；ALT、AST测定试剂盒购自宁波慈城生物试剂有限公司；HA、LN、PC-Ⅲ、CⅣ放射免疫试剂盒购自北京北方生物技术研究所。

1.3动物分组及处理84只雄性SD大鼠随机分为6组：正常对照组（A组）、模型组（B组）、复方鳖甲阳性对照组（C组）和二氢杨梅素低、中、高剂量组（D、E、F组），每组14只。正常对照组正常喂养，仅每日与模型组予以同体积的生理盐水灌胃。模型组、复方鳖甲组和二氢杨梅素各剂量组予以40％CCL4橄榄油（将CCL4与橄榄油按体积4：6配成40%油剂），首剂0.5ml/100g，以后0.3ml/100g，每周2次皮下注射，共13周。造模的同时，二氢杨梅素低、中、高剂量组分别予以二氢杨梅素25mg/100g、50mg/100g、100mg/100g体重灌胃干预，每次灌胃前将二氢杨梅素以生理盐水分别配制成25mg/ml、50mg/ml、100mg/ml浓度的混悬液，每日1次，共13周。复方鳖甲阳性对照组将复方鳖甲软肝片原药研磨成粉末，按100mg/ml的浓度与生理盐水配成混悬液，每次按体重100mg/100g灌胃，每日1次，共13周。

1.4检测指标造模13周后大鼠处死前禁食12小时，称重后经腹腔注射10%水合氯醛溶液麻醉并固定，体外心脏采血6ml，分离血清于-20℃冰箱保存。全自动生化分析仪检测血清ALT、AST；放射免疫法测定血清HA、LN、PCⅢ、CⅣ。

1.5统计学方法实验数据采用SPSS13.0软件处理，以均数±标准差（±s）表示，采用单因素方差分析，组间比较采用LSD-t检验，以P

2结果

2.1各组大鼠一般情况正常组大鼠一般状态良好，毛发整齐有光泽，活动如常，饮食正常，体重增长正常；模型组大鼠随着时间的延长，CCL4注射量的增加，活动逐渐减少，变得好斗易怒，毛发蓬乱脱落且光泽暗淡，精神萎靡，摄食减少，体重增长缓慢；复方鳖甲治疗对照组大鼠精神、活动、毛色、饮食体重等都较模型组好；而二氢杨梅素干预组随着给药天数的增加，模型组的大鼠症状也逐渐得到改善，其中高剂量组的改变尤为明显，情况接近于复方鳖甲治疗组。至实验结束时，模型组、复方鳖甲组及二氢杨梅素低、中、高剂量治疗组大鼠分别死亡5、2、3、4、2只，正常组大鼠无死亡。

2.2各组大鼠血清ALT和AST的检测结果见表1。

2.3各组大鼠血清HA、LN、PC-Ⅲ、CⅣ的检测结果表2。

3讨论

血清学的检测是反映肝纤维化程度的重要指标。常用的血清肝纤维化指标有HA、LN、IPC-III、ⅣC等。HA主要由肝脏内皮细胞摄取分解，慢性肝病时，HA随着肝纤维化的加重或好转而升降，血窦内皮细胞功能低下时HA升高更为明显。研究认为，HA可以反映肝脏的损伤程度和肝纤维化的发展变化，是诊断慢性病毒性肝炎及酒精性肝病临床实用价值最高的一个指标。LN属非胶原蛋白类，是基底膜的主要成分，慢性肝病时，肝脏内皮细胞和星状细胞合成LN增加，且血清中LN随肝纤维化程度的加重而升高。PC-III为反映肝脏纤维增生的指标，它与肝纤维程度呈正相关。肝纤维化时，肝内主要为前胶原蛋白合成和沉积增加，血清PCPC-III能可靠地反映肝纤维化的活动程度，同时与肝脏炎症、坏死有关，其水平随肝纤维化程度的加重而升高。ⅣC是基底膜骨架的主要胶原成分，在肝脏内合成和代谢，在慢性肝纤维化的发展过程中，肝组织ⅣC过量合成，出现毛细血管化，使血液中的ⅣC含量异常增多，与肝纤维化程度密切相关。但上述肝纤维化指标为非肝脏特异性，它们只是反映胶原的代谢情况，并不能反映胶原沉积的多少，且受到肝外组织炎症、肝窦内皮功能、胆道排泌功能等的影响。联合多种指标进行检测，有望提高肝纤维化诊断的准确性。本实验联合测定血清ALT、AST、HA、LN、PC-III、ⅣC等指标，能较好地反映肝组织损伤、修复、肝纤化程度。我们的实验表明，二氢杨梅素各剂量组的ALT、AST水平较模型组有明显下降，能较好地改善肝功能，说明二氢杨梅素有显著的保肝护肝作用；同时二氢杨梅素能明显降低肝纤维化时升高的HA、LN、PC-III、ⅣC，提示二氢杨梅素有较好的治疗肝纤维化作用，且随着剂量的增加，该作用得到加强，在一定范围内具有剂量相关性。

参考文献

[1]兰成生,蓝树彬.二氢杨梅素研究进展[J].中国民族民间医药,2008,17(12):18-21

[2]熊皓平,何国庆,杨伟丽,等.显齿蛇葡萄生化成分分析[J].中国食品学报,2004,4(3):68-71

[3]何桂霞,何群,裴刚,等.瑶族藤茶中黄酮类成分的含量测定[J].湖南中医药导报,1999,5(12):30-31

[4]何桂霞,裴刚,周天达,等.显齿蛇葡萄中总黄酮和二氢杨梅素的含量测定[J].中国中药杂志,2000,25(7):423-425

[5]邝满元,王岐本,李映菊,等.藤茶总黄酮对大鼠肝纤维化的防治作用[J].现代生物医学进展,2008,8(12):2445-2447

[6]邝满元,刘映霞,李映菊,等.藤茶总黄酮抗大鼠肝纤维化的作用[J].南华大学学报医学版,2008,36(6):745-747

(收稿日期：2009.03.16)